Pour la récupération de l’EPF à partir de la bibliothèque fongique, commencez par étaler les isolats fongiques sur une plaque SDA d’un quart de force. Incubez-le dans l’obscurité à 25 degrés Celsius pendant 10 à 14 jours avant la récolte des conidies. Ensuite, pipeter 2 à 3 mL de 0,03 % Tween 80 sur une plaque de culture.
Ensuite, utilisez une boucle d’inoculation pour gratter les conidies. Ensuite, transférez la suspension fongique dans un tube à centrifuger. Agitez vigoureusement la suspension à la vitesse la plus élevée, puis pipetez un échantillon dans un hémocytomètre pour compter le nombre de conidies.
Diluer les conidies à l’intérieur de la suspension en utilisant 0,03 % entre 80 jusqu’à l’obtention de la concentration désirée. Pour préparer la chambre d’inoculation, découpez d’abord un disque de feuilles de 9 centimètres de diamètre en utilisant la boîte de Pétri inférieure comme moule ou avec des ciseaux. Ensuite, préparez de l’agar-agar à 1,5 % d’eau pour chaque plat à l’aide d’un micro-ondes.
Versez 30 mL de gélose à l’eau refroidie dans la boîte de Pétri et laissez-la se solidifier dans une hotte à flux laminaire. Lorsque la surface de la gélose est semi-solide, placez le disque foliaire avec sa surface abaxiale vers le haut, puis appuyez légèrement dessus pour l’incruster dans la gélose. Maintenant, placez 20 adultes aptères sur le disque foliaire.
Ouvrez le couvercle de la chambre d’inoculation pour pulvériser 0,3 mL de suspension de conidies directement sur les pucerons et le disque foliaire. Une fois la suspension sèche, fermez le couvercle pour éviter la noyade des pucerons de la moutarde. Par la suite, scellez la chambre d’inoculation à l’aide d’un film de paraffine pour maintenir un taux d’humidité élevé.
Placez la chambre dans un incubateur réglé à une température de 25 degrés Celsius avec une photopériode claire et foncée de 12 heures chacune. À l’aide d’un stéréomicroscope, comptez la mortalité toutes les 12 heures pendant 5 jours. Le dépistage de la virulence a révélé un taux de survie constant pour les pucerons de la moutarde, le groupe témoin affichant un taux de survie de 85 %.
Cordyceps cateninnulata a démontré la capacité de destruction de pucerons la plus rapide, ce qui a entraîné des moralités de 50 % et 90 % à 3 jours et 4,5 jours après l’inoculation, ou DPI. Les souches 141, 143 et 153 de Beauveria ont montré des capacités lentes de destruction des pucerons avec seulement 5 % de mortalité à 3 DPI. À l’exception de Purpureocillium, la plupart des isolats d’EPF présentaient des taux de mortalité corrigés supérieurs à 70 % dans les 5 DPI.
Beauveria bassiana a démontré le taux de mortalité le plus élevé de 100 % parmi les isolats d’EPF. Une mycose EPF a été observée sur des cadavres de pucerons de la moutarde infectés par les espèces Metarhizium, Beauveria, Purpureocillium lilacinum et Cordyceps cateniannulata lors du criblage de virulence.
