Dosage du sang total avec double costimulation pour l’analyse spécifique de l’antigène de l’immunité de l’hôte contre les agents pathogènes fongiques et viraux

Nos recherches portent sur le suivi immunitaire des patients en unité de soins intensifs. Certains patients développent une pneumonie virale sévère pendant la ventilation mécanique. Nous isolons la cause des virus, mais caractérisons également la réponse immunitaire locale et systémique à l’aide du protocole présenté dans cette vidéo pour identifier les facteurs de risque immunologiques.

Les dosages traditionnels des lymphocytes T spécifiques de l’antigène qui sont basés sur des cellules mononucléées isolées sont très sensibles aux facteurs de confusion pré-analytiques, nécessitent beaucoup de temps et de ressources et nécessitent de grandes quantités de sang. Cela pose de sévères limites à la mise en œuvre de tests de lymphocytes T spécifiques de l’antigène dans la recherche clinique ou l’utilisation en routine clinique comme biomarqueurs pronostiques ou diagnostiques. Nous présentons un protocole d’immunodosage polyvalent, qui s’adapte à diverses lectures en aval à partir d’aussi peu que 250 micros de sang par stimulus.

Cela permet des applications, même lorsque ce volume est limité ou que plusieurs antigènes doivent être criblés. De plus, notre test est facile à réaliser et se prête à plusieurs agents pathogènes. En plus de sa polyvalence et du faible volume sanguin requis, notre protocole a été utilisé comme environnement de stimulation qui a été soigneusement et spécifiquement optimisé pour les réponses des cellules T auxiliaires induites par l’antigène.

Cela a été réalisé grâce à une stimulation à double noyau, qui rend également le protocole plus robuste envers les facteurs de confusion, tels que la pharmacothérapie immunosuppressive ou les retards pré-analytiques. Nous utilisons ce protocole pour la surveillance immunitaire des patients atteints de pneumonie virale associée à la ventilation. Nos collaborateurs de Wuerzburg et de Houston travaillent sur une traduction clinique d’immunoessais spécifiques au cytomégalovirus.

De plus, ils utilisent ce protocole pour des études sur l’immunopathogenèse fongique et des études d’immunothérapie précliniques dans des modèles murins pour les infections opportunistes.