Este trabalho foi financiado por um Surdez Research Foundation Research Grant para EY e NIDCD DC006476 para EG e por NIDCD DC005211 com o Centro de Audição e Equilíbrio, Johns Hopkins University. Arte copyright Tim Phelps, Johns Hopkins University. LG escreveu o manuscrito inicial; EY e LG filmado na dissecção e na gravação. Todos os autores forneceram valores exemplar e contribuiu para escrever o manuscrito.

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	<li>Glowatzki, E., Fuchs, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmitter+release+at+the+hair+cell+ribbon+synapse.">Transmitter release at the hair cell ribbon synapse.</a> Nat Neurosci. 5 (2), 147-154 (2002).</li><li>Goutman, J. 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Não há conflitos de interesse declarados.

O passo crítico neste procedimento é a dissecção. Se o tecido é esticado ou danificados durante a dissecção, fibras aferentes não vai sobreviver. Tecidos de ratos mais jovens é mais elástica e de perdão. Nós encontramos que os dias pós-natal 10-11 são os mais fáceis de dissecar e experimentos têm maiores taxas de sucesso. Um grau significativo de maturação coclear ocorre após o nascimento, com os ratos começam a ouvir de todo dia pós-natal 12 14. Portanto, na idade em que a dissecção é mais fácil, as sinapses podem não ser totalmente maduro 4. A dissecção descrita aqui para ratos é essencialmente o mesmo para os ratos, a principal diferença é o tamanho menor da cóclea do rato. Esta técnica permite que as propriedades de sinapses fita para ser examinado em camundongos modificados transgenicamente 15. Alterações posteriores a esta técnica são: a adição de um corante fluorescente para a solução intracelular para fibras rótulo 3; gravações emparelhado com o pré-sináptica das células ciliadas internas e bouton aferentes pós-sináptica, permitindo que a função de transferência entre pré e pós-sináptica de células a ser determinado 2 e loose- selo gravações extracelular em boutons aferentes para evitar a perda da integridade celular. A configuração de gravação extracelular é mais fácil de atingir do que toda a configuração de células e experimentos são geralmente mais duradouros.

Acima é o equipamento em nosso setups eletrofisiológico utilizado para a gravação dos terminais aferentes.

postsynaptic recordings at afferent dendrites contacting cochlear inner hair cells: monitoring multivesicular release at a ribbon synapse

A sinapse aferente entre a célula ciliadas internas (CCI) e da fibra do nervo auditivo fornece um site eletrofisiologicamente acessível para a gravação da atividade pós-sináptica de uma fita única sinapse 1-4. Sinapses fita de células sensoriais liberação de neurotransmissores de forma contínua, cuja taxa é modulada em resposta a mudanças graduais em IHC potencial de membrana 5. Sinapses fita foram mostrados a funcionar pelo lançamento multivesiculares, onde múltiplas vesículas pode ser lançado simultaneamente para evocar correntes excitatórias pós-sináptico (EPSCs), com diferentes amplitudes 1, 4, 6-11. Nem o papel da fita pré-sináptico, nem o mecanismo subjacente liberação multivesiculares está bem compreendida. O IHC é inervado por fibras do nervo auditivo 10-20, e todos os contatos de fibra da IHC com um único unmyelinated fim para formar uma fita única sinapse. O pequeno tamanho da IHCS aferentes boutons entrar em contato com (aproximadamente 1 m de diâmetro) permite gravações com resolução temporal excepcional para ser feita. Além disso, a técnica pode ser adaptada para gravar a partir de ambas as células pré e pós-sinápticos simultaneamente, permitindo que a função de transferência na sinapse a ser estudada diretamente 2. Este método, portanto, fornece um meio pelo qual os aspectos fundamentais da neurotransmissão pode ser estudada, de liberação multivesiculares para a função de esquiva da fita em células sensoriais.

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Postsynaptic Recordings at Afferent Dendrites Contacting Cochlear Inner Hair Cells: Monitoring Multivesicular Release at a Ribbon Synapse

Whole-cell patch-clamp gravações de dendritos do nervo auditivo fibra no interior da fita sinapse das células ciliadas da cóclea de mamíferos.

Gravações pós-sinápticos em Dendrites aferente entrar em contato com células ciliadas da cóclea: Release multivesiculares Monitoramento em uma fita Synapse

The afferent synapse between the inner hair cell (IHC) and the auditory nerve fiber provides an electrophysiologically accessible site for recording the ...

postsynaptic-recordings-at-afferent-dendrites-contacting-cochlear

Research

JoVE Journal

Neuroscience

18.3K visualizações.  The Johns Hopkins School of Medicine. Whole-cell patch-clamp gravações de dendritos do nervo auditivo fibra no interior da fita sinapse das células ciliadas da cóclea de mamíferos.