Pour commencer le processus de préparation de l’inoculum bactérien, prélevez 2 à 10 microlitres de la souche bactérienne du flacon, à l’aide d’un embout de pipette stérile, et inoculez une plaque de gélose sanguine disponible dans le commerce avec. À l’aide d’une boucle stérile, striez la surface de la gélose en l’éclaircissant avec un flambage intermittent. Incubez la plaque de gélose préparée à l’envers à 30 degrés Celsius pendant environ 20 à 24 heures.
Ensuite, sélectionnez une seule colonie de la culture bactérienne avec une aiguille stérile et inoculez cinq millilitres de bouillon BHI stérile avec cette culture. Incuber le bouillon inoculé dans un incubateur à agitation à 30 degrés Celsius à une vitesse de 150 rotations par minute pendant environ 20 à 24 heures. Transférez ensuite un millilitre de culture dans un tube de micro-centrifugation stérile et centrifugez à 6 000 g et à température ambiante pendant 10 minutes.
Après la centrifugation, jeter le surnageant. Ajoutez un millilitre de solution saline stérile tamponnée au phosphate, ou PBS, à la pastille et mettez-la en suspension à l’aide d’un vortex. Centrifuger la pastille remise en suspension à 6 000 g pendant 10 minutes à température ambiante et jeter le surnageant.
Cette fois, remettez en suspension la pastille résultante dans un bouillon BHI stérile et dilué dix fois à l’aide d’un vortex. Assurez-vous d’atteindre une densité optique d’environ 0,1 à 600 nanomètres.