Pour commencer, placez un sac scellé contenant des billes de lectine séchées congelées sur un banc à température ambiante. Placez un chiffon antistatique sur le bureau, puis placez l’éliminateur d’électricité statique portable face à l’espace de travail. À l’aide d’une pince à épiler antistatique, insérez les billes dans une pointe vide de sorte que deux perles d’espacement soient placées entre les billes fixées de lectine.
À l’aide d’une pince, pressez doucement le haut de l’embout et fermez l’ouverture. Redressez manuellement la pointe si elle est pliée. Ensuite, rangez-le dans un sac scellé avec un déshydratant à quatre degrés Celsius jusqu’à ce que vous en ayez besoin.
Ajouter environ 10 microlitres de la solution protéique de l’analyte dans un tube contenant 10 microgrammes de réactif de biotinylation séché. Vortex le mélange pour bien mélanger. Ensuite, centrifugez-le à 1000 G pendant cinq secondes à température ambiante.
Incuber les tubes pendant une heure à température ambiante à l’abri de la lumière. Ajoutez maintenant 90 microlitres de tampon de sonde aux échantillons pour le diluer dix fois avant l’incubation. Ouvrez la porte avant de l’appareil de mesure de réaction automatisé.
Transférez les réservoirs de liquide, les pointes préparées et les analytes dans les positions désignées dans l’appareil. Allumez l’interrupteur d’alimentation de l’unité principale d’un appareil de mesure de réaction automatisé. Appuyez sur le bouton Démarrer le diagnostic affiché à l’écran.
Appuyez sur Assay sur l’écran d’accueil pour sélectionner le protocole. Sélectionnez maintenant l’option BAssaySTD de la méthode de dosage et appuyez sur Suivant. Entrez les noms des échantillons et appuyez sur Suivant.
Entrez ensuite les noms des conseils et appuyez à nouveau sur Suivant. Confirmez les notes sur la droite, puis appuyez sur Démarrer pour commencer la mesure. Confirmez l’écran, passez en mode d’exécution et attendez que la flèche Finaliser soit mise en surbrillance.
L’écran passe en mode résultat lorsque la mesure est terminée. Insérez une clé USB dans le port situé sur le côté de l’unité principale. Appuyez sur Exporter en mode résultat pour enregistrer les données sous forme de fichier CSV afin d’une analyse plus approfondie des données et de graphiques individuels dans Excel.
Une différence nette dans le modèle de liaison des lectines par rapport aux 12 sucres polyacrylamides a été observée. Les produits protéiques purifiés qui ont été soumis à la mesure de la pointe ont montré une réactivité accrue de certaines lectines aux saccharides.
