Questo lavoro è stato supportato da una ricerca sordità Research Foundation Grant a EY e dell&#39;NIDCD DC006476 di EG e dell&#39;NIDCD DC005211 al Centro per l&#39;udito e l&#39;equilibrio, Johns Hopkins University. Opere d&#39;arte d&#39;autore Tim Phelps, Johns Hopkins University. LG ha scritto il manoscritto iniziale; EY e LG girato la dissezione e la registrazione. Tutti gli autori hanno fornito dati esemplare e ha contribuito alla stesura del manoscritto.

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	<li>Glowatzki, E., Fuchs, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmitter+release+at+the+hair+cell+ribbon+synapse.">Transmitter release at the hair cell ribbon synapse.</a> Nat Neurosci. 5 (2), 147-154 (2002).</li><li>Goutman, J. 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Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Il passo cruciale in questa procedura è la dissezione. Se il tessuto è allungato o danneggiati durante la dissezione, fibre afferenti non sopravviverà. Tessuti più giovani ratti è più elastica e perdonare. Troviamo che giorno dopo la nascita 10 a 11 sono più facili da analizzare e gli esperimenti hanno percentuali di successo superiori. Un significativo grado di maturazione cocleare si verifica dopo la nascita, con i ratti iniziano a sentire da circa 12 14 giorni dopo la nascita. Pertanto, l&#39;età in cui la dissezione è più facile, sinapsi potrebbero non essere completamente maturo 4. La dissezione qui descritto per i ratti è essenzialmente lo stesso per i topi, la differenza principale è la dimensione più piccola della coclea mouse. Questa tecnica permette di proprietà delle sinapsi nastro da esaminare in topi modificati transgenically 15. Ulteriori modifiche a questa tecnica sono: l&#39;aggiunta di un colorante fluorescente alla soluzione intracellulare alle fibre etichetta 3; registrazioni in coppia con la cellula presinaptica ciliate interne e post-sinaptici afferenti Bouton, che consente la funzione di trasferimento tra le cellule pre e post sinaptica da determinare 2 e loose- sigillo registrazioni extracellulari a boutons afferenti per evitare la perdita di integrità cellulare. La configurazione di registrazione extracellulare è più facile da raggiungere rispetto alla cellula intera configurazione e gli esperimenti sono in genere più durevole.

È al di sopra delle attrezzature messe a punto nel nostro elettrofisiologici utilizzato per la registrazione da terminali afferenti.

postsynaptic recordings at afferent dendrites contacting cochlear inner hair cells: monitoring multivesicular release at a ribbon synapse

Le sinapsi afferenti tra la cellula ciliate interne (IHC) e la fibra di nervo uditivo fornisce un sito accessibile elettrofisiologico per la registrazione l&#39;attività postsinaptica di un singolo nastro sinapsi 1-4. Sinapsi nastro di cellule sensoriali rilascio dei neurotrasmettitori in continuo, il cui tasso è modulata in risposta ai cambiamenti classificati in IHC potenziale di membrana 5. Sinapsi nastro hanno dimostrato di operare con un comunicato multivescicolari, dove vescicole multiple può essere rilasciato contemporaneamente per evocare le correnti post-sinaptiche eccitatorie (EPSCs) di varia ampiezza 1, 4, 6-11. Né il ruolo del nastro presinaptico, né il meccanismo sottostante rilascio multivescicolari è attualmente ben compreso. L&#39;IHC è innervato da fibre del nervo uditivo 10-20, e tutti i contatti in fibra di IHC con un singolo amieliniche fine di formare una singola sinapsi nastro. Le piccole dimensioni del iHCS afferenti boutons contatto (circa 1 micron di diametro) permette le registrazioni con eccezionale risoluzione temporale da fare. Inoltre, la tecnica può essere adattata a registrare da entrambe le cellule pre-e post-sinaptici contemporaneamente, consentendo la funzione di trasferimento alla sinapsi da studiare direttamente 2. Questo metodo fornisce quindi un mezzo attraverso il quale gli aspetti fondamentali della neurotrasmissione può essere studiata, dalla versione multivescicolari alla funzione elusiva del nastro in cellule sensoriali.

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Postsynaptic Recordings at Afferent Dendrites Contacting Cochlear Inner Hair Cells: Monitoring Multivesicular Release at a Ribbon Synapse

Whole-cell patch-clamp registrazioni da dendriti delle fibre nervose uditivo interno alla sinapsi nastro capelli cellule nella coclea di mammifero.

Registrazioni postsinaptica a dendriti afferenti contattare cocleari cellule ciliate interne: Release multivescicolari monitoraggio a Synapse Ribbon

The afferent synapse between the inner hair cell (IHC) and the auditory nerve fiber provides an electrophysiologically accessible site for recording the ...

postsynaptic-recordings-at-afferent-dendrites-contacting-cochlear

Research

JoVE Journal

Neuroscience

18.3K Views.  The Johns Hopkins School of Medicine. Whole-cell patch-clamp registrazioni da dendriti delle fibre nervose uditivo interno alla sinapsi nastro capelli cellule nella coclea di mammifero.