Pour commencer, à l’aide d’un compte-gouttes, plaquez 250 graines d’Arabidopsis pour chaque groupe d’affections sur du papier filtre placé sur une plaque de gélose Murashige et Skoog Basal Media sans saccharose, complétée par 1,2% de phyto agar. Enveloppez la plaque avec du papier d’aluminium pour bloquer la lumière et placez-la dans un incubateur à quatre degrés Celsius pendant deux jours pour induire la vernalisation. Après deux jours, déballez le papier d’aluminium et transférez les graines vernalisées dans une chambre de croissance.
Laissez les plantes pousser pendant cinq jours. Ensuite, scellez la plaque contenant les plants de cinq jours avec du ruban adhésif imperméable. Placez la plaque dans un bain-marie à 40 degrés Celsius pendant une heure pour le traitement du stress thermique.
Immédiatement après le traitement thermique, refroidissez la plaque et transférez-la dans une chambre de croissance réglée à 22 degrés Celsius pendant deux heures pour permettre la récupération. Récoltez 250 semis traités thermiquement ou non dans des tubes de microcentrifugation de 1,5 millilitre. Congelez immédiatement les échantillons collectés dans de l’azote liquide.
Préparez la solution de gradient de saccharose avec des concentrations de 12,5 %24,4 %, 36,3 %48,1 % et 60 %Pour préparer un gradient de densité de saccharose discontinu, chargez d’abord 2,2 millilitres de solution de saccharose à 60 % au fond du tube. Ensuite, placez le tube dans un congélateur à 80 degrés Celsius pour congeler la solution de saccharose à l’état solide. Après solidification, chargez 2,2 millilitres de chacune des autres concentrations de saccharose dans la série de bas en haut.
Conservez le gradient de saccharose préparé à 80 degrés Celsius jusqu’à utilisation.
