Ce travail a été financé par NCTR / FDA.

Bien que non représenté dans la vidéo, les rats ont d&#39;abord reçu une surdose de 300 mg / kg de pentobarbital, résultant en anesthésie en moins de 3 min, puis tués par décapitation. Leurs cerveaux ont ensuite été rapidement mais soigneusement retirée du crâne et refroidi dans la glace froide saline normale pendant 5 min. Il est important de laisser refroidir le cerveau de ce laps de temps avant la dissection de la MAV de sorte que la MAV peut être séparée de la surface du cortex (couche supérieure de I). Le cerveau a ensuite été placé dans le fond d&#39;un plat en verre de Pétri reposant sur la glace qui était plein (1 cm de profondeur) des glacé solution saline normale ou de sodium 0,1 M de tampon phosphate salin pH = 7,4. Toute la dissection se fait avec le cerveau pour la plupart plongés dans une solution saline. 1. Retrait de la glande pinéale <ol><li> Placer le haut côté dorsal du cerveau (par rapport au fond de la boîte de Pétri). La glande pinéale est située dans la région la plus caudale ventrale entre les deux hémisphères juste rostrale à til cervelet (évidement pinéale), et il est juste en dessous ou à la surface des méninges au cours de la colliculi. Retirer la glande pinéale de la première utilisation de deux petites pinces à bout courbé. Il est de couleur rose comme le cortex, mais est souvent entouré de restes de sang et le système vasculaire résiduel de l&#39;élimination du cerveau. </li></ol> 2. Suppression de la MAV <ol><li> Retournez le cerveau sur &quot;upside down&quot; et de séparer l&#39;artère vertébrale, les petites artères et des méninges portant sur la protubérance du système vasculaire des méninges et du cerveau antérieur. Suppression de la MAV cerveau antérieur est alors démarré. Il est important de commencer ventralement dans le processus de dissection. Les grandes artères majeures du cercle de Willis, artères cérébrales moyennes (MCA) et les artères antérieures sont les plus forts et servir de «échafaudage» par lequel les petites artères et artérioles superficielles de la pie-mère membrane peut alors être retiré du cortex et le reste des méninges. Voir toutes les évaluations par Scremin 7 pour mminerai de représentations visuelles et les détails de la vascularisation cérébrale. surface </li><li> À commencer par les deux hémisphères, utilisez la pince petites pointes recourbées à couper l&#39;artère communicante postérieure juste en arrière de la jonction de la carotide interne. Ainsi, en séparant les arbres plus antérieure et postérieure des artères du cerveau antérieur. Répétez le même processus pour l&#39;hémisphère controlatéral. </li><li> Saisir le MCA et l&#39;artère interventriculaire antérieure avec la pince, tirer doucement dans une direction antérieure-dorsale de telle sorte que la MAV couvrant le cortex antérieur ventral (piriforme, tubercule olfactif) est soulevée au-dessus et autour de l&#39;appareil olfactif. Cela supprime une grande partie de la MAV couvrant le cortex antérieur (cingulaire et orbital). </li><li> Tournez le cerveau à un angle de 45 à 90 ° vers la boîte de Pétri. Les latéraux, les régions plus antérieures de la MAV entourant les régions corticales latérales (granulaire insulaire, somatosensoriel secondaire et le cortex auditif) peuvent être libérés à partir du cortex en saisissant le MCA et associée arters et en tirant doucement le long de la face dorsale du cortex. Le cas échéant, les extrémités de la pince peut être utilisée pour soulever et libérer les artères principales du cortex pendant la dissection. </li><li> Maintenant, enlevez les régions plus postérieures latérales de la MAV. (Remarque: il est préférable de passer d&#39;un hémisphère à l&#39;autre au cours de ce processus de récolte pour s&#39;assurer que le MAV reste froid et hydratée. Par ailleurs, si la résistance à libérer la MAV à partir du cortex est rencontré sur un commutateur hémisphère à l&#39;hémisphère controlatéral temporairement puis revenir à l&#39;hémisphère d&#39;origine plus tard.) </li><li> Pour supprimer les régions les plus dorsales de la MAV autour de la somato-sensoriel primaire et le cortex moteur tourner jusqu&#39;à la face dorsale du cerveau (par rapport au fond de la boîte de Pétri). Enfin à libérer la MAV de cerveau, utiliser les extrémités de la pince le long du sinus sagittal. Cette partie de la MAV récoltées peuvent être soit conservées temporairement dans une solution saline glacée jusqu&#39;à ce que les tests et l&#39;analyse ou congelés pour un traitement ultérieur. Souventla MAV couvrant les régions les plus postérieures / caudale du cortex entorhinal (cortex auditifs, visuels et la plus caudale) reste attaché au cortex. Son retrait est indiqué plus loin dans la vidéo lorsque la MAV entre le cortex rétrosplénial et recouvrant les colliculi sont disséqués. </li></ol> 3. Le retrait du plexus choroïde <ol><li> Placez le côté dorsal du cerveau et maintenir en place avec des pinces plus grandes Pousser la pince vers le bas les petits travers la ligne médiane entre les deux hémisphères, puis utilisez les extrémités pour percer à travers le corps calleux cortex et corpus (≈ -3,3 mm à partir du bregma) dans le haut de la ligne médiane de l&#39;hippocampe. </li><li> Utilisez la pince pour tirer le cortex avec calleux loin de l&#39;hippocampe dorsal et du septum, ce qui expose la plupart du ventricule latéral. Le plexus choroïde peut être localisé et identifié par la ligne ondulée rouge délimitant la grande artère qui passe sa longueur. Utiliser les deux extrémités de la pince pour soulever les parois latérales de la troisième ventricle et l&#39;agrandir à l&#39;extrémité la plus caudale (≈ -4,3 mm du bregma 8). </li><li> À l&#39;aide des petites pinces, tirer cette extrémité du plexus choroïde libre. Ensuite, allez à la région très antérieure entre le septum et du noyau caudé / putamen (mesure la plus rostrale, ≈ 1,6 mm de bregma) et avec la pince agrandir cette section du ventricule et tirez sur le plexus choroïde libre. Effectuez la même procédure sur l&#39;hémisphère controlatéral pour obtenir le deuxième choroïde plexus restante. Encore une fois ce tissu peut être soit conservées temporairement dans une solution saline glacée jusqu&#39;à ce que les tests et l&#39;analyse ou congelés pour un traitement ultérieur. </li></ol> 4. Suppression de la MAV restant dans le ventricule 3 ème Recouvrant le thalamus et le colliculi ainsi que celle sur les régions plus caudal de l&#39;Cortex y compris rétrosplénial, Cortex auditif et visuel <ol><li> Retirer l&#39;hippocampe ensemble des deux hémisphères exposant la MAV sur le thalamus et colliculi. La suppression descette partie de la MAV est beaucoup moins difficile que la suppression de la MAV sur le cortex. </li><li> Tirez cette partie de la MAV libre en saisissant la plus grande vascularisation recouvrant la partie antérieure du thalamus et en tirant doucement caudale. Ce système vasculaire est connecté au réseau colliculaire précité et irrigue l&#39;hippocampe dorsal et le réseau dorsal du thalamus. Retirez-le en bas et progressivement le réseau sans supracollicular jusqu&#39;à atteindre les dernières portions de la vascularisation cercle artériel caudal. À ce stade, plusieurs précautions doivent être prises pour éliminer tout reste de MAV ventral postérieur à la surface de la rétrosplénial granulaire, auditif primaire et cortex visuel. Comme avec l&#39;autre section de la MAV couvrant les parties plus antérieures du cortex, ce tissu peut être soit conservées temporairement dans une solution saline glacée jusqu&#39;à ce que les tests et l&#39;analyse ou congelés pour un traitement ultérieur. Tout reste MAV ventral postérieur récoltés avec cette deuxième partie MAV doit être retiré d&#39;und a ajouté à la section MAV disséqué premier couvrant le cortex si elles doivent être analysés séparément. </li></ol> 5. Les résultats représentatifs Lorsque la dissection est exécutée correctement, les tissus résultant VAC doit être en deux entités intactes pesant environ 35 à 45 mg au total. Le premier disséqué MAV qui entoure la plupart du cortex devrait peser environ 25 mg et la MAV couvrant le thalamus, colliculi et cortex occipital doit peser environ 15 mg. Il devrait être légèrement rosâtre en couleurs à partir du sang résiduel dans le système vasculaire. Le bilatérale du plexus choroïde récolté doit être dans deux échantillons de tissus intacts pesant chacun avec 1 à 2 mg. Bien que l&#39;excès d&#39;eau peut être retiré de la MAV avant le stockage ou le traitement avec du papier tel que celui utilisé dans le nettoyage de la lentille, afin d&#39;éviter la perte de tissu ce n&#39;est pas une bonne idée d&#39;enlever l&#39;excès d&#39;eau de la choroïde plexus disséqué. Figure 1 a été généré pour comparant profil d&#39;expression<html> es dans trois régions (striatum, le cortex pariétal et MAV) dans des conditions de contrôle en utilisant Agilent-014879 Whole Genome Rat 4x44K 60mer réseaux d&#39;oligonucléotides (G4131F, Agilent Technologies, Palo Alto, en Californie, NCBI GEO Accession # GPL7294; GSE23093 et ​​GSE29733 qui sont présents à le dépôt NCBI GEO). Les deux parcelles dans la figure graphiquement montrer l&#39;expression en 1) le striatum par rapport au cortex pariétal et 2) la MAV par rapport au cortex pariétal. Il est clair que le striatum et du cortex pariétal sont beaucoup plus étroitement liés les uns aux autres que la MAV. Les données comparant le plexus choroïde avec le MAV sera présenté dans une prochaine publication. Cependant, il est probable que les profils d&#39;expression de la MAV et du plexus choroïde sont plus étroitement liés les uns aux autres qu&#39;ils ne le sont dans le striatum et du cortex pariétal. Figure 2 montre la réponse expression différentielle de gènes à l&#39;hyperthermie (EIH) par rapport à AMPH MAV par rapport à contrôler et l&#39;autre. contenu &quot;&gt; L&#39;expression des gènes de plus de 11.000 gènes avec des symboles officiels de gènes NCBI dans MAV d&#39;animaux témoins ont été comparées à celles enregistrées dans le striatum et du cortex pariétal. Plus de 2000 de ces gènes avaient une expression de 2,5 fois ou plus différant par la MAV par rapport aux deux neurones riches en tissus, et 550 gènes avaient une différence de 10 fois plus grande dans l&#39;expression. Un peu plus de 40% (253) d&#39;entre eux étaient des gènes avec une expression diminuée de 10 fois ou plus dans VAC et étaient liés à la fonction neuronale. Il y avait 343 gènes ayant une expression plus de 10 fois ou plus par rapport à MAV cortex pariétal et le striatum. Cette liste de gènes a été utilisé comme un point de départ permettant de déterminer les gènes avec un enrichissement très élevé dans la MAV. Tableau 1 énumère les gènes présentant supérieure à l&#39;expression de 15 fois par rapport à MAV cortex pariétal et le striatum et les classe par rapport à la fonction. Beaucoup de ces gènes étaient liés au système vasculaire et / ou le système immunitaire. Ces Types de gènes doit être enrichi à environ 5 - à 10 - fois à cause de l&#39;augmentation de la vascularisation artérielle elle-même et présente en son sein. Cependant, même pour les gènes ayant des fonctions générales connues vasculaires, soit une augmentation supérieure à 15 fois indique un enrichissement en MAV. Il y avait aussi nombre de gènes avec de très grandes variations de pliage qui sont: 1) les protéines de la matrice extracellulaire (pas spécifiquement lié au système vasculaire), 2) les transporteurs de soluté et 3) métabolisme des lipides et l&#39;acide rétinoïque. En outre, la croissance de quelques-uns et gène de différenciation ou de facteurs de transcription ont été trouvés. <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig1.jpg" /> Figure 1. Comparaison de l&#39;expression des gènes dans MAV avec Cortex pariétal et le striatum. Graphique Volcano comparant les niveaux d&#39;expression des gènes de la pariétal et le cortex strié (tracé du haut) et le cortex pariétal et MAV (tracé du bas). Les symboles rouges indiquent les gènes qui sont significativement différentes betwefr régions à p &lt;0,05 et ont une expression différentielle de 1,5 fois ou plus entre les régions. Les symboles noirs représentent des gènes qui ne sont pas significativement différentes entre les régions (p&gt; 0,05) et moins de 1,5 fois différentes dans l&#39;expression. Les symboles indiquent les gènes rose avec une différence de moins de 1,5 fois de l&#39;expression, mais statistiquement significativement différentes à p &lt;0,05. Les symboles jaunes d&#39;identifier les gènes qui ont une expression de 1,5 fois ou plus, mais ce changement n&#39;est pas statistiquement significatif à p &lt;0,05. Abréviations Amphétamine AMPH EIH environnement hyperthermie induite Méninges VAC et associé vasculaire cérébral Norm normothermique contrôle <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig2.jpg" /> Figure 2. Parcelles Volcano effets de l&#39;hyperthermie et de l&#39;amphétamine sur l&#39;expression des gènes dans VAC. Comparantles niveaux d&#39;expression des gènes dans la MAV après saline, EIH ou AMPH au point 3 h de temps. Les symboles rouges indiquent les gènes qui sont réputés être très différents, tandis que les points noirs / cercles représentent des gènes qui ne sont pas significativement différentes entre les régions. Une analyse statistique supplémentaire a été utilisé pour vérifier que l&#39;expression des différences entre le contrôle et les traitements étaient en fait statistiquement significative. <table border="1"><tbody><tr><td fo:width="1in"> Expression MAV cérébrale Expression </td><td fo:width="4.5in"> NCBI Gene Symboles </td><td fo:width="1.5in"> Spécificité tissu ou d&#39;une fonction déclarée (s) </td></tr><tr><td> &gt; 50 fois </td><td> ANXA2 a, Col8a1, Des, ESM1, Glycam1, Kl a, Lect1, Lepr, Lum, MYH11, OGN, Tagln, Thbs2, TNNT2 </td><td> Vascularisation et coeur </td></tr><tr><td> &gt; 50 fois </td><td> CCL19, CD74 a, DEFB1, Lrrc21, Mgl1, MRC1, Msln, Pl.a2g5, PRG4, RT1-Bb, RT1-Da </td><td> Système immunitaire </td></tr><tr><td> &gt; 50 fois </td><td> ADH1, Aebp1, Aldh1a2, Gstm2 </td><td> L&#39;acide rétinoïque et traitement des lipides </td></tr><tr><td> &gt; 50 fois </td><td> Cdh1, COL3A1, COL1A2, Colec12, Cpxm2, Cpz, DCN, Emp3, GPC3, Nupr1, Omd, Pcolce Slamf9, Tmem27, Tspan8 </td><td> Matrice extracellulaire jonctions cellule-cellule et </td></tr><tr><td> &gt; 50 fois </td><td> AQP1, Asgr1, Kcnj13, Slc5a5, Slc6a13, Slc6a20, Slc22a6, Sned1, Ttr </td><td> Ion &amp; homéostasie Solute </td></tr><tr><td> &gt; 50 fois </td><td> AlX3, Cdkn1c, FOXC2, IGFBP2, Ifitm1, Ifitm2, Nkx6-1, OSR1, Prrx2, SFRP1, TBX15. Upk1b, Wisp2, Wnt6 </td><td> Développement et régulation de la transcription </td></tr><tr><td> &gt; 50 fois </td><td> Gpha2, Mfap5, Mpzl2 Plac8, Scgb1c1, Sostdc1, Steap1 </td><td> Inconnu &amp; Divers </td></tr><tr><td> De 30 à 50 fois </td&gt; <td> ANXA1 a, Angpt2, C6 a, GJB2, Ptgis, Thbd, TIMP1 </td><td> Vascularisation et coeur </td></tr><tr><td> De 30 à 50 fois </td><td> Casp12, CCL2 CCR1, Cd14, CXCL10, Ifitm3, Klra5, Lgals1, Lgals3, Ms4a4a, Ms4a7, Plscr1, SPP1, Xcl1 </td><td> Système immunitaire </td></tr><tr><td> De 30 à 50 fois </td><td> COL6A3, Cpxm1, Efemp1, Fmod, Mgp, NID2 </td><td> Matrice extracellulaire jonctions cellule-cellule et </td></tr><tr><td> De 30 à 50 fois </td><td> Cp, CUBN, GCGR, S100A6, Scn7a, Sct, Slc4a5, Slc16a11, Slco1a5 </td><td> Ion et l&#39;homéostasie Solute </td></tr><tr><td> De 30 à 50 fois </td><td> Cfd, Ch25h, Crabp2, Rarres2 </td><td> L&#39;acide rétinoïque et traitement des lipides </td></tr><tr><td> De 30 à 50 fois </td><td> BMP6, Casp12, DAB2 Folr1, IGF2, Msx1, Tbx18, TWIST1, Wnt5b </td><td> Développement et régulation de la transcription </td></tr><tr><td> De 30 à 50 fois </td><td> Cela3b, CLN6, C1qtnf7, Copz2, Dhrs7c, Gng11, Prss23, Srpx, Vim </td><td> Inconnu &amp; Divers </td></tr><tr><td> De 15 à 30 fois </td><td> Adm, Angpt1, Angptl2, BGN, un CKLF, CNN1, Cox8h, CTSK, F13a1, GJA5, Klf4, Lox, Lyz, Myl9, Procr, Pros1, RT1-Ba, Serpinb10, Serping1, Serpinf1, TGM2, TNMD, Trim63, Txnip un, Vamp5, Vtn </td><td> Vascularisation et coeur </td></tr><tr><td> De 15 à 30 fois </td><td> Ada a, BST2, Ccl6, CD40, CD68, CNTC, Dap, Faim3, Fkbp9, Fxyd5, FMO1, Glipr1, Ier3, Ifi47, Igsf6, Msc, NFATc4, RT1-Db1, Serpinb1a, TiR4, Tubb6 </td><td> Système immunitaire </td></tr><tr><td> De 15 à 30 fois </td><td> Adamtsl4, COL1A1, CRB3, Dpt, Egfl3, FBN1, FBLN1, FBLN5, Fn1, ITGB4, LAMA2, Lgals3bp, LOXL1, Mfap4, MMP14, Mmp23, PPIC, Serpinh1, TIMP3 </td><td> Matrice extracellulaire jonctions cellule-cellule et </td></tr><tr><td> De 15 à 30 fois </td><td> Cybrd1, Selenbp1, Slc2a4, Slc9a2, Slc13a3, Slc16a4, Slc22a8, Slc22a18 </td><td> Ion et l&#39;homéostasie Solute </td></tr><tr><td> De 15 à 30 fois </td><td> AGPAT2, Bdh2, Cyp26b1, Lpar3, Ltb4dh, OLR1, PON3, RBP1, RBP4 </td><td> L&#39;acide rétinoïque et traitement des lipides </td></tr><tr><td> De 15 à 30 fois </td><td> ATF3, Dkk4, Eya2, Ifitm7, Ltbp1, Mustn1, Nr2f2, ptrf, Sphk1, TGFBI, Tcea3 Tcfap2b, Wnt2b, WNT5A, ZIC1 </td><td> Développement et régulation de la transcription </td></tr><tr><td> De 15 à 30 fois </td><td> Adamts12, Adamtsl3, C1r, Crispld2, Crygn, CYP1B1, dse, ENPEP, Enpp2, Epn3, FLNA, FMO3, GNMT, GPRC5C, HSPB1, KLC3, Krt18, Krt19, Mdk, Mesp1, Ms4a6a, Ms4a6b, Ms4a11, Net1, Pdlim2, Phactr2, PLP2, Ppp1r3b, Pqlc3, Rin3, Spag11, SULT1A1, Tmem106a, Wfikkn2 </td><td> Inconnu &amp; Divers </td></tr></tbody></table> * Les gènes inclus dans le tableau doit être à la fois l&#39;expression de plus de 15 fois supérieure dans le striatum et Parietal cortex et de 5 fois au-dessus des niveaux de fond. Le plus faible des deux ratios (MAV / striatum ou VAC / cortex pariétal) pour chaque gène a été utilisé pour le regroupement. un des gènes se trouvent dans les cellules endothéliales, mais aussi sans doute jouer un rôle important dans la médiation des réponses immunitaires. Tableau 1. Gènes avec une * 15 fois ou plus l&#39;expression accrue de MAV par rapport à striatum et du cortex pariétal.

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F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drugs+of+abuse-induced+hyperthermia,+blood-brain+barrier+dysfunction+and+neurotoxicity:+neuroprotective+effects+of+a+new+antioxidant+compound+H-290/51.">Drugs of abuse-induced hyperthermia, blood-brain barrier dysfunction and neurotoxicity: neuroprotective effects of a new antioxidant compound H-290/51.</a> 13, 1903-1923 (2007).</li><li>Ho, E. L., Josephson, S. A., Lee, H. S., Smith, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrovascular+complications+of+methamphetamine+abuse.">Cerebrovascular complications of methamphetamine abuse.</a> Neurocrit. Care. 10, 295-305 (2009).</li><li>Ohta, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+ischemic+stroke+associated+with+methamphetamine+use.">Delayed ischemic stroke associated with methamphetamine use.</a> J. Emerg. Med. 28, 165-167 (2005).</li><li>Brenner, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropsychological+and+neuroimaging+findings+in+traumatic+brain+injury+and+post-traumatic+stress+disorder.">Neuropsychological and neuroimaging findings in traumatic brain injury and post-traumatic stress disorder.</a> Dialogues Clin. Neurosci. 13, 311-323 (2011).</li><li>Case, M. 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Nous n&#39;avons rien à déclarer. Le travail présenté ici ne représentent pas nécessairement les vues de la Food and Drug Administration.

Aspects techniques de la MAV et dissection du plexus choroïde Il est essentiel lors de la dissection de la MAV d&#39;avoir le cerveau &quot;submergé&quot; la plupart du temps dans le sérum physiologique ou de sodium tampon phosphate salin. Permettre à la MAV et le cortex se déshydrater pendant la dissection se traduira par la MAV adhérant étroitement à I. couche corticale Cela permettra d&#39;accroître la quantité de tissu cortical récolté avec la MAV et / ou le résultat de l&#39;incapacité de supprimer ces sections VAC adhérents du cortex. En outre, la patience est nécessaire lors de la dissection. Encore une fois, si l&#39;on se heurte à une certaine résistance au retrait de la MAV à partir du cortex dans un hémisphère lors de la dissection, passer à l&#39;autre hémisphère et revenir plus tard sur le côté où la résistance a été rencontrée. Cette méthode prend un peu de pratique de la perfection et nécessite environ 5 à 15 &quot;pratique&quot; dissections avant une récolte constante uniforme du tissu MAV est atteint. Procédé de démarrage et de la dissection removal de la MAV au cercle artériel à la base du cerveau facilite l&#39;élimination des méninges en utilisant le système vasculaire plus grande que le soutien &quot;échafaudage&quot;. Une grande partie de l&#39;origine du sang dans les vaisseaux MAV après sacrifice doit être éjecté au cours de la dissection, et moins de 5% de l&#39;ARN à partir de la récolte MAV doit être d&#39;origine sanguine. Il est possible de supprimer pratiquement tout le sang de l&#39;animal par perfusion avec 50 à 70 ml d&#39;une solution saline, en utilisant les techniques histologiques, avant la décapitation et le cerveau enlèvement. Cependant, il est alors beaucoup plus difficile de visualiser les tissus VAC pendant la dissection. Les trois sources les plus probables de la «contamination» des tissus VAC sont la glande pinéale, je couche corticale résiduelle des tissus et des tissus bulbe olfactif, mais il est également possible d&#39;obtenir des tissus de la glande pituitaire dans la préparation. Contamination pinéale dans la MAV est détectée par la MAV contenant un cycle de 1 à 2 mm de diamètre sphère qui est colorée en rouge foncé. La fonction principalede la glande pinéale est normalement considéré comme complètement différente de la MAV. Sa fonction principale est de produire la mélatonine, qui réglemente certains aspects du rythme circadien 9, et dans lipoxygénation 10 de précurseurs lipidiques. Bien que le gène Lox, qui régule l&#39;activité lipoxygénase, a été pensé pour être présents chez les adultes, principalement dans la glande pinéale 10, nos résultats indiquent qu&#39;il est également toujours présent à des niveaux significatifs dans MAV. Résiduelles corticales ou olfactives résultats de contamination ampoule dans la rosée toile d&#39;araignée tissu MAV ayant des 1 à 2 mm tissus plus denses qui sont beaucoup plus pâle en couleur enfermé dans celui-ci. Ce peut être repéré par &quot;flottant&quot; de la MAV sur la surface du tampon, et ensuite l&#39;élimination des tissus plus lourds corticales ou ampoule en utilisant les deux pince à disséquer. Si la contamination de la MAV de la couche corticale I tissu, un tissu hypothalamique ou la glande pinéale est présent, plusieurs gènes auront une imporexpression significativement supérieure à ce qui est normalement présent dans la «propreté» de dissection. La contamination de la MAV avec la glande pinéale se traduira par une expression plus élevée de arylalkylamine N-acétyltransférase (AANAT) qui est nécessaire pour la synthèse de la mélatonine. Malheureusement, si la contamination se produit lors de la dissection pinéale MAV, les niveaux de Lox dans MAV ne pourra pas être déterminée avec précision. La contamination de la MAV avec le tissu cortical se traduira par une expression plus élevée de neurones spécifiques des gènes tels que hippocalcin (HPCA), parvalbumine (Pvalb) et / ou le récepteur pentraxine neuronale (Nptxr). La contamination des MAV avec le tissu hypothalamique se traduira par l&#39;expression supérieure de 1 &#39;hormone de croissance (GH1), proopiomélanocortine (POMC). Dans le cas où une contamination existe dans les tissus récoltés, la plupart de ces gènes peuvent être identifiés et non utilisées dans l&#39;analyse d&#39;expression génique. Ceci est particulièrement important pour les gènes présents dans la circulation blood qui peuvent encore être présents dans VAC ou du plexus choroïde. Interpretting données d&#39;expression génique à partir récolté MAV et du plexus choroïde La surface cérébrale (superficiel) avec système vasculaire méninges associés (MAV) et le plexus choroïde sont nécessaires pour la circulation sanguine cérébrale et le liquide céphalo-rachidien (LCR) homéostasie 4,11, 12, 13, 14, 15, 16, 17. La récolte tissu est adapté à l&#39;analyse biochimique et physiologique, et la MAV a été montré pour être sensibles aux dommages produits par l&#39;amphétamine et 1,2 hyperthermie par analyse de l&#39;expression génique. Ces résultats sont en rapport avec ce qui est également connu à propos de l&#39;hyperthermie sévère et l&#39;exposition aux amphétamines à la vascularisation du cerveau en général, 18,19,20. Des données cliniques humaines soutient la croyance que la vascularisation sous-dural est sensible aux dégâts provoqués par 21,22 amphétamine et de la méthamphétamine. En outre, les vascularisations majeures et mineures cérébraux inclus,compris ceux dans la couche pial des méninges qui sont récoltées dans VAC sont d&#39;un intérêt potentiellement élevé lorsqu&#39;ils enquêtent sur ​​les types de traumatisme crânien commotion 23,24 25. Le profil d&#39;expression génique de courant produit à partir de la MAV indique que la pie-mère et éventuellement les membranes méningées arachnoïdiennes peuvent jouer un rôle plus important que prévu dans la régulation de la composition du LCR. Dans le futur, par l&#39;utilisation de techniques de dissection microscope, il peut être possible de séparer davantage les tissus comprenant la MAV de sorte que les membranes et piales arachnoïde peut être séparé du présent système vasculaire artériel et éventuellement plus large de l&#39;autre. Cela permettra une meilleure interprétation de la fonction de chacun de ces 3 composantes de la MAV récolté.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif / équipement </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires (optionnel) </td></tr><tr><td> Solution saline normale (9 grammes salins / 1 litre H 2 O) </td><td> Interne </td><td></td><td> Dissection tampon </td></tr><tr><td> 0,1 M pH 7,4 phosphate de sodium </td><td> Interne </td><td></td><td> Dissection tampon </td></tr><tr><td> Os Rongeurs </td><td> Roboz </td><td> RS-8300 </td><td> L&#39;enlèvement os du crâne </td></tr><tr><td> Pince-plié pointe (4 &quot;de long et 0,8 mm de large pourboire) </td><td> Roboz </td><td> RS-5135 ou RS-5137 </td><td> Pince à dissection </td></tr><tr><td> Pince-droite pointe (5,5 &quot;de long) </td><td> Roboz </td><td> RS-8124 ou RS-8104 </td><td> Pince à pansements pouce </td></tr></tbody></table>

a visual description of the dissection of the cerebral surface vasculature and associated meninges and the choroid plexus from rat brain

Cette présentation vidéo a été créé pour montrer une méthode de récolte des deux plus importantes structures fortement vascularisés, ne réside pas dans le cerveau proprement dit, que la fonction du cerveau antérieur soutien. Ils sont la surface cérébrale (superficielle) vasculaire ainsi que méninges associés (MAV) et la choroïde qui sont nécessaires pour le débit sanguin cérébral et le liquide céphalo-rachidien (LCR) l&#39;homéostasie du plexus. Le tissu prélevé est adapté à l&#39;analyse biochimique et physiologique, et la MAV a été montré pour être sensibles aux dommages produits par l&#39;amphétamine et 1,2 hyperthermie. En outre, les vascularisations cérébrales majeures et mineures récoltés dans MAV sont d&#39;un intérêt potentiellement élevé lors des enquêtes types commotion de traumatisme crânien. La MAV disséqué dans cette présentation consiste en la piale et une partie de la membrane arachnoïde (moins-mère) des méninges et du système vasculaire surface majeure et mineure cérébrale. La dissection du plexus choroïde est la structure qui se trouve dans le lateral ventricules comme décrit par Oldfield et McKinley 3,4,5,6. Les méthodes utilisées pour la récolte de ces deux tissus aussi faciliter la récolte du tissu cortical régionale dépourvue de méninges et plus vasculaire cérébral surface, et est compatible avec la récolte d&#39;autres tissus du cerveau comme le striatum, l&#39;hypothalamus, l&#39;hippocampe, etc La dissection des deux tissus prend 5 à 10 min au total. Les niveaux d&#39;expression génique pour la MAV disséqués et du plexus choroïde, comme représentés et décrits dans le présent document peut être trouvé à GSE23093 (MAV) et GSE29733 (plexus choroïde) dans le dépôt NCBI GEO. Ces données ont été, et est, utilisé pour aider à mieux comprendre le fonctionnement de la MAV et du plexus choroïde et de la façon dont les événements neurotoxiques tels que hyperthermie sévère et AMPH nuire à leur fonction.

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A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain

Cette présentation vidéo montre une méthode de récolte des deux plus importantes structures hautement vasculaires qui soutiennent la fonction du cerveau antérieur. Ils sont la surface cérébrale (superficielle) vasculaire ainsi que méninges associés (MAV) et la choroïde qui sont nécessaires pour le débit sanguin cérébral et le liquide céphalo-rachidien (LCR) l&#39;homéostasie du plexus.

Une description visuelle de la dissection de la vascularisation cérébrale et de surface associées Méninges et le plexus choroïde du cerveau de rat

This video presentation was created to show a method of harvesting the two most important highly vascular structures, not residing within the brain ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

47.9K vues.  National Center for Toxicological Research. Cette présentation vidéo montre une méthode de récolte des deux plus importantes structures hautement vasculaires qui soutiennent la fonction du cerveau antérieur. Ils sont la surface cérébrale (superficielle) vasculaire ainsi que méninges associés (MAV) et la choroïde qui sont nécessaires pour le débit sanguin cérébral et le liquide céphalo-rachidien (LCR) l'homéostasie du plexus.

Vidéo: A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable clinical state; in the development of animal models of focal ischemia, however, achieving reproducibility of experimentally induced infarct volume is essential. The rat is a widely used animal model for stroke due to its relatively low animal husbandry costs and to the similarity of its cranial circulation to that of humans2,3. In humans, the middle cerebral artery (MCA) is most commonly affected in stroke syndromes and multiple methods of MCA occlusion (MCAO) have been described to mimic this clinical syndrome in animal models. Because recanalization commonly occurs following an acute stroke in the human, reperfusion after a period of occlusion has been included in many of these models. In this video, we demonstrate the transient endovascular suture MCAO model in the spontaneously hypertensive rat (SHR). A filament with a silicon tip coating is placed intraluminally at the MCA origin for 60 minutes, followed by reperfusion. Note that the optimal occlusion period may vary in other rat strains, such as Wistar or Sprague-Dawley. Several behavioral indicators of stroke in the rat are shown. Focal ischemia is confirmed using T2-weighted magnetic resonance images and by staining brain sections with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) 24 hours after MCAO.

Surgical induction of ischemic brain damage in the rat is a widely used model for stroke research. Here we demonstrate the induction of focal cerebral ischemia by occlusion of the middle cerebral artery. Visualization of the resulting infarct by histological staining and magnetic resonance imaging is also shown.

Focale modèle d&#39;ischémie cérébrale par occlusion suture endovasculaire de l&#39;artère cérébrale moyenne chez le rat

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

Recherche

Neurosciences

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to monitor the disease course in the follow-up period. Changes in the VEP parameters closely correlate with pathological damage in the optic nerve. This protocol provides a detailed description about the rodent model of optic nerve microinjection, in which a partial demyelination lesion is produced in the optic nerve. VEP recording techniques are also discussed. Using skull implanted electrodes, we are able to acquire reproducible intra-session and between-session VEP traces. VEPs can be recorded on individual animals over a period of time to assess the functional changes in the optic nerve longitudinally. The optic nerve demyelination model, in conjunction with the VEP recording protocol, provides a tool to investigate the disease processes associated with demyelination and remyelination, and can potentially be employed to evaluate the effects of new remyelinating drugs or neuroprotective therapies.

Focal demyelination is induced in the optic nerve using lysolecithin microinjection. Visual evoked potentials are recorded via skull electrodes implanted over the visual cortex to examine the signal conduction along the visual pathway in vivo. This protocol details the surgical procedures underlying electrode implantation and optic nerve microinjection.

Enregistrement Potentiel évoqué visuel dans un modèle de rat of Experimental Optic Nerve démyélinisation

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

The choroid plexus is located in the ventricular wall of the brain, the main function of which is believed to be production of cerebrospinal fluid. Choroid plexus epithelial cells (CPECs) covering the surface of choroid plexus tissue harbor multiple unique cilia, but most of the functions of these cilia remain to be investigated. To uncover the function of CPEC cilia with particular reference to their motility, an ex vivo observation system was developed to monitor ciliary motility during embryonic, perinatal and postnatal periods. The choroid plexus was dissected out of the brain ventricle and observed under a video-enhanced contrast microscope equipped with differential interference contrast optics. Under this condition, a simple and quantitative method was developed to analyze the motile profiles of CPEC cilia for several hours ex vivo. Next, the morphological changes of cilia during development were observed by scanning electron microscopy to elucidate the relationship between the morphological maturity of cilia and motility. Interestingly, this method could delineate changes in the number and length of cilia, which peaked at postnatal day (P) 2, while the beating frequency reached a maximum at P10, followed by abrupt cessation at P14. These techniques will enable elucidation of the functions of cilia in various tissues. While related techniques have been published in a previous report1, the current study focuses on detailed techniques to observe the motility and morphology of CPEC cilia ex vivo.

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

In this study, a detailed light microscopic technique was optimized for real-time observation and analysis of the motion of CPEC cilia ex vivo together with an electron microscopic method for ultrastructural analysis.

Observation du Mouvement ciliaire des cellules épithéliales plexus choroïde<em&gt; Ex Vivo</em

The choroid plexus is located in the ventricular wall of the brain, the main function of which is believed to be production of cerebrospinal fluid. ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful analysis of synaptic transmission modulation when performing field potential or intracellular recordings. This manuscript describes methodological aspects that might be helpful in improving experimental conditions for the maintenance of acute brain slices and for recording field excitatory postsynaptic potentials in a commercially available submersion chamber with an outflow-carbogenation unit. The outflow-carbogenation helps to stabilize the oxygen level in experiments that rely on the recycling of a small buffer reservoir to enhance the cost-efficiency of drug experiments. In addition, the manuscript presents representative experiments that examine the effects of different carbogenation modes and stimulation paradigms on the activity-dependent synaptic plasticity of synaptic transmission.

This protocol describes the stabilization of the oxygen level in a small volume of recycled buffer and methodological aspects of recording activity-dependent synaptic plasticity in submerged acute hippocampal slices.

Enregistrement de la plasticité synaptique dans des tranches d’hippocampe aiguës maintenues dans un petit volume recyclage - Perfusion- et système de chambre de Submersion-type

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Live Imaging of Primary Cerebral Cortex Cells Using a 2D Culture System

During cerebral cortex development, progenitor cells undergo several rounds of symmetric and asymmetric cell divisions to generate new progenitors or postmitotic neurons. Later, some progenitors switch to a gliogenic fate, adding to the astrocyte and oligodendrocyte populations. Using time-lapse video-microscopy of primary cerebral cortex cell cultures, it is possible to study the cellular and molecular mechanisms controlling the mode of cell division and cell cycle parameters of progenitor cells. Similarly, the fate of postmitotic cells can be examined using cell-specific fluorescent reporter proteins or post-imaging immunocytochemistry. More importantly, all these features can be analyzed at the single-cell level, allowing the identification of progenitors committed to the generation of specific cell types. Manipulation of gene expression can also be performed using viral-mediated transfection, allowing the study of cell-autonomous and non-cell-autonomous phenomena. Finally, the use of fusion fluorescent proteins allows the study of symmetric and asymmetric distribution of selected proteins during division and the correlation with daughter cells fate. Here, we describe the time-lapse video-microscopy method to image primary cerebral cortex murine cells for up to several days and analyze the mode of cell division, cell cycle length and fate of newly generated cells. We also describe a simple method to transfect progenitor cells, which can be applied to manipulate genes of interest or simply label cells with reporter proteins.

Live imaging is a powerful tool to study cellular behaviors in real time. Here, we describe a protocol for time-lapse video-microscopy of primary cerebral cortex cells that allows a detailed examination of the phases enacted during the lineage progression from primary neural stem cells to differentiated neurons and glia.

Imagerie des cellules du Cortex cérébral primaire à l’aide d’un système de Culture 2D en direct

During cerebral cortex development, progenitor cells undergo several rounds of symmetric and asymmetric cell divisions to generate new progenitors or ...

A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor determining patient outcome and is therefore frequently taken as a study endpoint. However, in small animal studies on SAH, quantification of cerebral vasospasm is a major challenge. Here, an ex vivo method is presented that allows quantification of volumes of entire vessel segments, which can be used as an objective measure to quantify cerebral vasospasm. In a first step, endovascular casting of the cerebral vasculature is performed using a radiopaque casting agent. Then, cross-sectional imaging data are acquired by micro computed tomography. The final step involves 3-dimensional reconstruction of the virtual vascular tree, followed by an algorithm to calculate center lines and volumes of the selected vessel segments. The method resulted in a highly accurate virtual reconstruction of the cerebrovascular tree shown by a diameter-based comparison of anatomical samples with their virtual reconstructions. Compared with vessel diameters alone, the vessel volumes highlight the differences between vasospastic and non-vasospastic vessels shown in a series of SAH and sham-operated mice.

The goal of this article is to present a method that allows a 3-dimensional reconstruction of the cerebrovascular tree in mice after micro computed tomography and determination of volumes of entire vessel segments that can be used to quantify cerebral vasospasm in murine models of subarachnoid hemorrhage.

Une méthode volumétrique pour la Quantification du vasospasme cérébral dans un modèle murin d’hémorragie sous-arachnoïdienne

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor ...

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral vascular effects. Impact (i.e., non-blast) traumatic brain injury (TBI) is known to decrease pressure autoregulation in the cerebral vasculature in both humans and experimental animals. The hypothesis that blast-induced traumatic brain injury (bTBI), like impact TBI, results in impaired cerebral vascular reactivity was tested by measuring myogenic dilatory responses to reduced intravascular pressure in rodent middle cerebral arterial (MCA) segments from rats subjected to mild bTBI using an Advanced Blast Simulator (ABS) shock tube. Adult, male Sprague-Dawley rats were anesthetized, intubated, ventilated and prepared for Sham bTBI (identical manipulation and anesthesia except for blast injury) or mild bTBI. Rats were randomly assigned to receive Sham bTBI or mild bTBI followed by sacrifice 30 or 60 min post-injury. Immediately after bTBI, righting reflex (RR) suppression times were assessed, euthanasia at the time points post-injury was completed, the brain was harvested and the individual MCA segments were collected, mounted and pressurized. As the intraluminal pressure perfused through the arterial segments was reduced in 20 mmHg increments from 100 to 20 mmHg, MCA diameters were measured and recorded. With decreasing intraluminal pressure, MCA diameters steadily increased significantly above baseline in the Sham bTBI groups while MCA dilator responses were significantly reduced (p &#60; 0.05) in both bTBI groups as evidenced by the impaired, smaller MCA diameters recorded for the bTBI groups. In addition, RR suppression in the bTBI groups was significantly (p &#60; 0.05) higher than in the Sham bTBI groups. MCA&#39;s collected from the Sham bTBI groups exhibited typical vasodilatory properties to decreases in intraluminal pressure while MCA&#39;s collected following bTBI exhibited significantly impaired myogenic vasodilatory responses to reduced pressure that persisted for at least 60 min after bTBI.

Here, we present a protocol to describe methods for ex vivo vascular reactivity determination following a primary blast traumatic brain injury (bTBI) using isolated, pressurized, rodent middle cerebral arterial (MCA) segments. bTBI induction is accomplished using a shock tube, also known as an Advanced Blast Simulator (ABS) device.

Effets de neurotraumatologie induite par le souffle sur les rongeurs sous pression du milieu des artères cérébrales

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to intracranial delivery, intra-arterial administration of NSCs is less invasive and produces a more diffuse distribution of NSCs within the brain parenchyma. Further, intra-arterial delivery allows the first-pass effect in the brain circulation, lessening the potential for trapping of cells in peripheral organs, such as liver and spleen, a complication associated with peripheral injections. Here, we detail the methodology, in both mice and rats, for delivery of NSCs through the common carotid artery (mouse) or external carotid artery (rat) to the ipsilateral hemisphere after an ischemic stroke. Using GFP-labeled NSCs, we illustrate the widespread distribution achieved throughout the rodent ipsilateral hemisphere at 1 d, 1 week and 4 weeks after postischemic delivery, with a higher density in or near the ischemic injury site. In addition to long-term survival, we show evidence of differentiation of GFP-labeled cells at 4 weeks. The intra-arterial delivery approach described here for NSCs can also be used for administration of therapeutic compounds, and thus has broad applicability to varied CNS injury and disease models across multiple species.

A method for delivering neural stem cells, adaptable for injecting solutions or suspensions, through the common carotid artery (mouse) or external carotid artery (rat) after ischemic stroke is reported. Injected cells are distributed broadly throughout the brain parenchyma and can be detected up to 30 d after delivery.

Livraison intra-artérielle de cellules souches neuronales au cerveau du rat et de la souris : application à l’ischémie cérébrale

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...

Measuring Post-Stroke Cerebral Edema, Infarct Zone and Blood-Brain Barrier Breakdown in a Single Set of Rodent Brain Samples

One of the most common causes of morbidity and mortality worldwide is ischemic stroke. Historically, an animal model used to stimulate ischemic stroke involves middle cerebral artery occlusion (MCAO). Infarct zone, brain edema and blood-brain barrier (BBB) breakdown are measured as parameters that reflect the extent of brain injury after MCAO. A significant limitation to this method is that these measurements are normally obtained in different rat brain samples, leading to ethical and financial burdens due to the large number of rats that need to be euthanized for an appropriate sample size. Here we present a method to accurately assess brain injury following MCAO by measuring infarct zone, brain edema and BBB permeability in the same set of rat brains. This novel technique provides a more efficient way to evaluate the pathophysiology of stroke.

This protocol describes a novel technique of measuring the three most important parameters of ischemic brain injury on the same set of rodent brain samples. Using only one brain sample is highly advantageous in terms of ethical and economic costs.

Mesure de l’œdème cérébral post-AVC, de la zone infarctus et de la dégradation de la barrière céphalo-cérébrale dans un seul ensemble d’échantillons de cerveaux de rongeurs

One of the most common causes of morbidity and mortality worldwide is ischemic stroke. Historically, an animal model used to stimulate ischemic stroke ...

Extraction and Dissection of the Domesticated Pig Brain

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular systems, gastrointestinal systems, and nutrition, and the pig is increasingly being used as a large animal model in neuroscience. Furthermore, the pig is an accepted model to study neurodevelopment as it displays brain growth and development patterns similar to what occurs in humans. As a less common animal model in neuroscience, surgical and dissection procedures on pigs may not be as familiar or well-practiced among researchers. Therefore, a standardized visual protocol detailing consistent extraction and dissection methods may prove valuable for researchers working with the pig. The following video showcases a technique to remove the pig brain while keeping the cortex and brainstem intact and reviews methods to dissect several commonly investigated brain regions including the brainstem, cerebellum, midbrain, hippocampus, striatum, thalamus, and medial prefrontal cortex. The purpose of this video is to provide researchers with the tools and knowledge necessary to consistently perform a brain extraction and dissection on the four-week-old pig.

This protocol details the technique for removal of the pig brain in its entirety and dissection of several brain regions commonly studied in neuroscience.

Extraction et dissection du cerveau de porc domestiqué

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular ...