Este trabajo fue financiado por NCTR / FDA.

Aunque no se muestra en el vídeo, las ratas se les dio primero una sobredosis de 300 mg / kg de pentobarbital, lo que resulta en la anestesia en menos de 3 min y, a continuación sacrificaron por decapitación. Sus cerebros fueron luego rápidamente pero cuidadosamente retirados del cráneo y se enfrió en hielo frío solución salina normal durante 5 min. Es importante dejar que el cerebro fresco para esta cantidad de tiempo antes de la disección de la MAV, para que la MAV se puede separar de la superficie de la corteza (la parte superior de la capa I). El cerebro se colocó en el fondo de un plato de Petri de vidrio que descansa sobre hielo que estaba lleno (1 cm de profundidad) de helado de solución salina normal o de sodio 0,1 M de buffer fosfato salino pH = 7,4. Toda la disección se realiza con el cerebro en su mayor parte sumergió en solución salina. 1. Extirpación de la Glándula Pineal <ol><li> Coloque el cerebro hasta el lado dorsal (con relación a la parte inferior de la placa de Petri). La glándula pineal se encuentra en la región ventral más caudal entre los dos hemisferios sólo rostral a tél cerebelo (rebaje pineal), y está justo por debajo o en la superficie de las meninges más de los colículos. Retire la glándula pineal primero con dos pequeñas pinzas de punta dobladas. Es de color rosa como la corteza, pero es a menudo rodeada de restos de sangre y la vasculatura residual de la extracción del cerebro. </li></ol> 2. La eliminación de la MAV <ol><li> Da la vuelta al cerebro a través del &quot;boca abajo&quot; y separar la arteria vertebral, las pequeñas arterias y las meninges que cubren el puente de las meninges y la vasculatura del cerebro anterior. La eliminación de la MAV cerebro anterior es iniciada. Es importante comenzar ventralmente en el proceso de disección. Las grandes arterias principales del polígono de Willis, arterias cerebral media (MCA) y las arterias anteriores son los más fuertes y servir como &quot;andamios&quot; por la cual las arterias pequeñas y arteriolas superficiales del pial membrana puede entonces ser retirado de la corteza con el resto de las meninges. Consulte la opinión de Scremin 7 para mrepresentaciones visuales de mineral y los detalles de la vasculatura cerebral superficie. </li><li> A partir de cualquiera de los hemisferios, utilizar las pinzas dobladas pequeñas puntas para cortar la arteria comunicante posterior justo posterior a la unión carótida interna. Por lo tanto, la separación de los árboles arteriales más anterior y posterior del cerebro anterior. Repetir el mismo proceso para el hemisferio contralateral. </li><li> Agarrando la MCA y la arteria anterior con las pinzas, tirar suavemente en una dirección anterior-dorsal para que el MAV que cubre la corteza anterior ventral (piriforme, tubérculo olfatorio) se eleva por encima y alrededor del tracto olfatorio. Esto elimina gran parte de la MAV que cubre la corteza anterior (cingulado y orbital). </li><li> Girar el cerebro en un ángulo de 45 ° a 90 a la placa de Petri. Las regiones laterales, más anterior de la MAV que rodea a las regiones corticales laterales (granular insular, secundaria somatosensorial y la corteza auditiva) puede ser liberado de la corteza agarrando la MCA y arterias asociadoies y tirando suavemente dorsalmente a lo largo de la corteza. Si es necesario, los extremos de las pinzas se pueden utilizar para levantar y liberar las arterias principales de la corteza durante la disección. </li><li> Ahora quite las regiones más laterales posteriores de la MAV. (Nota, es mejor cambiar de un hemisferio al otro durante este proceso de cosecha para asegurar que la MAV permanece frío e hidratado. Además, si la resistencia en la liberación de la MAV de la corteza se encuentra en el interruptor de un hemisferio con el hemisferio contralateral temporalmente y luego volver al hemisferio original más adelante.) </li><li> Para eliminar las regiones más dorsales de la MAV que rodean la somatosensorial primaria y la corteza motora gire el cerebro hasta el lado dorsal (con relación a la parte inferior de la placa de Petri). Para liberar finalmente el Mav cerebro, utilice los extremos de las pinzas a lo largo del seno sagital. Esta porción de la MAV cosechada puede ser guardado temporalmente en solución salina enfriada con hielo hasta que las pruebas y el análisis o congelado para su posterior procesamiento. A menudola MAV que cubre las regiones más posteriores / caudal de la corteza (corteza entorrinal auditivas, visuales y más caudal) permanece unida a la corteza. Su eliminación se muestra más adelante en el video cuando el MAV entre la corteza y retrosplenial que recubre los colliculi se disecan. </li></ol> 3. La eliminación del plexo coroideo <ol><li> Coloque el lado dorsal del cerebro y mantenerlo en su lugar con las pinzas más grandes Presione las pinzas más pequeñas a lo largo de la línea media entre los hemisferios y luego utilice los extremos para perforar a través del cuerpo calloso y la corteza corpus (≈ -3,3 mm de bregma) en la parte superior de la línea media del hipocampo. </li><li> Use las pinzas para tirar de la corteza con calloso lejos del hipocampo dorsal y el tabique, exponiendo la mayor parte del ventrículo lateral. El plexo coroideo puede ser localizado e identificado por la línea ondulada de color rojo demarcación de la arteria principal que recorre su longitud. Usa los dos extremos de las pinzas para arrancar las paredes laterales de la tercera ventricle y ampliarla en el extremo más caudal (≈ -4,3 mm de bregma 8). </li><li> Uso de las pequeñas pinzas, tire de este extremo del plexo coroideo libre. Luego vaya a la región muy anterior entre el tabique y el caudado / putamen (extensión más rostral, ≈ 1,6 mm de bregma) y con las pinzas ampliar esta sección del ventrículo y tire del plexo coroideo libre. Realice el mismo procedimiento en el hemisferio contralateral al obtener el segundo plexo coroideo restante. De nuevo este tejido puede ser guardado temporalmente en solución salina enfriada con hielo hasta que las pruebas y el análisis o congelado para su posterior procesamiento. </li></ol> 4. La eliminación de la MAV que queda en el 3 º ventrículo Cubriendo el tálamo y el colículo así como en las regiones más caudal de la corteza como retroesplenial, auditivo y corteza visual <ol><li> Quite todo el hipocampo de ambos hemisferios exponiendo la MAV en el tálamo y colículo. La eliminación de losesta parte de la MAV es mucho menos difícil que la eliminación de MAV sobre la corteza. </li><li> Tire de esta parte de la MAV libre agarrando la vasculatura más grande que recubre la parte anterior del tálamo y tirando suavemente en sentido caudal. Esta vasculatura está conectado a la red collicular supra y suministra sangre al hipocampo dorsal y de la red tálamo dorsal. Tire a la basura caudalmente y libre poco a poco la red supracollicular hasta llegar a las últimas porciones de la vasculatura arterial círculo caudal. En este punto, más se debe tener cuidado para eliminar cualquier resto de MAV ventral posterior en la superficie de la retroesplenial granular, auditiva primaria y cortezas visuales. Al igual que con la otra sección de MAV cubriendo las porciones más anterior de la corteza, este tejido puede ser guardado temporalmente en solución salina enfriada con hielo hasta que las pruebas y el análisis o congelado para su posterior procesamiento. Cualquier remanente MAV posterior ventral cosechado con esta segunda sección MAV se debe quitar unad añadido a la sección de MAV primera diseccionado que cubre la corteza si han de ser analizados por separado. </li></ol> 5. Los resultados representativos Cuando la disección se realiza correctamente, los tejidos resultantes MAV deben estar en dos entidades intactas pesan alrededor de 35 a un total de 45 mg. El inicialmente diseccionado MAV que rodea la mayor parte de la corteza debe pesar aproximadamente 25 mg y la MAV que cubre el tálamo, el colículo y corteza occipital debe pesar aproximadamente 15 mg. Debe ser un poco de color rosado de la sangre residual en la vasculatura. El plexo coroideo bilateral cosechados deben estar en dos muestras de tejido intacto con un peso cada 1 a 2 mg. Aunque el exceso de agua puede eliminarse de la MAV antes de su almacenamiento o procesamiento con el uso del papel tejido tal como el utilizado en la limpieza de la lente, para evitar la pérdida de tejido que no es una buena idea para eliminar el exceso de agua de la coroides diseccionado plexo. Figura 1 se ha generado para comparando profil expresión<html> es en tres regiones (cuerpo estriado, la corteza parietal y MAV) bajo condiciones de control usando Agilent-014879 enteros Rat Genome 4x44K 60mer matrices de oligonucleótidos (G4131F, Agilent Technologies, Palo Alto, CA; NCBI GEO n º de acceso GPL7294; GSE23093 y GSE29733 que están presentes en el NCBI GEO repositorio). Los dos gráficos en la figura gráficamente muestran la expresión en 1) el cuerpo estriado en comparación con la corteza parietal y 2) la MAV en comparación con la corteza parietal. Es evidente que el cuerpo estriado y la corteza parietal son mucho más estrechamente relacionados entre sí que la MAV. Los datos que comparan el plexo coroideo con la MAV se presenta en una publicación futura. Sin embargo, es probable que los perfiles de expresión en la MAV y el plexo coroideo están más estrechamente relacionados entre sí que lo son para el cuerpo estriado y la corteza parietal. Figura 2 muestra la expresión diferencial de genes de respuesta a la hipertermia (EIH) versus AMPH en comparación MAV para controlar y entre ellos. contenido &quot;&gt; La expresión de genes de más de 11.000 genes con los oficiales símbolos de genes NCBI en MAV de animales de control se comparó con los registrados en el cuerpo estriado y la corteza parietal. Más de 2000 de estos genes tenían una expresión de 2,5 veces o más diferentes en el MAV en comparación con los dos neuronal tejidos ricos, y 550 genes tenían una diferencia de 10 veces mayor en la expresión. Algo más del 40% (253) de éstos eran genes con una expresión disminuida de 10-veces o más en MAV y estaban relacionadas con la función neuronal. Hubo 343 genes con una expresión más de 10-veces o más en comparación con MAV corteza parietal y el cuerpo estriado. Esta lista de genes se utilizó como punto de partida con el cual determinar los genes con un enriquecimiento muy alto en la MAV. Cuadro 1 se enumeran los genes con una mayor expresión de 15-veces en comparación con MAV corteza parietal y el cuerpo estriado y las clasifica con respecto a la función. Muchos de estos genes estaban relacionados con el sistema vascular y / o el sistema inmune. Estos tipos de genes debe ser enriquecida sobre 5 - a 10 - veces a causa del aumento de la vasculatura en sí y la sangre presente en ella. Sin embargo, incluso para los genes con funciones conocidas vasculares generales, un aumento por encima de 15-veces indica un enriquecimiento en MAV. También había un número de genes con cambios veces muy grandes que eran: 1) proteínas de la matriz extracelular (no específicamente relacionados con la vasculatura), 2) transportadores de soluto y 3) los lípidos y el metabolismo del ácido retinoico. Dado que el crecimiento así, pocos y diferenciación genética o factores de transcripción se encontraron. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig1.jpg" /> Figura 1. Comparación de la Expresión Génica en MAV con la corteza parietal y el cuerpo estriado. Parcela Volcán comparar los niveles de expresión génica de la corteza parietal y el cuerpo estriado (gráfica superior) y la corteza parietal y MAV (diagrama de abajo). Los símbolos rojos denotan los genes que son significativamente diferentes betwebaño regiones de p &lt;0,05 y tienen una expresión diferencial de 1,5 veces o más entre las regiones. Los símbolos negros representan los genes que no difieren significativamente entre las regiones (p&gt; 0,05) y están a menos de 1,5-veces difieren en la expresión. Los símbolos indican los genes de color rosa con menos de una diferencia de 1,5-veces en la expresión pero estadísticamente diferentes de manera significativa a p &lt;0,05. Los símbolos amarillos identificar los genes que tienen una expresión 1,5-veces o más, pero este cambio no es estadísticamente significativa a p &lt;0,05. Abreviaturas AMPH anfetamina EIH ambientalmente hipertermia inducida MAV meninges y la vasculatura cerebral asociada Norma normotérmica controla <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig2.jpg" /> Figura 2. Efectos de la hipertermia y la anfetamina sobre la expresión de genes en MAV. Volcán compararon parcelaslos niveles de expresión génica en el MAV después salina, o EIH AMPH en el punto 3 hr tiempo. Los símbolos rojos indican los genes que se consideran significativamente diferentes, mientras que los puntos negros / círculos representan los genes que no difieren significativamente entre regiones. Análisis estadístico adicional se utilizó para verificar que la expresión de las diferencias entre el control y los tratamientos eran de hecho estadísticamente significativa. <table border="1"><tbody><tr><td fo:width="1in"> Expresión MAV cerebral Expresión </td><td fo:width="4.5in"> NCBI Gene símbolos </td><td fo:width="1.5in"> Especificidad tejido o función informado (s) </td></tr><tr><td> &gt; 50-veces </td><td> ANXA2 a, Col8a1, Des, Esm1, Glycam1, Kl a, Lect1, Lepr, Lum, MYH11, Ogn, Tagln, Thbs2, TNNT2 </td><td> Vasculatura y corazón </td></tr><tr><td> &gt; 50-veces </td><td> CCL19, una CD74, DEFB1, Lrrc21, Mgl1, Mrc1, Msln, Pl.a2g5, PRG4, RT1-Bb, RT1-Da </td><td> Sistema Inmune </td></tr><tr><td> &gt; 50-veces </td><td> Adh1, Aebp1, Aldh1a2, GSTM2 </td><td> El ácido retinoico y procesamiento de los lípidos </td></tr><tr><td> &gt; 50-veces </td><td> Cdh1, COL3A1, COL1A2, Colec12, Cpxm2, CPZ, DCN, Emp3, GPC3, Nupr1, OMD, Pcolce Slamf9, Tmem27, Tspan8 </td><td> Matriz extracelular y uniones célula-célula </td></tr><tr><td> &gt; 50-veces </td><td> AQP1, Asgr1, Kcnj13, Slc5a5, Slc6a13, Slc6a20, Slc22a6, Sned1, Ttr </td><td> Ion y homeostasis de solutos </td></tr><tr><td> &gt; 50-veces </td><td> Alx3, CDKN1C, FOXC2, IGFBP2, IFITM1, Ifitm2, Nkx6-1, OSR1, Prrx2, SFRP1, Tbx15. Upk1b, Wisp2, Wnt6 </td><td> Desarrollo y regulación de la transcripción </td></tr><tr><td> &gt; 50-veces </td><td> Gpha2, Mfap5, Mpzl2 Plac8, Scgb1c1, Sostdc1, Steap1 </td><td> Desconocido y Otros </td></tr><tr><td> 30 a 50 veces </td&gt; <td> ANXA1 a, Angpt2, C6 a, GJB2, Ptgis, Thbd, TIMP1 </td><td> Vasculatura y corazón </td></tr><tr><td> 30 a 50 veces </td><td> Casp12, CCL2, CCR1, CD14, CXCL10, Ifitm3, Klra5, Lgals1, Lgals3, Ms4a4a, Ms4a7, Plscr1, Spp1, Xcl1 </td><td> Sistema Inmune </td></tr><tr><td> 30 a 50 veces </td><td> COL6A3, Cpxm1, Efemp1, FMod, pop, NID2 </td><td> Matriz extracelular y uniones célula-célula </td></tr><tr><td> 30 a 50 veces </td><td> Cp, CUBN, GCGR, S100A6, Scn7a, SCT, Slc4a5, Slc16a11, Slco1a5 </td><td> Ion y homeostasis de solutos </td></tr><tr><td> 30 a 50 veces </td><td> CFD, Ch25h, CRABP2, Rarres2 </td><td> El ácido retinoico y procesamiento de los lípidos </td></tr><tr><td> 30 a 50 veces </td><td> BMP6, Casp12, Dab2, Folr1, Igf2, MSX1, Tbx18, TWIST1, Wnt5b </td><td> Desarrollo y regulación de la transcripción </td></tr><tr><td> 30 a 50 veces </td><td> Cela3b, Cln6, C1qtnf7, Copz2, Dhrs7c, Gng11, Prss23, Srpx, Vim </td><td> Desconocido y Otros </td></tr><tr><td> 15 a 30 veces </td><td> Adm, Angpt1, Angptl2, BGN, Cklf a, cnn1, Cox8h, CTSK, F13a1, GJA5, Klf4, Lox, Lyz, Myl9, PROCR, PROS1, RT1-Ba, Serpinb10, Serping1, Serpinf1, TGM2, Tnmd, Trim63, Txnip a, Vamp5, VTN </td><td> Vasculatura y corazón </td></tr><tr><td> 15 a 30 veces </td><td> Ada a, Bst2, Ccl6, CD40, CD68, CTSC, Dap, Faim3, Fkbp9, Fxyd5, Fmo1, Glipr1, IER3, Ifi47, Igsf6, Msc, NFATc4, RT1-DB1, Serpinb1a, TiR4, Tubb6 </td><td> Sistema Inmune </td></tr><tr><td> 15 a 30 veces </td><td> Adamtsl4, COL1A1, CRB3, DPT, Egfl3, Fbn1, FBLN1, FBLN5, FN1, ITGB4, Lama2, Lgals3bp, LOXL1, Mfap4, MMP14, Mmp23, PPIC, Serpinh1, TIMP3 </td><td> Matriz extracelular y uniones célula-célula </td></tr><tr><td> 15 a 30 veces </td><td> Cybrd1, Selenbp1, SLC2A4, Slc9a2, Slc13a3, Slc16a4, Slc22a8, Slc22a18 </td><td> Ion y homeostasis de solutos </td></tr><tr><td> 15 a 30 veces </td><td> AGPAT2, Bdh2, Cyp26b1, Lpar3, Ltb4dh, Olr1, PON3, RBP1, RBP4 </td><td> El ácido retinoico y procesamiento de los lípidos </td></tr><tr><td> 15 a 30 veces </td><td> ATF3, Dkk4, Eya2, Ifitm7, Ltbp1, Mustn1, Nr2f2, PTRF, Sphk1, TGFBI, Tcfap2b Tcea3, Wnt2b, Wnt5a, Zic1 </td><td> Desarrollo y regulación de la transcripción </td></tr><tr><td> 15 a 30 veces </td><td> Adamts12, Adamtsl3, C1r, Crispld2, Crygn, CYP1B1, DSE, ENPEP, Enpp2, Epn3, FLNA, FMO3, GNMT, Gprc5c, HSPB1, Klc3, KRT18, Krt19, MDK, Mesp1, Ms4a6a, Ms4a6b, Ms4a11, NET1, Pdlim2, Phactr2, PLP2, Ppp1r3b, Pqlc3, Rin3, SPAG11, SULT1A1, Tmem106a, Wfikkn2 </td><td> Desconocido y Otros </td></tr></tbody></table> * Los genes incluidos en la tabla debe ser tanto la expresión por encima de más de 15-veces en el cuerpo estriado y Parietal córtex y 5-veces por encima de los niveles de fondo. La menor de las dos relaciones (MAV / estriado o MAV / corteza parietal) para cada gen se utiliza para la agrupación. unos genes se encuentran en las células endoteliales sino también probablemente juegan un papel importante en la mediación de la respuesta inmune. Tabla 1. Los genes con un * 15-veces o más mayor expresión en MAV comparación con el cuerpo estriado y la corteza parietal.

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E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflicted+traumatic+brain+injury+in+infants+and+young+children.">Inflicted traumatic brain injury in infants and young children.</a> Brain Pathol. 18, 571-582 (2008).</li><li>Maas, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+value+of+computerized+tomography+scan+characteristics+in+traumatic+brain+injury:+results+from+the+IMPACT+study.">Prognostic value of computerized tomography scan characteristics in traumatic brain injury: results from the IMPACT study.</a> J. Neurotrauma. 24, 303-314 (2007).</li></ol>

No tenemos nada que revelar. El trabajo presentado aquí no necesariamente representan la opinión de la Administración de Alimentos y Drogas.

Aspectos técnicos de la MAV y disección del plexo coroideo Es crítico durante la disección de la MAV tener el cerebro &quot;sumergido&quot; la mayor parte del tiempo en la solución salina normal o de sodio salina tamponada con fosfato. Permitir que la MAV y la corteza para deshidratar durante la disección tendrá como resultado la MAV fuertemente adheridas a la capa cortical I. Esto aumentará la cantidad de tejido cortical cosechado con la MAV y / o resultar en la imposibilidad de eliminar estas secciones MAV adheridas de la corteza. Además, la paciencia es necesaria durante la disección. Una vez más, si uno encuentra cierta resistencia en la eliminación de la MAV de la corteza en un hemisferio durante la disección, cambie al otro hemisferio y volver más tarde para el lado donde la resistencia fue encontrado. Este método requiere algo de práctica para perfeccionar y requiere entre 5 y 15 disecciones de &quot;práctica&quot; antes de una cosecha constante uniforme de tejido MAV se logra. El método de iniciar la disección y removal de la MAV en el círculo arterial en la base del cerebro facilita la eliminación de las meninges mediante el uso de la vasculatura más grande como apoyo &quot;andamiaje&quot;. Gran parte de la sangre originalmente en la vasculatura MAV después del sacrificio debe ser expulsado durante la disección, y menos del 5% de la RNA cosechada de MAV deberán ser de origen arterial. Es posible eliminar casi toda la sangre perfundiendo el animal con 50 a 70 ml de solución salina, usando técnicas histológicas, antes de la decapitación y la extracción del cerebro. Sin embargo, es entonces mucho más difícil de visualizar los tejidos MAV durante la disección. Las tres fuentes más probables de &quot;contaminación&quot; de los tejidos MAV son la glándula pineal, la capa cortical I tejido y tejido residual bulbo olfatorio, pero también es posible obtener tejido de la glándula pituitaria en la preparación. Contaminación pineal en el MAV es detectado por el MAV que contiene una ronda 1 a 2 mm de diámetro esfera que es de color rojo oscuro coloreado. La función primariade la glándula pineal se considera normalmente ser completamente diferente de la MAV. Su función principal es la de producir melatonina, que regula los aspectos de la ritmo circadiano 9, y en lipoxigenación 10 de precursores lipídicos. Aunque el Lox gen, que regula la actividad de la lipoxigenasa, se pensó para estar presente en los adultos, principalmente en la glándula pineal 10, nuestros resultados indican que también es consistentemente presentes en niveles significativos en MAV. Residuales corticales o olfativo resultados bulbo de contaminación en el rosáceo en forma de banda de tejido que tiene algunas MAV 1 a 2 mm de los tejidos más densos que son mucho más pálida en color incluida en ella. Esto puede ser visto a &quot;flotar&quot; la MAV en la superficie del tampón, y luego eliminando los tejidos corticales más pesado o bombilla utilizando las dos pinzas de disección. Si la contaminación de la MAV de capa cortical I tejido, tejido hipotalámico o de la glándula pineal está presente, entonces varios genes tendrá un signifiexpresión significativamente mayor que la que normalmente está presente en una &quot;limpia&quot; la disección. La contaminación de la MAV con la glándula pineal resultará en una mayor expresión de arilalquilamina N-acetiltransferasa (AANAT) que es necesaria para la síntesis de melatonina. Desafortunadamente, si la contaminación pineal se produce durante la disección MAV, los niveles de LOX en MAV no será capaz de determinar con precisión. La contaminación de la MAV con el tejido cortical resultará en una mayor expresión de genes específicos de neuronas tales como hippocalcin (HPCA), parvalbúmina (Pvalb) y / o receptor de pentraxina neuronal (Nptxr). La contaminación de MAV con tejido hipotalámico dará lugar a la expresión más elevada de la hormona de crecimiento 1 (GH1), proopiomelanocortina (POMC). En el caso de que alguna contaminación existe en los tejidos cosechados, la mayoría de estos genes pueden ser identificados y no se utiliza en el análisis de la expresión génica. Esto es particularmente importante para los genes presentes en el blo circulanteod que todavía puede estar presente en MAV o plexo coroideo. Interpretting datos de expresión génica de MAV cosechada y plexo coroideo La superficie cerebral (superficial) vasculatura junto con meninges asociados (MAV) y el plexo coroideo son necesarias para que el flujo sanguíneo cerebral y líquido cefalorraquídeo (LCR) homeostasis 4,11, 12, 13, 14, 15, 16, 17. La cosecha de tejido es adecuado para el análisis bioquímico y fisiológico, y la MAV se ha mostrado sensible a los daños producidos por las anfetaminas y 1,2 hipertermia a través de análisis de expresión génica. Estos resultados son acordes con lo que también se conoce sobre la hipertermia severa y la exposición a las anfetaminas a la vasculatura del cerebro en general 18,19,20. Humanos de los datos clínicos apoya la creencia de que la vasculatura subdural es sensible a los daños por anfetamina y metanfetamina 21,22. Además, las vasculaturas cerebrales mayores y menores incluídoIng. las de la capa pial de las meninges que se cosechan en MAV son de interés potencialmente alto en la investigación de los tipos de trauma en la cabeza conmoción 23,24 25. El perfil de expresión génica de corriente producido a partir de la MAV indica que la pía madre y, posiblemente, las membranas meníngeas aracnoideas puede jugar un papel mayor que la esperada en la regulación de composición CSF. En el futuro, a través del uso de técnicas de microscopía de disección, puede ser posible para separar aún más los tejidos que comprenden la MAV modo que las membranas pial y la aracnoides se puede separar de la presente vasculatura arterial más grande y, posiblemente, una de la otra. Esto permitirá una mejor interpretación de la función de cada uno de estos 3 componentes de la MAV se recogieron.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo / equipo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios (opcional) </td></tr><tr><td> Solución salina normal (9 gramos de solución salina / 1 litro de H 2 O) </td><td> En casa </td><td></td><td> Disección búfer </td></tr><tr><td> 0,1 M de fosfato de sodio pH 7,4 </td><td> En casa </td><td></td><td> Disección búfer </td></tr><tr><td> La gubia ósea </td><td> Roboz </td><td> RS-8300 </td><td> Cráneo de la eliminación de hueso </td></tr><tr><td> Pinzas de punta doblada-(4 &quot;de largo y 0,8 mm de ancho punta) </td><td> Roboz </td><td> RS-5135 RS o 5137- </td><td> Pinza de disección </td></tr><tr><td> Pinzas de punta-recto (5,5 &quot;de largo) </td><td> Roboz </td><td> RS-8124 RS o 8104- </td><td> Pinza del pulgar Dressing </td></tr></tbody></table>

a visual description of the dissection of the cerebral surface vasculature and associated meninges and the choroid plexus from rat brain

Esta presentación en video fue creado para mostrar un método de recolección de las dos estructuras altamente vasculares más importantes, no residentes en el cerebro apropiada, que la función del cerebro anterior apoyo. Ellos son la superficie cerebral (superficial) vasculatura junto con meninges asociados (MAV) y el plexo coroideo que son necesarios para el flujo de sangre cerebral y líquido cefalorraquídeo (LCR) homeostasis. El tejido recogido es adecuado para el análisis bioquímico y fisiológico, y la MAV se ha mostrado sensible a los daños producidos por las anfetaminas y 1,2 hipertermia. A su vez, los vasculaturas cerebrales mayores y menores cosechadas en MAV son de interés potencialmente alto en la investigación de los tipos de conmoción trauma en la cabeza. El MAV diseccionado en esta presentación consiste en la pía madre y algunos de la aracnoides (menos dura) de las meninges y los vasos cerebrales superficie mayor y menor. El plexo coroideo diseccionado es la estructura que reside en el lateral ventrículos según lo descrito por Oldfield y McKinley 3,4,5,6. Los métodos utilizados para la recolección de estos dos tejidos también facilitar la recolección de tejido cortical regional desprovisto de meninges y mayor superficie de la vasculatura cerebral, y es compatible con la recolección de otros tejidos del cerebro tales como el cuerpo estriado, hipotálamo, hipocampo, etc La disección de los dos tejidos se lleva del total 5 a 10 minutos. Los niveles de expresión de genes para la MAV diseccionado y el plexo coroideo, como se muestra y describe en esta presentación se puede encontrar en GSE23093 (MAV) y GSE29733 (plexo coroideo) en el repositorio de NCBI GEO. Estos datos han sido y está siendo, utilizados para ayudar a comprender mejor el funcionamiento de la MAV y el plexo coroideo y la forma neurotóxica eventos tales como la hipertermia severa y AMPH adversamente afectar su función.

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A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain

Esta presentación en video muestra un método de recolección de las dos estructuras altamente vasculares más importantes que apoyan la función del cerebro anterior. Ellos son la superficie cerebral (superficial) vasculatura junto con meninges asociados (MAV) y el plexo coroideo que son necesarios para el flujo de sangre cerebral y líquido cefalorraquídeo (LCR) homeostasis.

Una descripción visual de la disección de la vasculatura cerebral superficial y las meninges asociada y el plexo coroideo del cerebro de rata

This video presentation was created to show a method of harvesting the two most important highly vascular structures, not residing within the brain ...

a-visual-description-dissection-cerebral-surface-vasculature

Research

JoVE Journal

Neuroscience

47.9K vistas.  National Center for Toxicological Research. Esta presentación en video muestra un método de recolección de las dos estructuras altamente vasculares más importantes que apoyan la función del cerebro anterior. Ellos son la superficie cerebral (superficial) vasculatura junto con meninges asociados (MAV) y el plexo coroideo que son necesarios para el flujo de sangre cerebral y líquido cefalorraquídeo (LCR) homeostasis.

Video: A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable clinical state; in the development of animal models of focal ischemia, however, achieving reproducibility of experimentally induced infarct volume is essential. The rat is a widely used animal model for stroke due to its relatively low animal husbandry costs and to the similarity of its cranial circulation to that of humans2,3. In humans, the middle cerebral artery (MCA) is most commonly affected in stroke syndromes and multiple methods of MCA occlusion (MCAO) have been described to mimic this clinical syndrome in animal models. Because recanalization commonly occurs following an acute stroke in the human, reperfusion after a period of occlusion has been included in many of these models. In this video, we demonstrate the transient endovascular suture MCAO model in the spontaneously hypertensive rat (SHR). A filament with a silicon tip coating is placed intraluminally at the MCA origin for 60 minutes, followed by reperfusion. Note that the optimal occlusion period may vary in other rat strains, such as Wistar or Sprague-Dawley. Several behavioral indicators of stroke in the rat are shown. Focal ischemia is confirmed using T2-weighted magnetic resonance images and by staining brain sections with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) 24 hours after MCAO.

Surgical induction of ischemic brain damage in the rat is a widely used model for stroke research. Here we demonstrate the induction of focal cerebral ischemia by occlusion of the middle cerebral artery. Visualization of the resulting infarct by histological staining and magnetic resonance imaging is also shown.

Modelo de isquemia cerebral focal por oclusión endovascular de sutura de la arteria cerebral media en la rata

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

Investigación

Neurociencias

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to monitor the disease course in the follow-up period. Changes in the VEP parameters closely correlate with pathological damage in the optic nerve. This protocol provides a detailed description about the rodent model of optic nerve microinjection, in which a partial demyelination lesion is produced in the optic nerve. VEP recording techniques are also discussed. Using skull implanted electrodes, we are able to acquire reproducible intra-session and between-session VEP traces. VEPs can be recorded on individual animals over a period of time to assess the functional changes in the optic nerve longitudinally. The optic nerve demyelination model, in conjunction with the VEP recording protocol, provides a tool to investigate the disease processes associated with demyelination and remyelination, and can potentially be employed to evaluate the effects of new remyelinating drugs or neuroprotective therapies.

Focal demyelination is induced in the optic nerve using lysolecithin microinjection. Visual evoked potentials are recorded via skull electrodes implanted over the visual cortex to examine the signal conduction along the visual pathway in vivo. This protocol details the surgical procedures underlying electrode implantation and optic nerve microinjection.

Grabación de potencial evocado visual en un modelo de rata de Experimental del Nervio Óptico Desmielinización

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

The choroid plexus is located in the ventricular wall of the brain, the main function of which is believed to be production of cerebrospinal fluid. Choroid plexus epithelial cells (CPECs) covering the surface of choroid plexus tissue harbor multiple unique cilia, but most of the functions of these cilia remain to be investigated. To uncover the function of CPEC cilia with particular reference to their motility, an ex vivo observation system was developed to monitor ciliary motility during embryonic, perinatal and postnatal periods. The choroid plexus was dissected out of the brain ventricle and observed under a video-enhanced contrast microscope equipped with differential interference contrast optics. Under this condition, a simple and quantitative method was developed to analyze the motile profiles of CPEC cilia for several hours ex vivo. Next, the morphological changes of cilia during development were observed by scanning electron microscopy to elucidate the relationship between the morphological maturity of cilia and motility. Interestingly, this method could delineate changes in the number and length of cilia, which peaked at postnatal day (P) 2, while the beating frequency reached a maximum at P10, followed by abrupt cessation at P14. These techniques will enable elucidation of the functions of cilia in various tissues. While related techniques have been published in a previous report1, the current study focuses on detailed techniques to observe the motility and morphology of CPEC cilia ex vivo.

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

In this study, a detailed light microscopic technique was optimized for real-time observation and analysis of the motion of CPEC cilia ex vivo together with an electron microscopic method for ultrastructural analysis.

Observación del Movimiento ciliar de las células epiteliales del plexo coroideo<em&gt; Ex Vivo</em

The choroid plexus is located in the ventricular wall of the brain, the main function of which is believed to be production of cerebrospinal fluid. ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful analysis of synaptic transmission modulation when performing field potential or intracellular recordings. This manuscript describes methodological aspects that might be helpful in improving experimental conditions for the maintenance of acute brain slices and for recording field excitatory postsynaptic potentials in a commercially available submersion chamber with an outflow-carbogenation unit. The outflow-carbogenation helps to stabilize the oxygen level in experiments that rely on the recycling of a small buffer reservoir to enhance the cost-efficiency of drug experiments. In addition, the manuscript presents representative experiments that examine the effects of different carbogenation modes and stimulation paradigms on the activity-dependent synaptic plasticity of synaptic transmission.

This protocol describes the stabilization of the oxygen level in a small volume of recycled buffer and methodological aspects of recording activity-dependent synaptic plasticity in submerged acute hippocampal slices.

Grabación de la plasticidad sináptica en rebanadas Hippocampal agudas mantenidas en un pequeño volumen reciclado - perfusión- y sistema de cámara de tipo inmersión

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Live Imaging of Primary Cerebral Cortex Cells Using a 2D Culture System

During cerebral cortex development, progenitor cells undergo several rounds of symmetric and asymmetric cell divisions to generate new progenitors or postmitotic neurons. Later, some progenitors switch to a gliogenic fate, adding to the astrocyte and oligodendrocyte populations. Using time-lapse video-microscopy of primary cerebral cortex cell cultures, it is possible to study the cellular and molecular mechanisms controlling the mode of cell division and cell cycle parameters of progenitor cells. Similarly, the fate of postmitotic cells can be examined using cell-specific fluorescent reporter proteins or post-imaging immunocytochemistry. More importantly, all these features can be analyzed at the single-cell level, allowing the identification of progenitors committed to the generation of specific cell types. Manipulation of gene expression can also be performed using viral-mediated transfection, allowing the study of cell-autonomous and non-cell-autonomous phenomena. Finally, the use of fusion fluorescent proteins allows the study of symmetric and asymmetric distribution of selected proteins during division and the correlation with daughter cells fate. Here, we describe the time-lapse video-microscopy method to image primary cerebral cortex murine cells for up to several days and analyze the mode of cell division, cell cycle length and fate of newly generated cells. We also describe a simple method to transfect progenitor cells, which can be applied to manipulate genes of interest or simply label cells with reporter proteins.

Live imaging is a powerful tool to study cellular behaviors in real time. Here, we describe a protocol for time-lapse video-microscopy of primary cerebral cortex cells that allows a detailed examination of the phases enacted during the lineage progression from primary neural stem cells to differentiated neurons and glia.

Proyección de imagen de las células de la corteza Cerebral primaria usando un sistema 2D de la cultura en vivo

During cerebral cortex development, progenitor cells undergo several rounds of symmetric and asymmetric cell divisions to generate new progenitors or ...

A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor determining patient outcome and is therefore frequently taken as a study endpoint. However, in small animal studies on SAH, quantification of cerebral vasospasm is a major challenge. Here, an ex vivo method is presented that allows quantification of volumes of entire vessel segments, which can be used as an objective measure to quantify cerebral vasospasm. In a first step, endovascular casting of the cerebral vasculature is performed using a radiopaque casting agent. Then, cross-sectional imaging data are acquired by micro computed tomography. The final step involves 3-dimensional reconstruction of the virtual vascular tree, followed by an algorithm to calculate center lines and volumes of the selected vessel segments. The method resulted in a highly accurate virtual reconstruction of the cerebrovascular tree shown by a diameter-based comparison of anatomical samples with their virtual reconstructions. Compared with vessel diameters alone, the vessel volumes highlight the differences between vasospastic and non-vasospastic vessels shown in a series of SAH and sham-operated mice.

The goal of this article is to present a method that allows a 3-dimensional reconstruction of the cerebrovascular tree in mice after micro computed tomography and determination of volumes of entire vessel segments that can be used to quantify cerebral vasospasm in murine models of subarachnoid hemorrhage.

Un método volumétrico para la cuantificación de vasoespasmo Cerebral en un modelo murino de hemorragia subaracnoidea

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor ...

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral vascular effects. Impact (i.e., non-blast) traumatic brain injury (TBI) is known to decrease pressure autoregulation in the cerebral vasculature in both humans and experimental animals. The hypothesis that blast-induced traumatic brain injury (bTBI), like impact TBI, results in impaired cerebral vascular reactivity was tested by measuring myogenic dilatory responses to reduced intravascular pressure in rodent middle cerebral arterial (MCA) segments from rats subjected to mild bTBI using an Advanced Blast Simulator (ABS) shock tube. Adult, male Sprague-Dawley rats were anesthetized, intubated, ventilated and prepared for Sham bTBI (identical manipulation and anesthesia except for blast injury) or mild bTBI. Rats were randomly assigned to receive Sham bTBI or mild bTBI followed by sacrifice 30 or 60 min post-injury. Immediately after bTBI, righting reflex (RR) suppression times were assessed, euthanasia at the time points post-injury was completed, the brain was harvested and the individual MCA segments were collected, mounted and pressurized. As the intraluminal pressure perfused through the arterial segments was reduced in 20 mmHg increments from 100 to 20 mmHg, MCA diameters were measured and recorded. With decreasing intraluminal pressure, MCA diameters steadily increased significantly above baseline in the Sham bTBI groups while MCA dilator responses were significantly reduced (p &#60; 0.05) in both bTBI groups as evidenced by the impaired, smaller MCA diameters recorded for the bTBI groups. In addition, RR suppression in the bTBI groups was significantly (p &#60; 0.05) higher than in the Sham bTBI groups. MCA&#39;s collected from the Sham bTBI groups exhibited typical vasodilatory properties to decreases in intraluminal pressure while MCA&#39;s collected following bTBI exhibited significantly impaired myogenic vasodilatory responses to reduced pressure that persisted for at least 60 min after bTBI.

Here, we present a protocol to describe methods for ex vivo vascular reactivity determination following a primary blast traumatic brain injury (bTBI) using isolated, pressurized, rodent middle cerebral arterial (MCA) segments. bTBI induction is accomplished using a shock tube, also known as an Advanced Blast Simulator (ABS) device.

Efectos de Neurotrauma inducido ráfaga en roedor a presión media de las arterias cerebrales

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to intracranial delivery, intra-arterial administration of NSCs is less invasive and produces a more diffuse distribution of NSCs within the brain parenchyma. Further, intra-arterial delivery allows the first-pass effect in the brain circulation, lessening the potential for trapping of cells in peripheral organs, such as liver and spleen, a complication associated with peripheral injections. Here, we detail the methodology, in both mice and rats, for delivery of NSCs through the common carotid artery (mouse) or external carotid artery (rat) to the ipsilateral hemisphere after an ischemic stroke. Using GFP-labeled NSCs, we illustrate the widespread distribution achieved throughout the rodent ipsilateral hemisphere at 1 d, 1 week and 4 weeks after postischemic delivery, with a higher density in or near the ischemic injury site. In addition to long-term survival, we show evidence of differentiation of GFP-labeled cells at 4 weeks. The intra-arterial delivery approach described here for NSCs can also be used for administration of therapeutic compounds, and thus has broad applicability to varied CNS injury and disease models across multiple species.

A method for delivering neural stem cells, adaptable for injecting solutions or suspensions, through the common carotid artery (mouse) or external carotid artery (rat) after ischemic stroke is reported. Injected cells are distributed broadly throughout the brain parenchyma and can be detected up to 30 d after delivery.

Entrega intra-arterial de células madre neuronales a la rata y el cerebro del ratón: aplicación a la isquemia cerebral

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...

Measuring Post-Stroke Cerebral Edema, Infarct Zone and Blood-Brain Barrier Breakdown in a Single Set of Rodent Brain Samples

One of the most common causes of morbidity and mortality worldwide is ischemic stroke. Historically, an animal model used to stimulate ischemic stroke involves middle cerebral artery occlusion (MCAO). Infarct zone, brain edema and blood-brain barrier (BBB) breakdown are measured as parameters that reflect the extent of brain injury after MCAO. A significant limitation to this method is that these measurements are normally obtained in different rat brain samples, leading to ethical and financial burdens due to the large number of rats that need to be euthanized for an appropriate sample size. Here we present a method to accurately assess brain injury following MCAO by measuring infarct zone, brain edema and BBB permeability in the same set of rat brains. This novel technique provides a more efficient way to evaluate the pathophysiology of stroke.

This protocol describes a novel technique of measuring the three most important parameters of ischemic brain injury on the same set of rodent brain samples. Using only one brain sample is highly advantageous in terms of ethical and economic costs.

Medición del edema cerebral post-accidente cerebrovascular, zona infarta y descomposición de la barrera hematoencefálica en un solo conjunto de muestras cerebrales de roedores

One of the most common causes of morbidity and mortality worldwide is ischemic stroke. Historically, an animal model used to stimulate ischemic stroke ...

Extraction and Dissection of the Domesticated Pig Brain

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular systems, gastrointestinal systems, and nutrition, and the pig is increasingly being used as a large animal model in neuroscience. Furthermore, the pig is an accepted model to study neurodevelopment as it displays brain growth and development patterns similar to what occurs in humans. As a less common animal model in neuroscience, surgical and dissection procedures on pigs may not be as familiar or well-practiced among researchers. Therefore, a standardized visual protocol detailing consistent extraction and dissection methods may prove valuable for researchers working with the pig. The following video showcases a technique to remove the pig brain while keeping the cortex and brainstem intact and reviews methods to dissect several commonly investigated brain regions including the brainstem, cerebellum, midbrain, hippocampus, striatum, thalamus, and medial prefrontal cortex. The purpose of this video is to provide researchers with the tools and knowledge necessary to consistently perform a brain extraction and dissection on the four-week-old pig.

This protocol details the technique for removal of the pig brain in its entirety and dissection of several brain regions commonly studied in neuroscience.

Extracción y disección del cerebro de cerdo domesticado

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular ...