Stimulation et incubation d’échantillons de sang total pour l’analyse spécifique de l’antigène de l’immunité de l’hôte contre les agents pathogènes fongiques et viraux

Pour commencer, préparez des tubes de prélèvement sanguin de 2,7 millilitres sans anticoagulant, avec des antigènes et des anticorps co-stimulateurs dans des conditions stériles. Ajoutez de l’anti-CD28 et de l’anti-CD49d dans chaque tube, y compris le contrôle négatif. S’ils sont congelés, décongelez les tubes de stimulation prêts à l’emploi à température ambiante environ 30 à 60 minutes avant la stimulation par sang total.

Prélever le sang veineux du donneur ou du patient à l’aide de tubes de prélèvement sanguin contenant un anticoagulant à l’héparine de lithium. Pipetez la quantité requise de sang total hépariné dans les tubes de stimulation sous un établi stérile. Retournez soigneusement les tubes environ 5 à 10 fois.

Ensuite, placez les tubes dans un incubateur à 37 degrés Celsius. Après quatre heures d’incubation, préparer une solution d’un milligramme par millilitre de brefeldin A dans un milieu RPMI. Dans un établi stérile, déboucher les tubes utilisés pour l’analyse cytométrique en flux.

Transférez ensuite 1% du volume de l’échantillon de la solution de brefeldine A dans le tube de stimulation. Incuber les tubes bouchés à 37 degrés Celsius pendant encore 16 à 18 heures.