Après avoir préparé la souris à la chirurgie, identifiez la zone cible, à sept millimètres à gauche du sternum et à environ sept millimètres au-dessus du bord sous-costal. Soulevez la peau sur la zone identifiée à l’aide d’une pince et faites une incision circulaire de 10 millimètres à l’aide de ciseaux de micro-dissection tranchants pour couper uniquement la peau. Retirez ensuite les tissus mous au-dessus de la cage thoracique et cautérisez les principaux vaisseaux sanguins aux deux extrémités à l’aide d’un stylo de cautérisation.
Élevez la sixième ou la septième côte avec une pince et utilisez une seule lame des ciseaux de micro-dissection émoussés pour percer le muscle intercostal. Maintenant, faites tourner doucement les ciseaux et faites une incision d’environ 10 millimètres dans l’espace intercostal tout en évitant le contact avec le tissu pulmonaire et les côtes. Libérez délicatement l’air comprimé au niveau du poignet ou de la main pour déterminer la force d’écoulement appropriée et débarrasser la buse des débris.
Appliquez ensuite de courtes bouffées d’air sur l’incision pour éviter de causer des lésions pulmonaires. À l’aide de la pince, soulevez la sixième ou la septième côte et insérez l’écarteur dans l’incision intercostale avec des lames parallèles à la paroi thoracique. Relâchez ensuite la poignée avec précaution pour laisser l’écarteur s’ouvrir et révéler le poumon progressivement.
Appliquez maintenant deux à trois gouttes de PBS stérile chauffé à 37 degrés sur le tissu pulmonaire exposé pour l’empêcher de se dessécher. Superposez un morceau de papier d’aluminium avec une petite découpe sur la souris, en le positionnant directement sur le tissu pulmonaire exposé. Assurez-vous que la découpe ne montre que le thorax ouvert et le tissu voisin pour une conversion ciblée de la photo pulmonaire.
Ensuite, placez une boîte avec une découpe sur la souris et du papier d’aluminium, en vous assurant que la découpe s’aligne avec le poumon exposé. Et placez la lampe de conversion photo directement au-dessus de la découpe sur la boîte. Activez ensuite la lampe de photoconversion pour éclairer le tissu pulmonaire exposé pendant une période continue de six minutes.
Après la conversion de la photo, éteignez la lampe et retirez le boîtier de la lampe et le masque en papier d’aluminium de la souris. Séparez le poumon de la paroi thoracique en évacuant l’air au niveau du poignet, puis évacuez l’air au niveau de l’incision thoracique. Saisissez fermement la poignée de l’enrouleur et pressez-la pour fermer les lames.
Manœuvrez avec précaution l’écarteur fermé hors de l’espace intercostal, en veillant à ne pas entrer en contact avec le tissu pulmonaire. Utilisez ensuite la suture en soie 5-0 pour fermer l’incision intercostale avec un simple motif de suture continu, en veillant à ce que la côte des deux côtés de l’incision soit incorporée. Tirez fermement sur la suture pour vous assurer que les bords de la plaie s’alignent, rétablissant ainsi l’intégrité de la paroi thoracique.
Fixez la suture en nouant l’extrémité quatre fois. Coupez les queues de suture aussi près que possible du nœud et fermez la peau à l’aide d’agrafes chirurgicales. Pour éliminer l’excès d’air de la cavité thoracique, insérez une seringue d’un millilitre avec une aiguille de calibre 28 sous le processus xiphoïde.
Ramenez la seringue à environ un millilitre. Retirez la seringue de la souris et évacuez l’air. Des images de Dendra2 exposé exprimant des métastases pulmonaires avant l’exposition à la lumière bleue sont montrées.
L’exposition de Dendra2 exprimant des métastases pulmonaires à la lumière bleue a montré qu’une exposition de six minutes produisait le signal le plus brillant dans le canal photoconverti dans les échantillons ex vivo et in vivo. Des cellules photoconverties et non photoconverties ont été identifiées dans les trois types de tissus de souris ayant subi une intervention chirurgicale avec exposition à la lumière bleue. Seules des cellules tumorales non photoconverties ont été trouvées dans les tissus de souris qui ont subi une intervention chirurgicale sans exposition à la lumière bleue.
