Ce travail a été soutenu par des subventions du gouvernement fédéral belge (PAI P6/28), la Fondation de la recherche-Flandre (FWO) (G.0565.07 et G.0686.09), la Fondation européenne Astellas Award 2009 et le Conseil de recherche de la KU Leuven (GOA 2009/07, EF/95/010 et PFV/10/006). PU et nous sommes doctorants de la Fondation de la recherche-Flandre (FWO). MB est un boursier Marie Curie. DDR un homme fondamental, clinique du FWO.

1. Animaux de laboratoire <ol><li> Animaux (souris, rats) sont logés dans une animalerie spécialisée avec un 12-hr cycle lumière-obscurité et l&#39;accès ad libitum à l&#39;eau et boulettes de nourriture standard. L&#39;âge et le sexe des animaux sont des paramètres importants qui devraient être normalisés en fonction des besoins. Nous effectuent généralement la cystomanométrie de 10 - 12 semaines les femelles âgées 5,6. </li><li> Toutes les expériences sur les animaux sont effectuées en conformité avec les directives de l&#39;Union européenne Conseil de la Communauté et approuvée par le comité d&#39;éthique local. </li></ol> 2. Anesthésie <ol><li> Anesthésie à l&#39;isoflurane est utilisé pour effectuer de petites interventions chirurgicales, car elle est facile à doser en raison de sa courte demi-vie. Effluents gazeux approprié balayage est nécessaire lorsque vous utilisez l&#39;isoflurane. <ol class="lalpha"><li> Les animaux sont placés dans une boîte fermée, gazé avec de l&#39;isoflurane 5% dans de l&#39;oxygène pur (1 l / min). </li><li> Après l&#39;induction de l&#39;anesthésie appropriée à la level est maintenue par un petit masque (une coupe seringue de 10 ml) de 0,8 - 1 l / min d&#39;oxygène avec 1 - 1,5% d&#39;isoflurane. </li></ol></li><li> Pour les souris, anesthésie à l&#39;uréthane est utilisé lors des enregistrements fonctionnels (cf. infra). Anesthésie à l&#39;uréthane est utilisé lors des enregistrements fonctionnels parce que, contrairement à la plupart des autres anesthésiques, le réflexe de miction n&#39;est pas supprimée par cet agent anesthésique 4. Uréthane 1,2 Poids g de corps / kg est administrée par voie sous cutanée (sc) 60 min avant le début des enregistrements. Si nécessaire, la dose d&#39;uréthane nécessaire pour obtenir une anesthésie appropriée peut être augmentée par l&#39;administration de doses supplémentaires (0,1 g / kg) par voie sous cutanée. Il convient de noter, cependant, que l&#39;anesthésie supplémentaire peut altérer l&#39;efficacité de la miction et par conséquent la fréquence de la miction 7,8. Ainsi, les enregistrements cystométriques doivent être étroitement surveillés et mis au rebut chaque fois que des écarts importants par rapport au comportement de contrôle sont respectées. Anesthésiques doit pas être administré tant que le testcomposés sont appliqués afin d&#39;éviter une mauvaise interprétation des données. </li></ol> 3. Procédure chirurgicale - Implantation sonde vésicale <ol><li> Les instruments chirurgicaux sont stérilisés à l&#39;autoclave avant de l&#39;utiliser. Raser l&#39;abdomen de l&#39;animal, désinfecter avec de l&#39;éthanol à 70% et d&#39;effectuer une laparotomie médiane bas pour exposer la vessie. </li><li> Sous un microscope chirurgical, placer une suture en bourse dans le dôme de la vessie à l&#39;aide d&#39;une suture non résorbable monofilament, (taille 6-0). </li><li> Effectuer une cystostomie petite (nous avons privilégié l&#39;utilisation d&#39;une aiguille de 18 G) à l&#39;intérieur de la chaîne de sac à main et insérer un cathéter en polyéthylène PE 50, avec un petit brassard à la fin (obtenu en chauffant avec précaution le tube) à travers ce trou. Dans nos mains, plus minces tubes PE (10) présentent une résistance élevée et plus variable. Le tube peut être désinfecté en le mettant dans une solution d&#39;éthanol à 70% ou stérilisé dans un autoclave. Avant l&#39;implantation, la tubulure doit être rincée avec une solution saline. </li><li> Fixez le sac strtion autour du tube avec un noeud de chirurgien. Tirez délicatement vers l&#39;extérieur du cathéter jusqu&#39;à l&#39;extrémité en forme de cloche est positionné juste sous la suture. Poussez une pièce de 18 G cathéter vers la suture pour éviter les fuites. </li><li> Faire infuser un petit volume de solution saline (100 - 200 pi) doucement pour vérifier s&#39;il ya des fuites. Si des fuites sont présentes, une suture supplémentaire doit être placé. </li><li> Fermer les muscles abdominaux en utilisant monofilament, laissant un passage pour le cathéter dans la partie supérieure de l&#39;incision. </li><li> Le tube de tunnel à la région interscapulaire aide d&#39;une tige métallique creuse, ce qui empêche les animaux de mordre le tube au cours de l&#39;expérience. </li><li> La peau est refermée à l&#39;aide non résorbable monofilament. Le cathéter implanté est rincée avec une solution saline pour vérifier sa perméabilité. </li><li> Avant que les animaux se réveillent, des analgésiques sont administrés par voie sous (buprénorphine, 0,05 mg / kg). </li></ol> 4. Configuration et cystomanométrie <ol><li> Selon la questi expérimentalesur (et les espèces utilisées) cystomanométrie est réalisée en éveil (retenue ou Unrestraint) ou uréthane anesthésié les animaux. Alors que la cystomanométrie est parfaitement possible chez des rats conscients, qui ont tendance à rester calme dans un environnement restreint, nous avons l&#39;habitude effectuer la cystomanométrie sous anesthésie à l&#39;uréthane (1,2 mg / kg, voie sous-cutanée) lorsque vous utilisez la souris 3,5,6,9. </li><li> Chez les souris anesthésiées, la température du corps est constamment surveillée et maintenue à 36,5 ° C ± 0,2 ° C à l&#39;aide d&#39;une sonde de température et une lampe de chauffage. </li><li> Le set-up est calibré avant chaque expérience selon les instructions du fabricant. </li><li> Le cathéter implanté est relié par un embout Luer à un robinet 3-voies, qui est relié au transducteur de pression (Edwards Lifesciences) sur un côté et une pompe de perfusion sur l&#39;autre (Harvard Apparatus). Le transducteur de pression est relié par l&#39;intermédiaire d&#39;un amplificateur (78534c moniteur, Hewlett Packard) au système d&#39;acquisition de données (DI-730-USB, DATAQ instruments) et un computer. Windaq / Lite logiciel peut être utilisé pour l&#39;enregistrement. </li><li> La pompe à perfusion est lancé, permettant la perfusion de solution saline ou PBS à, par exemple, 100 l / min (chez le rat) ou 20 l / min (chez la souris). En tant que tel la vessie sera remplie à un taux constant, tandis que la pression intravésicale est enregistrée. </li><li> La figure 5 représente un tracé de pression typique: pendant la perfusion de fluide, il existe une accumulation de pression dans la vessie lente, jusqu&#39;à un certain volume / pression est atteinte, le seuil de la miction. Une fois que ce seuil est atteint, la vessie se contracte et par la suite le sphincter urinaire s&#39;ouvre, permettant le passage de l&#39;urine par l&#39;urètre. En tant que tel, la vessie est vidée, la contraction s&#39;arrête et la pression chute à nouveau à la «base» de niveau. </li><li> Comme le rat est placé dans une cage métabolique et au-dessus d&#39;une balance numérique, le volume uriné peuvent être mesurés simultanément, donnant des informations sur le volume uriné. En raison de la faiblesse des volumes annulés à mice, il peut être très difficile avec ce système. Par conséquent, volume uriné est déterminée à l&#39;aide de petits papiers filtres pesés avant et après la miction. </li><li> En général, on laisse le système s&#39;équilibrer pendant 30 min, suivie d&#39;une période d&#39;enregistrement de 30 minutes. Ensuite, les médicaments peuvent être administrés par voie systémique ou par voie intravésicale et un autre 30 minutes sont enregistrés. </li><li> Les données enregistrées peuvent être exportées sous forme de fichiers csv. Qui peuvent être importés dans un logiciel spécialisé pour l&#39;analyse quantitative. Nous utilisons généralement origine (OriginLab Corporation, MA, USA). </li><li> Après les expériences, les animaux sont sacrifiés par dislocation cervicale (souris) ou l&#39;intoxication CO 2 (rats). </li></ol> 5. Les résultats représentatifs <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig1.jpg" /> Figure 1. Aperçu laparotomie. A) Placez le rat en décubitus dorsal. B) Rasage et antiseptique préparer le site chirurgical. C) Incision de la peau. Incision D) of les muscles abdominaux, et l&#39;exposition de la vessie. <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig2.jpg" /> Figure 2. Un suture en bourse. <img alt="Figure 3" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig3.jpg" /> Figure implantation du cathéter. 3. <img alt="Figure 4" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig4.jpg" /> La figure 4. Tunnelier du cathéter. Des exemples de mesures de pression obtenues pendant la perfusion de solution saline par voie intravésicale chez le rat conscient et une souris anesthésiée sont présentés dans la figure 5. Plusieurs paramètres peuvent être extraits à partir du signal de pression (par exemple, l&#39;intervalle intercontractile, la pression de référence et la pression de seuil). Pour une description détaillée de ces paramètres, s&#39;il vous plaît voir Andersson et al. (Ref 4) et Yoshiyama et al. (<html> ref 10). Nous avons récemment utilisé la cystomanométrie d&#39;identifier les cibles moléculaires de l&#39;huile de moutarde (MO), un composé hautement réactif qui a été longtemps utilisé dans les modèles expérimentaux d&#39;inflammation et l&#39;hyperalgésie des viscères tels que la vessie 11,12. Par infusion intravésicale de 10 mM MO induit une forte augmentation de la fréquence de la miction (diminution de l&#39;intervalle intercontractile) chez les souris de type sauvage (figure 6A, B) et une diminution du volume annulé 6. Fait intéressant, MO induit des changements similaires chez les souris déficientes en récepteur de la MO TRPA1. En revanche, MO induit des changements beaucoup plus faibles dans les paramètres cystométriques chez la souris KO TRPV1 que chez les souris WT et était sans aucun effet chez les souris KO Trpa1/Trpv1. Ainsi que les mesures de la libération du gène de la calcitonine related Peptide (CGRP) 6, ces données indiquent démontrer que TRPV1 peut jouer un rôle clé dans l&#39;irritation viscérale induite par MO. ve_content &quot;&gt; <img alt="Figure 5" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig5.jpg" /> Figure 5. Traces représentatifs de la pression intravésicale enregistré dans un rat conscient femelle (A) et d&#39;une souris anesthésiée femelle (B). La pression la plus faible est définie comme étant la &quot;pression de base&quot; (flèches rouges). La pression à la fin de la phase de remplissage est marqué par la flèche bleue. Le volume de liquide perfusé entre ces points, divisée par la différence de pression, permet le calcul de la conformité de la paroi de la vessie (= respect infusé volume / (pression de seuil -. Pression de base) Le «intervalle intercontractile&quot; (ICI) est le temps entre deux contractions miction. <img alt="Figure 6" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig6.jpg" /> Figure 6. Effets de l&#39;application intravésicale de l&#39;huile de moutarde sur le modèle de la cystomanométrie de type sauvage et des souris knockout TRPA1, TRPV1 et Trpa1/Trpv1.(A) Des exemples représentatifs des variations de pression intravésicale enregistrées dans WT, TRPA1 KO, KO et Trpv1 Trpa1/Trpv1 souris KO en réponse à une perfusion de solution saline et 10 mM MO. Évolution dans le temps (B) de la fréquence de la miction instantanée moyenne avant et pendant infusion intravésicale de MO. Pour toutes les souris, les données ont été normalisées à la fréquence moyenne obtenue pendant la perfusion de solution saline. Ces données sont adaptés à partir Everaerts et al. (Ref 6), avec la permission d&#39;Elsevier.

<ol>
	<li>Everaerts, W., Gevaert, T., Nilius, B., De Ridder, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+origin+of+bladder+sensing:+Tr(i)ps+in+urology.">On the origin of bladder sensing: Tr(i)ps in urology.</a> Neurourol. Urodyn. 27, 264-2673 (2008).</li><li>Fry, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+and+their+use+in+understanding+lower+urinary+tract+dysfunction.">Animal models and their use in understanding lower urinary tract dysfunction.</a> Neurourol. Urodyn. 29, 603-608 (2010).</li><li>Gevaert, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deletion+of+the+transient+receptor+potential+cation+channel+TRPV4+impairs+murine+bladder+voiding.">Deletion of the transient receptor potential cation channel TRPV4 impairs murine bladder voiding.</a> J. Clin. Invest. 117, 3453-3462 (2007).</li><li>Andersson, K. E., Soler, R., Fullhase, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+for+urodynamic+investigation.">Rodent models for urodynamic investigation.</a> Neurourol. Urodyn. 30, 636-646 (2011).</li><li>Everaerts, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+the+cation+channel+TRPV4+improves+bladder+function+in+mice+and+rats+with+cyclophosphamide-induced+cystitis.">Inhibition of the cation channel TRPV4 improves bladder function in mice and rats with cyclophosphamide-induced cystitis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 19084-19089 (2010).</li><li>Everaerts, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+capsaicin+receptor+TRPV1+is+a+crucial+mediator+of+the+noxious+effects+of+mustard+oil.">The capsaicin receptor TRPV1 is a crucial mediator of the noxious effects of mustard oil.</a> Curr. Biol. 21, 316-321 (2011).</li><li>Yoshiyama, M., Roppolo, J. R., Thor, K. B., de Groat, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+LY274614,+a+competitive+NMDA+receptor+antagonist,+on+the+micturition+reflex+in+the+urethane-anaesthetized+rat.">Effects of LY274614, a competitive NMDA receptor antagonist, on the micturition reflex in the urethane-anaesthetized rat.</a> Br. J. Pharmacol. 110, 77-86 (1993).</li><li>Yoshiyama, M., Roppolo, J. R., de Groat, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+MK-801+on+the+micturition+reflex+in+the+rat--possible+sites+of+action.">Effects of MK-801 on the micturition reflex in the rat--possible sites of action.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 265, 844-850 (1993).</li><li>Boudes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+Characterization+of+a+Chronic+Cyclophosphamide-Induced+Overactive+Bladder+Model+in+mice.">Functional Characterization of a Chronic Cyclophosphamide-Induced Overactive Bladder Model in mice.</a> Neurourol. Urodyn. , (2011).</li><li>Yoshiyama, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex-related+differences+in+activity+of+lower+urinary+tract+in+response+to+intravesical+acid+irritation+in+decerebrate+unanesthetized+mice.">Sex-related differences in activity of lower urinary tract in response to intravesical acid irritation in decerebrate unanesthetized mice.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 295, R954-R960 (2008).</li><li>McMahon, S. B., Abel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+for+the+study+of+visceral+pain+states:+chronic+inflammation+of+the+chronic+decerebrate+rat+urinary+bladder+by+irritant+chemicals.">A model for the study of visceral pain states: chronic inflammation of the chronic decerebrate rat urinary bladder by irritant chemicals.</a> Pain. 28, 109-127 (1987).</li><li>Du, S., Araki, I., Yoshiyama, M., Nomura, T., Takeda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+receptor+potential+channel+A1+involved+in+sensory+transduction+of+rat+urinary+bladder+through+C-fiber+pathway.">Transient receptor potential channel A1 involved in sensory transduction of rat urinary bladder through C-fiber pathway.</a> Urology. 70, 826-831 (2007).</li><li>Streng, T., Santti, R., Talo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Similarities+and+differences+in+female+and+male+rat+voiding.">Similarities and differences in female and male rat voiding.</a> Neurourol. Urodyn. 21, 136-141 (2002).</li><li>Igawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cystometric+findings+in+mice+lacking+muscarinic+M2+or+M3+receptors.">Cystometric findings in mice lacking muscarinic M2 or M3 receptors.</a> J. Urol. 172, 2460-2464 (2004).</li><li>Schroder, A., Newgreen, D., Andersson, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detrusor+responses+to+prostaglandin+E2+and+bladder+outlet+obstruction+in+wild-type+and+Ep1+receptor+knockout+mice.">Detrusor responses to prostaglandin E2 and bladder outlet obstruction in wild-type and Ep1 receptor knockout mice.</a> J. Urol. 172, 1166-1170 (2004).</li><li>Chen, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Function+of+the+lower+urinary+tract+in+mice+lacking+alpha1d-adrenoceptor.">Function of the lower urinary tract in mice lacking alpha1d-adrenoceptor.</a> J. Urol. 174, 370-374 (2005).</li><li>May, V., Vizzard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bladder+dysfunction+and+altered+somatic+sensitivity+in+PACAP-/-+mice.">Bladder dysfunction and altered somatic sensitivity in PACAP-/- mice.</a> J. Urol. 183, 772-779 (2010).</li><li>Thorneloe, K. S., Meredith, A. L., Knorn, A. M., Aldrich, R. W., Nelson, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urodynamic+properties+and+neurotransmitter+dependence+of+urinary+bladder+contractility+in+the+BK+channel+deletion+model+of+overactive+bladder.">Urodynamic properties and neurotransmitter dependence of urinary bladder contractility in the BK channel deletion model of overactive bladder.</a> Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 289, 604-610 (2005).</li></ol>

Aucun conflit d&#39;intérêt déclaré.

La technique présentée ici cystomanométrie permet d&#39;effectuer des mesures in vivo de la fonction de la vessie chez des modèles animaux. Les rats sont probablement le modèle animal le plus utilisé. Les souris sont plus difficiles à manipuler, mais offrent l&#39;avantage de l&#39;utilisation d&#39;animaux génétiquement modifiés. En raison de la difficulté technique de l&#39;utilisation des souris conscientes, qui ont tendance à être très actif résultant de relâchement du cathéter imp...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Nom commercial, entreprise, </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> uréthane </td><td> Uréthane, Sigma-Aldrich </td><td> 315419 </td><td> cancérogène du groupe 2B </td></tr><tr><td> isoflurane </td><td> Isoba, de la santé animale de Schering-Plough </td><td></td><td></td></tr><tr><td> cathéter en polyéthylène </td><td> Intramedic Tube en polyéthylène PE50, Becton Dickinson </td><td> 427411 </td><td></td></tr><tr><td> Microscope chirurgical </td><td> Op-Mi 6, Carl Zeiss </td><td> Op-Mi 6 </td><td></td></tr><tr><td> bourse-string suture </td><td> Prolene 6/0, Ethicon </td><td> 8610H </td><td></td></tr><tr><td> fascia et suturer la peau </td><td> Ethilon 4/0 ou 5/0, Ethicon </td><td> 662G 661G ou </td><td></td></tr><tr><td> analgésiques postopératoires </td><td> Temgesic, de la santé animale de Schering-Plough </td><td></td><td> dosage pour le rat: 0,05 mg / kg </td></tr><tr><td> amplificateur </td><td> 78534c moniteur, Hewlett Packard </td><td></td><td></td></tr><tr><td> balances analytiques et des logiciels d&#39;acquisition de données équilibre </td><td> FZ 300i, A &amp; D </td><td> FZ-300i </td><td></td></tr><tr><td> pompes à perfusion </td><td> pompe 33, Harvard appareil </td><td> HA33 </td><td></td></tr><tr><td> système d&#39;enregistrement cystométrie </td><td> Instruments DATAQ, DI-730 série et Windaq / Lite </td><td> DI-730-USB Windaq / Lite </td><td></td></tr><tr><td> Enregistrement de la température </td><td> Fluke 52 KJ thermomètre </td><td> 52 KJ </td><td></td></tr><tr><td> des transducteurs de pression </td><td> Edwards Lifesciences, jeu surveillance de la pression </td><td> T322247A </td><td></td></tr></tbody></table>

the use of cystometry in small rodents: a study of bladder chemosensation

<p class="jove_content"&gt; Les voies urinaires inférieures (LUT) fonctionne comme un réservoir dynamique qui est capable de stocker l&#39;urine et pour mieux l&#39;expulser à un moment opportun. Tout en stockant l&#39;urine, cependant, la vessie est exposée pendant des périodes prolongées à des produits de déchets. En agissant comme une barrière étanche, l&#39;épithélium de la LUT, l&#39;urothélium, évite les ré-absorption de substances nocives. En outre, les produits chimiques toxiques stimuler innervation nociceptive de la vessie et la miction initier des contractions qui expulsent le contenu de la vessie. Fait intéressant, la sensibilité de la vessie à des produits chimiques nocifs a été utilisé avec succès dans la pratique clinique, par voie intravésicale infusant la capsaïcine TRPV1 agoniste pour traiter l&#39;hyperactivité vésicale neurogène<sup&gt; 1</sup&gt;. Cela met en évidence l&#39;avantage de visualiser la vessie comme un organe chimiosensorielle et vous invite à la recherche clinique supplémentaire. Toutefois, les questions éthiques limitent sérieusement les possibilités d&#39;effectuer, sur des sujets humains, les mesures invasives qui sont nécessaires pour élucider les bases moléculaires de pharmacologie clinique LUT. Une façon de surmonter cette limitation est l&#39;utilisation de plusieurs modèles animaux<sup&gt; 2</sup&gt;. Nous décrivons ici la mise en œuvre de la cystomanométrie chez les souris et les rats, une technique qui permet de mesurer la pression intravésicale dans des conditions de perfusion contrôlée vessie.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; Après laparotomie, un cathéter est implanté dans le dôme de la vessie et un tunnel sous-cutané dans la région interscapulaire. Puis la vessie peut être rempli à une vitesse contrôlée, tandis que l&#39;urètre est laissée libre pour la miction. Au cours des cycles répétitifs de remplissage et de la miction, la pression intravésicale peut être mesurée par le cathéter implanté. En tant que tel, les changements de pression peuvent être quantifiés et analysés. En outre, la mesure simultanée du volume annulée permet de distinguer les contractions miction de non-mictionnels contractions<sup&gt; 3</sup&gt;.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; Il est important, en raison des différences dans le contrôle de la miction entre les rongeurs et les humains, les mesures cystométriques chez ces animaux n&#39;ont qu&#39;une valeur limitée translationnelle<sup&gt; 4</sup&gt;. Néanmoins, ils sont tout à fait contribué à l&#39;étude de la physiopathologie de la vessie et de la pharmacologie dans expérimentales précliniques paramètres. Des recherches récentes utilisant cette technique a révélé le rôle clé de nouveaux acteurs moléculaires dans les propriétés mécano-et chimio-sensoriels de la vessie.</p

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The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

Cystomanométrie est une technique efficace pour mesurer la fonction de la vessie de petits animaux<em&gt; In vivo</em&gt;. La vessie est perfusé en continu à des vitesses contrôlées par un cathéter intra-vésicale, tandis que l&#39;urètre est laissée libre pour la miction. Ceci permet de répétition de remplissage et de vidange de la vessie, tandis que la pression intravésicale volume évacué et sont enregistrées.

L&#39;utilisation de la cystomanométrie chez les petits rongeurs: une étude de la vessie Chemosensation

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

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22.3K vues.  KU Leuven, Belgium. Cystomanométrie est une technique efficace pour mesurer la fonction de la vessie de petits animaux In vivo. La vessie est perfusé en continu à des vitesses contrôlées par un cathéter intra-vésicale, tandis que l'urètre est laissée libre pour la miction. Ceci permet de répétition de remplissage et de vidange de la vessie, tandis que la pression intravésicale volume évacué et sont enregistrées.

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Mouse Bladder Wall Injection

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. Before starting injections, the surgical area must be cleaned with soap and water and antiseptic solution. Surgical equipment must be sterilized before use and between each animal. Each mouse is placed under inhaled isoflurane anesthesia (2-5% for induction, 1-3% for maintenance) and its bladder exposed by making a midline abdominal incision with scissors. If the bladder is full, it is partially decompressed by gentle squeezing between two fingers. The cell suspension of interest is intramurally injected into the wall of the bladder dome using a 29 or 30 gauge needle and 1 cc or smaller syringe. The wound is then closed using wound clips and the mouse allowed to recover on a warming pad. Bladder wall injection is a delicate microsurgical technique that can be mastered with practice.

Mouse bladder wall injection is a useful approach to orthotopically study bladder stem cell and cancer biology. This delicate microsurgical method can be mastered with careful technique and practice.

Injection mur souris vessie

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. ...

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Médecine

Biomarkers in an Animal Model for Revealing Neural, Hematologic, and Behavioral Correlates of PTSD

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for objective diagnosis but also for the evaluation of therapeutic efficacy and resilience to trauma. Ongoing research is directed at identifying molecular biomarkers for PTSD, including traumatic stress induced proteins, transcriptomes, genomic variances and genetic modulators, using biologic samples from subjects' blood, saliva, urine, and postmortem brain tissues. However, the correlation of these biomarker molecules in peripheral or postmortem samples to altered brain functions associated with psychiatric symptoms in PTSD remains unresolved. Here, we present an animal model of PTSD in which both peripheral blood and central brain biomarkers, as well as behavioral phenotype, can be collected and measured, thus providing the needed correlation of the central biomarkers of PTSD, which are mechanistic and pathognomonic but cannot be collected from people, with the peripheral biomarkers and behavioral phenotypes, which can.
Our animal model of PTSD employs restraint and tail shocks repeated for three continuous days - the inescapable tail-shock model (ITS) in rats. This ITS model mimics the pathophysiology of PTSD 17, 7, 4, 10. We and others have verified that the ITS model induces behavioral and neurobiological alterations similar to those found in PTSD subjects 17, 7, 10, 9. Specifically, these stressed rats exhibit (1) a delayed and exaggerated startle response appearing several days after stressor cessation, which given the compressed time scale of the rat's life compared to a humans, corresponds to the one to three months delay of symptoms in PTSD patients (DSM-IV-TR PTSD Criterian D/E 13), (2) enhanced plasma corticosterone (CORT) for several days, indicating compromise of the hypothalamopituitary axis (HPA), and (3) retarded body weight gain after stressor cessation, indicating dysfunction of metabolic regulation.
The experimental paradigms employed for this model are: (1) a learned helplessness paradigm in the rat assayed by measurement of acoustic startle response (ASR) and a charting of body mass; (2) microdissection of the rat brain into regions and nuclei; (3) enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for blood levels of CORT; (4) a gene expression microarray plus related bioinformatics tools 18. This microarray, dubbed rMNChip, focuses on mitochondrial and mitochondria-related nuclear genes in the rat so as to specifically address the neuronal bioenergetics hypothesized to be involved in PTSD.

We describe a rat model of post traumatic stress disorder (PTSD) that reveals the persistent alterations in neuroendocrine function and the delayed long-term, exaggerated fear response, characteristic of PTSD patients. The animal model and methods described here are useful for correlating biomarkers in brain nuclei, which are mechanistic but cannot be measured in patients, with biomarkers in peripheral white blood cells, which can.

Biomarqueurs dans un modèle animal pour Révéler Corrélats neuronaux, hématologiques et du comportement de stress post-traumatique

Identification of biomarkers representing the evolution of the pathophysiology of Post Traumatic Stress Disorder (PTSD) is vitally important, not only for ...

Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human malignancies.1 Other than surgery for the minority of patients who present with localized disease, there is little or no survival benefit of systemic therapy. Therefore, there is a great need to better understand the biology of NETs, and in particular define new therapeutic targets for patients with nonresectable or metastatic neuroendocrine tumors. 3D cell culture is becoming a popular method for drug screening due to its relevance in modeling the in vivo tumor tissue organization and microenvironment.2,3 The 3D multicellular spheroids could provide valuable information in a more timely and less expensive manner than directly proceeding from 2D cell culture experiments to animal (murine) models.
To facilitate the discovery of new therapeutics for NET patients, we have developed an in vitro 3D multicellular spheroids model using the human NET cell lines. The NET cells are plated in a non-adhesive agarose-coated 24-well plate and incubated under physiological conditions (5% CO2, 37 &deg;C) with a very slow agitation for 16-24 hr after plating. The cells form multicellular spheroids starting on the 3rd or 4th day. The spheroids become more spherical by the 6th day, at which point the drug treatments are initiated. The efficacy of the drug treatments on the NET spheroids is monitored based on the morphology, shape and size of the spheroids with a phase-contrast light microscope. The size of the spheroids is estimated automatically using a custom-developed MATLAB program based on an active contour algorithm. Further, we demonstrate a simple method to process the HistoGel embedding on these 3D spheroids, allowing the use of standard histological and immunohistochemical techniques. 
This is the first report on generating 3D spheroids using NET cell lines to examine the effect of therapeutic drugs. We have also performed histology on these 3D spheroids, and displayed an example of a single drug's effect on growth and proliferation of the NET spheroids. Our results support that the NET spheroids are valuable for further studies of NET biology and drug development.

We present a simple agarose overlay platform to grow 3D multicellular spheroids using neuroendocrine cancer cell lines. This method provides a very convenient way to examine the effect of therapeutic drugs on the neuroendocrine tumor cells. It could also help us establish human neuroendocrine tumor spheroids for cancer therapy.

L&#39;homme neuroendocriniennes lignées cellulaires tumorales comme un modèle tridimensionnel pour l&#39;étude de la thérapie des tumeurs neuro-endocrines humaines

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized by increased urgency and frequency of urination, as well as nocturia and general pelvic pain, especially upon bladder filling or voiding. Despite years of research, the cause of IC/BPS remains elusive and treatment strategies are unable to provide complete relief to patients. In order to study nervous system contributions to the condition, many animal models have been developed to mimic the pain and symptoms associated with IC/BPS. One such murine model is urinary bladder distension (UBD). In this model, compressed air of a specific pressure is delivered to the bladder of a lightly anesthetized animal over a set period of time. Throughout the procedure, wires in the superior oblique abdominal muscles record electrical activity from the muscle. This activity is known as the visceromotor response (VMR) and is a reliable and reproducible measure of nociception. Here, we describe the steps necessary to perform this technique in mice including surgical manipulations, physiological recording, and data analysis. With the use of this model, the coordination between primary sensory neurons, spinal cord secondary afferents, and higher central nervous system areas involved in bladder pain can be unraveled. This basic science knowledge can then be clinically translated to treat patients suffering from IC/BPS.

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized in part by pelvic pain. In order to study nervous system contributions to the condition, a physiological model of urinary bladder pain is used in mice and rats.

Réponses vessie distension évoqués viscéromotrice comme modèle pour douleur à la vessie chez la souris

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents

Sublethal ischemia protects tissues against subsequent, more severe ischemia through the upregulation of endogenous mechanisms in the affected tissue. Sublethal ischemia has also been shown to upregulate protective mechanisms in remote tissues. A brief period of ischemia (5-10 min) in the hind limb of mammals induces self-protective responses in the brain, lung, heart and retina. The effect is known as remote ischemic preconditioning (RIP). It is a therapeutically promising way of protecting vital organs, and is already under clinical trials for heart and brain injuries. This publication demonstrates a controlled, minimally invasive method of making a limb &#8211; specifically the hind limb of a rat &#8211; ischemic. A blood pressure cuff developed for use in human neonates is connected to a manual sphygmomanometer and used to apply 160 mmHg pressure around the upper part of the hind limb. A probe designed to detect skin temperature is used to verify the ischemia, by recording the drop in skin temperature caused by pressure-induced occlusion of the leg arteries, and the rise in temperature which follows release of the cuff. This method of RIP affords protection to the rat retina against bright light-induced damage and degeneration.

Remote ischemic preconditioning (RIP) is a method of conditioning tissues against damaging stress. We have established a method of remote ischemia at the hind limb, by inflating a sphygmomanometer cuff for 5-10 min. The neuroprotective capabilities of RIP have been demonstrated in a model of retinal degeneration in rodents.

Limb distance ischémique préconditionnement: Une technique neuroprotecteur chez les rongeurs

Sublethal ischemia protects tissues against subsequent, more severe ischemia through the upregulation of endogenous mechanisms in the affected tissue. ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment epithelium (RPE) cells. RPE provide critical support for photoreceptors and death or dysfunction of RPE cells is characteristic of age-related macular degeneration (AMD), the leading cause of permanent vision loss in people age 55 and older. While no cure for AMD has been identified, implantation of healthy RPE in diseased eyes may prove to be an effective treatment, and large numbers of RPE cells can be readily generated from pluripotent stem cells. Several interesting questions regarding the safety and efficacy of RPE cell delivery can still be examined in animal models, and well-accepted protocols used to inject RPE have been developed. The technique described here has been used by multiple groups in various studies and involves first creating a hole in the eye with a sharp needle. Then a syringe with a blunt needle loaded with cells is inserted through the hole and passed through the vitreous until it gently touches the RPE. Using this injection method, which is relatively simple and requires minimal equipment, we achieve consistent and efficient integration of stem cell-derived RPE cells in between the host RPE that prevents significant amount of photoreceptor degeneration in animal models. While not part of the actual protocol, we also describe how to determine the extent of the trauma induced by the injection, and how to verify that the cells were injected into the subretinal space using in vivo imaging modalities. Finally, the use of this protocol is not limited to RPE cells; it may be used to inject any compound or cell into the subretinal space.

Here we present a community accepted protocol in multimedia format for subretinally injecting a bolus of RPE cells in rats and mice. This approach can be used for determining rescue potentials, safety profiles, and survival capacities of grafted RPE cells upon implantation in animal models of retinal degeneration.

Exécution sous-rétinienne injections chez les rongeurs de produire des cellules de l&#39;épithélium pigmentaire rétinien Suspension

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Bladder cancer is one of the most common malignancies of the urogenital tract. Intravesical injection of Bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is the gold standard treatment for the high-grade non-muscle invasive bladder cancer (NMIBC). However, since the treatment-related side effects are relevant, newer biological response modifiers with a better benefit/side effects ratio are needed.
The tumour microenvironment can influence both tumour development and therapy efficacy. In order to obtain a good model, it is desirable to implant tumour cells in the organ from which the cancer originates.
In this protocol, we describe a method for establishing a tumour in the bladder cavity of female mice and subsequent delivery of therapeutic agents; the latter are exemplified by our use of Helicobacter pylori neutrophil activating protein (HP-NAP). A preliminary chemical burn of the mucosa, followed by the injection of mouse urothelial carcinoma cell line MB49 via urethral catheterization, enables the cells to attach to the bladder mucosa. After a period, required to allow an initial proliferation of the cells, mice are treated with HP-NAP, administrated again via catheterization. The anti-tumour activity of HP-NAP is evaluated comparing the tumour volume, the extent of necrosis and the degree of vascularization between vehicle- and HP-NAP-treated animals.

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Here the method to establish a syngeneic mouse model of orthotopic bladder tumour to evaluate the anti-tumour efficacy of the bacterial protein HP-NAP is described.

Évaluation de l&#39;efficacité de la<em&gt; H. pylori</em&gt; Protéines HP-NAP comme outil thérapeutique pour le traitement du cancer de la vessie dans un modèle murin orthotopique

Bladder cancer is one of the most common malignancies of the urogenital tract. Intravesical injection of Bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is the gold ...

Use of Ultra-high Field MRI in Small Rodent Models of Polycystic Kidney Disease for In Vivo Phenotyping and Drug Monitoring

Several in vivo pre-clinical studies in Polycystic Kidney Disease (PKD) utilize orthologous rodent models to identify and study the genetic and molecular mechanisms responsible for the disease, and are very convenient for rapid drug screening and testing of promising therapies. A limiting factor in these studies is often the lack of efficient non-invasive methods for sequentially analyzing the anatomical and functional changes in the kidney. Magnetic resonance imaging (MRI) is the current gold standard imaging technique to follow autosomal dominant polycystic kidney disease (ADPKD) patients, providing excellent soft tissue contrast and anatomic detail and allowing Total Kidney Volume (TKV) measurements.A major advantage of MRI in rodent models of PKD is the possibility for in vivo imaging allowing for longitudinal studies that use the same animal and therefore reducing the total number of animals required. In this manuscript, we will focus on using Ultra-high field (UHF) MRI to non-invasively acquire in vivo images of rodent models for PKD. The main goal of this work is to introduce the use of MRI as a tool for in vivo phenotypical characterization and drug monitoring in rodent models for PKD.

Use of Ultra-high Field MRI in Small Rodent Models of Polycystic Kidney Disease for In Vivo Phenotyping and Drug Monitoring

The use of ultra-high field MRI as a non-invasive way to obtain phenotypic information of rodent models for polycystic kidney disease and to monitor interventions is described. Compared with the traditional histological approach, MRI images can be acquired in vivo, allowing for longitudinal follow-up.

L&#39;utilisation de l&#39;IRM de terrain ultra-haute dans les modèles petit rongeur de la maladie polykystique des reins pour<em&gt; In Vivo</em&gt; Phénotypage and Drug Monitoring

Several in vivo pre-clinical studies in Polycystic Kidney Disease (PKD) utilize orthologous rodent models to identify and study the genetic and molecular ...

Use of a Piglet Model for the Study of Anesthetic-induced Developmental Neurotoxicity (AIDN): A Translational Neuroscience Approach

Anesthesia cannot be avoided in many cases when surgery is required, particularly in children. Recent investigations in animals have raised concerns that anesthesia exposure may lead to neuronal apoptosis, known as anesthesia-induced developmental neurotoxicity (AIDN). Furthermore, some clinical studies in children have suggested that anesthesia exposure may lead to neurodevelopmental deficits later in life. Nonetheless, an ideal animal model for preclinical study has yet to be developed. The neonatal piglet represents a valuable model for preclinical study, as they share a striking number of developmental similarities with humans.
The anatomy and physiology of piglets allow for implementation of rigorous human perioperative conditions in both survival and non-survival procedures. Femoral artery catheterization allows for close monitoring, thus enabling prompt correction of any deviation of the piglet's vital signs and chemistries. In addition, there are multiple developmental similarities between piglets and human neonates. The techniques required to use piglets for experimentation will require experience to master. A pediatric anesthesiologist is a critical member of the investigative team. We describe, in a general sense, the appropriate use of a piglet model for neurodevelopmental study.

Use of a Piglet Model for the Study of Anesthetic-induced Developmental Neurotoxicity AIDN: A Translational Neuroscience Approach

Anesthesia-induced developmental neurotoxicity (AIDN) research has focused on rodents, which are not broadly applicable to humans. Non-human primate models are more relevant, but are cost-prohibitive and difficult to use for experimentation. The piglet, in contrast, is a clinically relevant, practical animal model ideal for the study of anesthetic neurotoxicity.

Utilisation d&#39;un modèle Piglet pour l&#39;étude de la neurotoxicité du développement induite par l&#39;anesthésie (AIDN): une approche de la neurologie translationnelle

Anesthesia cannot be avoided in many cases when surgery is required, particularly in children.  Recent investigations in animals have raised concerns that ...

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction (NeMO) in Female Small Rodents

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal model to investigate bladder remodeling in pBOO are female rodents undergoing partial obstruction at the proximal urethra. Variability in the degree of obstruction and animal mortality are major concerns with proximal obstruction. Furthermore, dissecting around the proximal urethra and bladder neck jeopardizes bladder innervation.
We developed a nerve-sparing mid-urethral obstruction (NeMO) model for pBOO avoiding the disadvantages of the traditional model. We approached the urethra just inferior to the pubic symphysis, which obviated the need for laparotomy as well as for dissection in this area; also, the striated urethral sphincter remained untouched. We performed NeMO in female Sprague-Dawley rats (12 obstructions, 6 sham animals) as well as in female C57/bl6 mice (20 obstructions, 18 sham animals). After two weeks, we evaluated bladder function, bladder mass, and body mass.
We had no mortalities among obstructed- or sham-operated female rats; as described for the traditional proximal pBOO-method, we tied the suture around the proximal urethra and a temporarily placed 0.9 mm metal rod. NeMO induced an 85% increase in bladder mass after two weeks, average residual urine volume was 0.4 mL in partially obstructed rats while only 0.03 mL in sham animals. In mice, we tested 3 sizes of cannulas that we placed along the urethra when tying the suture. We found that using a 27-gauge cannula resulted in over 50% animal mortality; placing the 25-gauge cannula did not yield the desired response in increasing bladder mass; utilizing a 26-gauge cannula yielded favorable results with minimal animal mortality (1/8) yet a significant 2-fold increase in bladder mass.

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction NeMO in Female Small Rodents

Traditional modeling of partial bladder outlet obstruction in rodents is fraught with animal mortality. A denervation injury from dissection around the proximal urethra and bladder neck is also of major concern. We developed and evaluated a safe and reliable mid-urethral obstruction model, avoiding the shortcomings of the traditional model.

Préservation des nerfs Obstruction à mi-urétrale (NEMO) chez les femelles petits rongeurs

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal ...