Culture et entretien in vitro des nématodes du pin à l’aide de Botrytis cinerea

Pour commencer, transférez un bouchon de culture de botrytis cinerea du bord extérieur de la colonie sur une plaque de tarière stérile en dextrose de pomme de terre. Incuber la plaque à 25 degrés Celsius pendant sept à 10 jours, ou jusqu’à ce que la colonie fongique atteigne le bord de la plaque. Culture B cinerea dans des grains d’orge stérilisés à la vapeur, hydratés et certifiés biologiques pendant sept à 10 jours.

Ou jusqu’à ce que la surface de la céréale soit complètement colonisée. Ensuite, inoculez la culture de B cinerea avec une suspension de nématode Pinewood. Incuber le ballon dans l’obscurité pendant sept à 10 jours, ou jusqu’à ce que la colonie fongique soit complètement consommée et que le nématode grimpe sur les parois du ballon.

Pour isoler les nématodes du pin, rincez les parois du ballon à l’eau du robinet. Versez ensuite le contenu sur une serviette en papier, placée dans un entonnoir ou un plateau Baermann, et plongez les nématodes dans l’eau. Après 24 à 48 heures, récupérez les nématodes à l’aide d’un tamis à mailles de 38 micromètres.

Lavez les nématodes accumulés dans un récipient avec de l’eau du robinet. À l’aide de cette méthodologie, la population de nématodes Pinewood a été multipliée par 100 au cours d’une période de croissance de huit jours.