Ce travail a été soutenu par une surdité Research Foundation Research Grant de EY et NIDCD DC006476 à EG et par NIDCD DC005211 au Centre pour l&#39;ouïe et l&#39;équilibre, l&#39;Université Johns Hopkins. Oeuvre d&#39;auteur Tim Phelps, Johns Hopkins University. LG a écrit le manuscrit initial, EY et LG a filmé la dissection et l&#39;enregistrement. Tous les auteurs ont fourni des chiffres exemplaire et a contribué à la rédaction du manuscrit.

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	<li>Glowatzki, E., Fuchs, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmitter+release+at+the+hair+cell+ribbon+synapse.">Transmitter release at the hair cell ribbon synapse.</a> Nat Neurosci. 5 (2), 147-154 (2002).</li><li>Goutman, J. 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P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+a+potassium+current+in+inner+hair+cells+during+development+of+hearing+in+mice.">Expression of a potassium current in inner hair cells during development of hearing in mice.</a> Nature. 394 (6690), 281-284 (1998).</li><li>Muller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+changes+of+frequency+representation+in+the+rat+cochlea.">Developmental changes of frequency representation in the rat cochlea.</a> Hear Res. 56 (1-2), 1-7 (1991).</li><li>Seal, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensorineural+deafness+and+seizures+in+mice+lacking+vesicular+glutamate+transporter+3.">Sensorineural deafness and seizures in mice lacking vesicular glutamate transporter 3.</a> Neuron. 57 (2), 263-275 (2008).</li></ol>

L&#39;étape cruciale dans cette procédure est la dissection. Si le tissu est étiré ou endommagés lors de la dissection, les fibres afférentes ne survivra pas. Tissu de jeunes rats est plus élastique et indulgent. Nous trouvons que les jours postnataux 10 à 11 sont plus faciles à décortiquer et des expériences ont des taux de réussite plus élevé. Un degré significatif de la maturation cochléaire survient après la naissance, avec les rats commencent à entendre de partout jour postnatal 12 14. Par conséquent, à l&#39;âge où la dissection est plus facile, les synapses peuvent ne pas être en pleine maturité 4. La dissection décrite ici pour le rat est essentiellement le même pour les souris, la principale différence étant la plus petite taille de la cochlée de souris. Cette technique permet aux propriétés des synapses ruban pour être examinés dans des souris transgénique modifié 15. D&#39;autres modifications à cette technique sont: l&#39;ajout d&#39;un colorant fluorescent à la solution intracellulaire aux fibres étiquette 3; enregistrements jumelé avec la cellule ciliée interne pré-et postsynaptiques bouton afférents, permettant à la fonction de transfert entre pré et post-synaptiques des cellules à déterminer 2 et lâche- joint enregistrements extracellulaires à boutons afférentes pour éviter la perte de l&#39;intégrité cellulaire. La configuration d&#39;enregistrement extracellulaire est plus facile à atteindre que la configuration cellule entière et les expériences sont généralement plus durables.

Ci-dessus, l&#39;équipement de nos configurations électrophysiologiques utilisées pour l&#39;enregistrement des terminaisons afférentes.

postsynaptic recordings at afferent dendrites contacting cochlear inner hair cells: monitoring multivesicular release at a ribbon synapse

La synapse afférente entre les cellules ciliées internes (IHC) et la fibre du nerf auditif donne une place électrophysiologiquement accessible pour l&#39;enregistrement de l&#39;activité postsynaptique de la synapse un seul ruban 1-4. Synapses ruban de cellules sensorielles libération du neurotransmetteur en continu, dont le taux est modulé en réponse aux changements notés dans le IHC potentiel de membrane 5. Synapses à ruban ont été montré pour fonctionner par voie de communiqué multivésiculaires, où de multiples vésicules peuvent être libérés simultanément pour évoquer excitateurs courants postsynaptiques (EPSCs) de différentes amplitudes 1, 4, 6-11. Ni le rôle du ruban présynaptique, ni le mécanisme sous-jacent communiqué multivésiculaires est actuellement bien compris. L&#39;IHC est innervée par 10-20 fibres du nerf auditif, et tous les contacts de fibre l&#39;IHC avec un seul amyéliniques se termine pour former une synapse seul ruban. La petite taille de la CSI boutons afférentes contactant (environ 1 m de diamètre) permet des enregistrements avec une résolution temporelle exceptionnelle à faire. Par ailleurs, la technique peut être adaptée à enregistrer à partir de deux cellules pré-et post-synaptiques simultanément, permettant ainsi la fonction de transfert à la synapse à être étudiés directement 2. Cette méthode offre donc un moyen par lequel les aspects fondamentaux de la neurotransmission peut être étudiée, d&#39;une libération multivésiculaires à la fonction insaisissable du ruban dans les cellules sensorielles.

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Postsynaptic Recordings at Afferent Dendrites Contacting Cochlear Inner Hair Cells: Monitoring Multivesicular Release at a Ribbon Synapse

Whole-cell patch-clamp enregistrements de dendrites auditives fibres nerveuses au niveau des synapses du ruban des cellules ciliées internes de la cochlée de mammifère.

Enregistrements postsynaptiques au dendrites afférentes Contacter cochléaires cellules ciliées internes: Communiqué multivésiculaires surveillance à une synapse ruban

The afferent synapse between the inner hair cell (IHC) and the auditory nerve fiber provides an electrophysiologically accessible site for recording the ...

postsynaptic-recordings-at-afferent-dendrites-contacting-cochlear

Research

JoVE Journal

Neuroscience

18.3K vues.  The Johns Hopkins School of Medicine. Whole-cell patch-clamp enregistrements de dendrites auditives fibres nerveuses au niveau des synapses du ruban des cellules ciliées internes de la cochlée de mammifère.