Pour commencer, ajoutez 200 microlitres d’inoculum bactérien dans chaque puits d’une plaque de polystyrène stérile à 96 puits. Ajoutez ensuite 200 microlitres d’eau déminéralisée dans les puits les plus externes pour empêcher les puits intérieurs de se dessécher. Incuber la plaque à 96 puits à 25 degrés Celsius pendant 24 heures.
Après l’incubation, jeter le surnageant dans chaque puits à l’aide d’une pipette. Ajoutez délicatement 300 microlitres de PBS dans chaque puits et retirez à nouveau le PBS à l’aide de la pipette. Ajouter 200 microlitres de solution violette cristalline à 1 % dans chaque puits avant d’incuber la plaque à température ambiante pendant 30 minutes.
Ensuite, après avoir distribué 200 microlitres d’éthanol absolu dans chaque puits, laissez la plaque pendant 15 minutes à température ambiante. Assurez-vous de bien mélanger en pipetant le contenu de chaque puits de haut en bas à plusieurs reprises. À l’aide d’un lecteur de microplaques, mesurez l’absorbance des puits à 595 nanomètres pour déterminer la masse du biofilm.
Le nombre de biofilms variait considérablement selon les souches, allant d’une densité optique ou d’une valeur OD de 0,04 à 1,69 Tous les isolats d’Acetobacter, à l’exception d’A. bouvetii, formaient des biofilms, tandis que A. radioresistens formait un biofilm faible. A. junii et A. baumannii ont formé des biofilms modérés, et A. pittii et A. ursingii ont formé des biofilms forts.
