Processus d’infection in vivo de semis de Pinus pinaster avec des nématodes de pin

Pour commencer, réglez les suspensions de nématodes du pin à 1000 nématodes par millilitre. Comptez les nématodes sur une lame concave sous le microscope binoculaire avec un grossissement allant jusqu’à 40x. Avant d’inoculer les nématodes, retirez manuellement les aiguilles d’une section sous les cinq centimètres supérieurs de la tige de pin et faites une incision longitudinale superficielle à l’aide d’un scalpel stérilisé.

Au niveau de la zone de blessure, placez un morceau de coton stérilisé pour contenir 0,5 millilitres de suspension de nématodes du pin, et fixez-le avec une bande transparente pour maintenir l’humidité. Maintenez la serre dans des conditions humides et arrosez fréquemment. Suivez régulièrement la progression de la maladie du flétrissement du pin et notez la symptomatologie en quantifiant le pourcentage d’aiguilles décolorées et flétries.

20 jours après l’inoculation, coupez les plantules à la base de la tige pour l’extraction des substances volatiles. Placez les semis dans des sacs en papier brun et congelez-les à moins 20 degrés Celsius. L’infection réussie des semis de pin par le nématode du pin a entraîné des symptômes de flétrissement du pin environ 20 jours après l’infection.