Optimisation de la visualisation du transport axonal de la cargaison endogène par microscopie à fluorescence chez Caenorhabditis elegans vivant

Le démarrage classique est couramment utilisé pour les protéines de transport axonal pour la visualisation du transport axonal, mais le comportement de la cargaison endogène diffère. Les niveaux de protéines endogènes sont faibles, ce qui rend la visualisation difficile. Nous proposons des idées pour optimiser les conditions d’acquisition pour une meilleure visualisation du GPR3 endogène, qui marque les précurseurs vasculaires synaptiques.

L’abondance de protéines cytosoliques dans le champ de transport axonal rend difficile la visualisation de leur dynamique à l’aide de la microscopie à fluorescence conventionnelle. Ce protocole suggère d’utiliser l’étape d’ablation, ainsi que des approches de marquage contrôlées dans le temps pour surmonter ces défis. Nous avons récemment pu visualiser le transport axonal du spectre endogène.

En optimisant les paramètres d’acquisition décrits dans ce protocole, nous avons apparié notre approche d’étiquetage de contrôle temporel. Cela nous a permis d’identifier les premiers composants de la machinerie qui servent de médiateur au transport.