Questo lavoro è stato finanziato dal NCTR / FDA.

Sebbene non mostrato nel video, i ratti sono stati dato un sovradosaggio di 300 mg / Kg di pentobarbital, con conseguente anestesia in meno di 3 min, e poi sacrificati per decapitazione. I loro cervelli sono stati poi rapidamente, ma accuratamente rimosso dal cranio e refrigerate gelida soluzione salina normale per 5 min. È importante lasciare raffreddare il cervello per tale intervallo di tempo prima di sezionare il MAV modo che il MAV può essere separata dalla superficie della corteccia (superiore dello strato I). Il cervello è stato quindi posto in fondo di un piatto di vetro Petri riposo su ghiaccio che era completa (1 cm di profondità) del freddo salina normale o di sodio 0,1 M tampone fosfato salino pH = 7,4. Tutta la dissezione è fatto con il cervello per la maggior parte immersa in soluzione salina. 1. Rimozione della ghiandola pineale <ol><li> Posizionare il lato dorsale fino al cervello (corrispondente alla parte inferiore della piastra Petri). La ghiandola pineale si trova in corrispondenza della zona più caudale ventrale tra i due emisferi appena rostrale tegli cervelletto (incavo pineale), ed è appena sotto o sulla superficie delle meningi sul collicolo. Rimuovere la ghiandola pineale prima con due piccole pinze estremità ricurva. E &#39;di colore rosa come la corteccia, ma è spesso circondata nei resti di sangue e vasi residua dalla rimozione del cervello. </li></ol> 2. La rimozione del MAV <ol><li> Capovolgere il cervello su &quot;testa in giù&quot; e separare l&#39;arteria vertebrale, più piccole arterie e le meningi che coprono il ponte dalle meningi e vascolarizzazione del proencefalo. La rimozione del MAV proencefalo viene avviato. È importante iniziare ventralmente nel processo di dissezione. Grandi arterie principali del circolo di Willis, arterie cerebrale media (MCA) e arterie anteriori sono più forti e servono come &quot;impalcatura&quot; con cui le piccole arterie ed arteriole superficiali del piale membrana può quindi essere rimosso dalla corteccia con il resto delle meningi. Vedi recensione di Scremin 7 per mminerale di rappresentazioni visive e dettagli della superficie vascolare cerebrale. </li><li> A partire da entrambi gli emisferi, utilizzare le piccole pinze punta piegata a recidere l&#39;arteria comunicante posteriore appena posteriormente alla congiuntura carotide interna. Così, separando gli alberi più anteriore e posteriore arteriosi del proencefalo. Ripetere la stessa procedura per l&#39;emisfero controlaterale. </li><li> Afferrando la MCA e l&#39;arteria anteriore con le pinze, tirare delicatamente in una direzione antero-dorsale in modo che il MAV copre la corteccia ventrale anteriore (piriforme, tubercolo olfattivo) viene sollevato sopra e intorno il tratto olfattivo. Questo elimina la maggior parte del MAV che copre la parte anteriore della corteccia (cingolata e orbitale). </li><li> Girare il cervello a 45 a 90 ° al piatto Petri. Le regioni più laterali, anteriori del MAV che circonda le zone laterali corticali (granulare insulare, secondaria somatosensoriale e corteccia uditiva) può essere liberato dalla corteccia afferrando la MCA e associati arterIES e tirando delicatamente dorsalmente lungo la corteccia. Se necessario, le estremità della pinza può essere utilizzato per sollevare e liberare le arterie dalla corteccia durante la dissezione. </li><li> Ora rimuovere le regioni più posteriori laterali del MAV. (Nota, è meglio passare da un emisfero all&#39;altro durante questo processo di raccolta per garantire che il MAV rimane freddo e idratata. Inoltre, se la resistenza a liberare il MAV dalla corteccia viene rilevato da un interruttore emisfero emisfero controlaterale temporaneamente e poi tornare per l&#39;emisfero originale in seguito.) </li><li> Per rimuovere le regioni più dorsali del MAV circostanti somatosensoriale primaria e corteccia motoria girare il lato dorsale fino al cervello (corrispondente alla parte inferiore della piastra Petri). Per liberare finalmente la MAV dal cervello, utilizzare le estremità della pinza lungo il seno sagittale. Questa porzione del MAV raccolto può essere sia temporaneamente conservato in soluzione salina ghiacciata fino test e analisi o congelati per la successiva elaborazione. Spessoil MAV che copre le regioni più posteriori / caudale della corteccia (corteccia entorinale uditivo, visivo e più caudale) rimane attaccata alla corteccia. La sua rimozione è illustrato più avanti nel video quando il MAV tra la corteccia retrosplenial e sovrastante le collicolo sono sezionati. </li></ol> 3. La rimozione del plesso coroide <ol><li> Posizionare il lato dorsale del cervello verso l&#39;alto e in posizione con le pinze più grandi Spingere la pinza più piccoli verso il basso attraverso la linea mediana tra gli emisferi e quindi utilizzare le estremità per forare attraverso il corpo calloso corteccia e corpo (≈ -3,3 mm dal bregma) nella parte superiore del la linea mediana dell&#39;ippocampo. </li><li> Utilizzare le pinze per tirare la corteccia con calloso dal dell&#39;ippocampo dorsale e setto, esponendo la maggior parte del ventricolo laterale. Il plesso coroide può essere localizzato e identificato con la linea ondulata rossa che delimita l&#39;arteria principale che corre la sua lunghezza. Utilizzare le due estremità delle pinze per staccare le pareti laterali del terzo ventricle e ingrandirla nella parte più caudale (≈ -4,3 mm dal bregma 8). </li><li> Utilizzando le pinze piccole, tirare la fine della coroide libero plesso. Poi vai alla regione molto anteriore tra il setto e caudato / putamen (misura più rostrale, ≈ 1,6 millimetri dal bregma) e con le pinze ingrandire questa sezione del ventricolo e tirare il plesso coroide libero. Eseguire la stessa procedura nell&#39;emisfero controlaterale per ottenere il secondo rimanente plesso coroide. Anche in questo tessuto può essere sia temporaneamente conservato in soluzione salina ghiacciata fino al test e analisi o congelati per la successiva elaborazione. </li></ol> 4. La rimozione del MAV che rimane nel ventricolo 3 ° sovrastante il talamo e il collicolo così come quello sulle Regioni più caudale della corteccia tra cui retrosplenial, corteccia auditiva e visiva <ol><li> Rimuovere l&#39;ippocampo intero entrambi gli emisferi che espongono il MAV sul talamo e collicolo. La rimozione diquesta porzione del MAV è molto meno difficile la rimozione del MAV sulla corteccia. </li><li> Tirare questa porzione di libera MAV afferrando la vascolarizzazione maggiore sovrastante la porzione anteriore del talamo e tirando delicatamente caudalmente. Questo sistema vascolare è collegato alla rete collicular supra e fornisce il sangue al ippocampo dorsale e rete talamo dorsale. Tirare via caudalmente e gradualmente libera la rete supracollicular fino a raggiungere le ultime porzioni del sistema vascolare caudale circolo arterioso. A questo punto, più cura deve essere presa per rimuovere qualsiasi residuo MAV posteriore sulla superficie ventrale del retrosplenial granulare, uditiva primaria e cortecce visive. Come con l&#39;altra sezione MAV coprire le porzioni più anteriori della corteccia, questo tessuto può essere sia temporaneamente conservato in soluzione salina ghiacciata fino test e analisi o congelati per la successiva elaborazione. Qualsiasi residuo MAV posteriore ventrale raccolti con questa seconda sezione MAV deve essere rimosso und aggiunto alla prima sezione MAV sezionato copre la corteccia se devono essere analizzate separatamente. </li></ol> 5. Risultati rappresentativi Quando la dissezione è eseguita correttamente, i tessuti risultano MAV deve essere in due entità intatti del peso di circa 35-45 mg in totale. Il inizialmente sezionato MAV che circonda la maggior parte della corteccia dovrebbe pesare circa 25 mg e il MAV che copre il talamo, collicolo e corteccia occipitale dovrebbe pesare circa 15 mg. Dovrebbe essere leggermente rosato dal sangue residuo nel sistema vascolare. Il bilaterale plesso coroide raccolta devono essere in due campioni di tessuto intatto con ciascuna del peso di 1 a 2 mg. Anche se l&#39;acqua in eccesso può essere rimosso dal MAV prima della conservazione o trasformazione utilizzando carta velina come quello usato per la pulizia della lente, per evitare la perdita di tessuto non è una buona idea per rimuovere l&#39;acqua in eccesso dal plesso coroide sezionato. Figura 1 è stato generato per confronto profil espressione<html> es in tre regioni (striato, corteccia parietale e MAV) in condizioni di controllo che utilizzano Agilent-014879 Whole Genome Ratto 4x44K 60mer array di oligonucleotidi (G4131F, Agilent Technologies, Palo Alto, CA, NCBI GEO adesione # GPL7294; GSE23093 GSE29733 e che sono presenti in il repository NCBI GEO). I due grafici in figura pittoricamente mostrano l&#39;espressione in 1) striato rispetto alla corteccia parietale e 2) il MAV rispetto alla corteccia parietale. È evidente che il corpo striato e corteccia parietale sono molto più strettamente correlati tra loro rispetto al MAV. I dati di confronto del plesso coroide con il MAV sarà presentato in una futura pubblicazione. Tuttavia, è probabile che i profili di espressione del MAV e plesso coroide sono più strettamente correlati tra loro che sono al corpo striato e corteccia parietale. Figura 2 mostra la risposta differenziale espressione genica di ipertermia (EIH) rispetto AMPH in MAV rispetto per il controllo e l&#39;altro. contenuto &quot;&gt; L&#39;espressione genica di oltre 11.000 geni con simboli ufficiali gene NCBI in MAV di animali di controllo è stato confrontato a quelli registrati nello striato e corteccia parietale. Oltre 2000 di questi geni avevano un&#39;espressione di 2,5 volte o più differenti nel MAV rispetto ai due neuronale tessuti ricchi, e 550 geni hanno una differenza di 10 volte maggiore espressione. poco più del 40% (253) di questi erano geni con espressione diminuita di 10 volte o più in MAV e riguardavano funzione neuronale. C&#39;erano 343 geni con più di una espressione di 10 volte o maggiore rispetto a MAV corteccia parietale e striato. Questa lista di geni è stato utilizzato come punto di partenza con cui determinare i geni con un arricchimento molto elevata nel MAV. Tabella 1 elenca i geni con più espressione di 15 volte nei MAV rispetto corteccia parietale e striato e categorizza con rispetto alla funzione. Molti di questi geni sono stati correlati al sistema vascolare e / o il sistema immunitario. Queste tIPI di geni dovrebbe essere arricchito di circa 5 - 10 - volte a causa del sistema vascolare maggiore stesso e sangue presente al suo interno. Tuttavia, anche per geni con funzioni generali vascolari conosciute, con un incremento superiore a 15 volte indica arricchimento in MAV. C&#39;erano anche numero di geni con variazioni di piegatura molto grandi che erano: 1) proteine ​​della matrice extracellulare (non specificamente correlati ai vasi), 2) trasportatori soluti e 3) metabolismo lipidico e acido retinoico. Inoltre, la crescita pochi e differenziazione genetica o fattori di trascrizione sono stati trovati. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig1.jpg" /> Figura 1. Confronto tra l&#39;espressione genica in MAV con la corteccia parietale e nello striato. Trama Vulcano confrontando i livelli di espressione genica della corteccia parietale e nello striato (grafico in alto) e la corteccia parietale e MAV (grafico in basso). I simboli rossi indicano i geni che sono significativamente diversi betweregioni en con p &lt;0.05 e hanno una espressione differenziale di 1,5 volte o superiore tra le regioni. I simboli neri rappresentano i geni che non differiscono in modo significativo tra le regioni (p&gt; 0,05) e sono meno di 1,5 volte diversi per espressione. I simboli rosa indicano geni con meno di 1,5 volte differenza di espressione, ma statisticamente significativa con p &lt;0.05. I simboli gialli identificare i geni che hanno un espressione di 1,5 volte o superiore, ma questo cambiamento non è statisticamente significativa a p &lt;0,05. Abbreviazioni AMPH anfetamine EIH eco-ipertermia indotta Meningi MAV e vascolarizzazione cerebrale associata Norm normotermica controlla <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig2.jpg" /> Figura 2. Effetti di ipertermia e anfetamine sull&#39;espressione genica in MAV. Trame Volcano confrontolivelli di espressione genica nel MAV dopo salina, EIH o AMPH al punto 3 ore di tempo. I simboli rossi indicano i geni che si ritiene essere molto diversa, mentre i punti neri / cerchi rappresentano i geni che non differiscono in modo significativo tra le regioni. Un&#39;ulteriore analisi statistica è stato utilizzato per verificare che un&#39;espressione differenze tra il controllo e trattamenti erano infatti statisticamente significativa. <table border="1"><tbody><tr><td fo:width="1in"> MAV Expression Expression Cervello </td><td fo:width="4.5in"> NCBI Gene Simboli </td><td fo:width="1.5in"> Specificità tissutale o funzione riportato (s) </td></tr><tr><td> &gt; 50-fold </td><td> Anxa2 una, Col8a1, Des, Esm1, Glycam1, un Kl, Lect1, LEPR, Lum, MYH11, OGN, Tagln, Thbs2, TNNT2 </td><td> Vascolarizzazione &amp; Cuore </td></tr><tr><td> &gt; 50-fold </td><td> CCL19, un CD74, DEFB1, Lrrc21, Mgl1, MRC1, Msln, Pla2g5, Prg4, RT1-Bb, RT1-Da </td><td> Sistema immunitario </td></tr><tr><td> &gt; 50-fold </td><td> ADH1, Aebp1, Aldh1a2, GSTM2 </td><td> Acido retinoico e trasformazione dei lipidi </td></tr><tr><td> &gt; 50-fold </td><td> CDH1, COL3A1, COL1A2, Colec12, Cpxm2, CPZ, DCN, Emp3, GPC3, Nupr1, OMD, Pcolce Slamf9, Tmem27, Tspan8 </td><td> Matrice extracellulare e giunzioni cellula-cellula </td></tr><tr><td> &gt; 50-fold </td><td> AQP1, Asgr1, Kcnj13, Slc5a5, Slc6a13, Slc6a20, Slc22a6, Sned1, Ttr </td><td> Ion &amp; Omeostasi Solute </td></tr><tr><td> &gt; 50-fold </td><td> Alx3, CDKN1C, FOXC2, Igfbp2, Ifitm1, Ifitm2, Nkx6-1, OSR1, Prrx2, SFRP1, Tbx15. Upk1b, Wisp2, Wnt6 </td><td> Sviluppo e regolazione della trascrizione </td></tr><tr><td> &gt; 50-fold </td><td> Gpha2, Mfap5, Mpzl2 Plac8, Scgb1c1, Sostdc1, Steap1 </td><td> Sconosciuto e Varie </td></tr><tr><td> 30-50-fold </td&gt; <td> ANXA1 una, Angpt2, un C6, GJB2, Ptgis, Thbd, TIMP1 </td><td> Vascolarizzazione &amp; Cuore </td></tr><tr><td> 30-50-fold </td><td> Casp12, CCL2, CCR1, Cd14, CXCL10, Ifitm3, Klra5, Lgals1, Lgals3, Ms4a4a, Ms4a7, Plscr1, SPP1, Xcl1 </td><td> Sistema immunitario </td></tr><tr><td> 30-50-fold </td><td> COL6A3, Cpxm1, Efemp1, Fmod, MGP, Nid2 </td><td> Matrice extracellulare e giunzioni cellula-cellula </td></tr><tr><td> 30-50-fold </td><td> Cp, Cubn, GCGR, S100a6, Scn7a, Sct, Slc4a5, Slc16a11, Slco1a5 </td><td> Ion &amp; omeostasi Solute </td></tr><tr><td> 30-50-fold </td><td> CFD, Ch25h, Crabp2, Rarres2 </td><td> Acido retinoico e trasformazione dei lipidi </td></tr><tr><td> 30-50-fold </td><td> BMP6, Casp12, Dab2, Folr1, Igf2, Msx1, Tbx18, Twist1, Wnt5b </td><td> Sviluppo e regolazione della trascrizione </td></tr><tr><td> 30-50-fold </td><td> Cela3b, Cln6, C1qtnf7, Copz2, Dhrs7c, Gng11, Prss23, Srpx, Vim </td><td> Sconosciuto e Varie </td></tr><tr><td> 15-30-fold </td><td> Adm, Angpt1, Angptl2, BGN, un Cklf, Cnn1, Cox8h, Ctsk, F13A1, GJA5, Klf4, Lox, Lyz, Myl9, procr, PROS1, RT1-Ba, Serpinb10, Serping1, Serpinf1, TGM2, Tnmd, Trim63, Txnip una, Vamp5, Vtn </td><td> Vascolarizzazione &amp; Cuore </td></tr><tr><td> 15-30-fold </td><td> Ada a, Bst2, Ccl6, CD40, CD68, Ctsc, Dap, Faim3, Fkbp9, Fxyd5, Fmo1, Glipr1, Ier3, Ifi47, Igsf6, Msc, Nfatc4, RT1-Db1, Serpinb1a, TiR4, Tubb6 </td><td> Sistema immunitario </td></tr><tr><td> 15-30-fold </td><td> Adamtsl4, COL1A1, CRB3, Dpt, Egfl3, FBN1, Fbln1, Fbln5, Fn1, Itgb4, LAMA2, Lgals3bp, Loxl1, Mfap4, MMP14, Mmp23, Ppic, Serpinh1, TIMP3 </td><td> Matrice extracellulare e giunzioni cellula-cellula </td></tr><tr><td> 15-30-fold </td><td> Cybrd1, Selenbp1, SLC2A4, Slc9a2, Slc13a3, Slc16a4, Slc22a8, Slc22a18 </td><td> Ion &amp; omeostasi Solute </td></tr><tr><td> 15-30-fold </td><td> AGPAT2, Bdh2, Cyp26b1, Lpar3, Ltb4dh, Olr1, PON3, Rbp1, RBP4 </td><td> Acido retinoico e trasformazione dei lipidi </td></tr><tr><td> 15-30-fold </td><td> Atf3, Dkk4, Eya2, Ifitm7, Ltbp1, Mustn1, Nr2f2, Ptrf, Sphk1, TGFBI, Tcea3 Tcfap2b, Wnt2b, Wnt5a, Zic1 </td><td> Sviluppo e regolazione della trascrizione </td></tr><tr><td> 15-30-fold </td><td> Adamts12, Adamtsl3, C1r, Crispld2, Crygn, CYP1B1, Dse, Enpep, Enpp2, Epn3, FLNA, FMO3, Gnmt, Gprc5c, HSPB1, Klc3, Krt18, Krt19, Mdk, Mesp1, Ms4a6a, Ms4a6b, Ms4a11, Net1, Pdlim2, Phactr2, PLP2, Ppp1r3b, Pqlc3, Rin3, Spag11, Sult1a1, Tmem106a, Wfikkn2 </td><td> Sconosciuto e Varie </td></tr></tbody></table> * I geni inclusi nella tabella deve essere al tempo stesso più di 15 volte l&#39;espressione di sopra nello striato e Parietal corteccia e 5 volte al di sopra dei livelli di fondo. Il più basso dei due rapporti (MAV / striato o MAV / corteccia parietale) per ogni gene è stato utilizzato per il raggruppamento. un geni si trovano in cellule endoteliali, ma anche probabilmente un ruolo importante nel mediare risposte immunitarie. Tabella 1. Geni con un 15-fold * o espressione aumentata in più rispetto al MAV striato e corteccia parietale.

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Care. 10, 295-305 (2009).</li><li>Ohta, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+ischemic+stroke+associated+with+methamphetamine+use.">Delayed ischemic stroke associated with methamphetamine use.</a> J. Emerg. Med. 28, 165-167 (2005).</li><li>Brenner, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropsychological+and+neuroimaging+findings+in+traumatic+brain+injury+and+post-traumatic+stress+disorder.">Neuropsychological and neuroimaging findings in traumatic brain injury and post-traumatic stress disorder.</a> Dialogues Clin. Neurosci. 13, 311-323 (2011).</li><li>Case, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflicted+traumatic+brain+injury+in+infants+and+young+children.">Inflicted traumatic brain injury in infants and young children.</a> Brain Pathol. 18, 571-582 (2008).</li><li>Maas, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+value+of+computerized+tomography+scan+characteristics+in+traumatic+brain+injury:+results+from+the+IMPACT+study.">Prognostic value of computerized tomography scan characteristics in traumatic brain injury: results from the IMPACT study.</a> J. Neurotrauma. 24, 303-314 (2007).</li></ol>

Non abbiamo nulla da rivelare. Il lavoro qui presentato non necessariamente rappresentano le opinioni del Food and Drug Administration.

Aspetti tecnici del MAV e dissezione del plesso coroide È critico durante la dissezione del MAV avere il cervello &quot;sommersa&quot; la maggior parte del tempo in soluzione salina normale o sodio PBS. Permettendo al MAV e la corteccia a disidratarsi durante la dissezione comporterà la MAV aderendo strettamente al I. strato corticale Ciò consentirà di aumentare la quantità di tessuto corticale raccolto con il MAV e / o provocare l&#39;impossibilità di rimuovere queste sezioni MAV aderenti dalla corteccia. Inoltre, la pazienza è necessaria durante la dissezione. Ancora una volta, se si incontra una certa resistenza nella rimozione del MAV dalla corteccia di un emisfero durante la dissezione, passare alla emisfero e tornare poi verso il lato dove è stato incontrato resistenza. Questo metodo ci vuole un pò di pratica per perfezionare e richiede circa 5 a 15 &quot;pratica&quot; dissezioni prima di un raccolto costantemente uniforme di tessuto MAV è raggiunto. Il metodo di avviamento della dissezione e removal del MAV al circolo arterioso alla base del cervello facilita la rimozione delle meningi utilizzando il sistema vascolare più grande come supporto &quot;ponteggi&quot;. Molto del sangue originariamente nella vascolatura MAV dopo sacrificio deve essere espulso durante la dissezione, e meno del 5% del RNA raccolto da MAV dovrebbe essere di origine sangue. È possibile rimuovere quasi tutto il sangue dell&#39;animale mediante perfusione con 50 a 70 ml di soluzione salina, utilizzando tecniche istologiche, prima della decapitazione e la rimozione del cervello. Tuttavia, è quindi molto più difficile visualizzare i tessuti MAV durante la dissezione. Le tre fonti più probabili di &quot;contaminazione&quot; dei tessuti MAV sono la ghiandola pineale, strato corticale ho tessuto e tessuto residuo bulbo olfattivo, ma è anche possibile ottenere tessuto ghiandola pituitaria nella preparazione. Contaminazione pineale nel MAV viene rilevato dal MAV contenente un round 1-2 sfera mm di diametro che è di colore rosso scuro. La funzione primariadella ghiandola pineale è normalmente considerata completamente diverso dal MAV. La sua funzione primaria è di produrre melatonina, che regola gli aspetti del ritmo circadiano 9, e in lipoxygenation 10 di precursori lipidici. Sebbene la Lox gene che regola l&#39;attività della lipossigenasi, è stato pensato per essere presente negli adulti principalmente nella ghiandola pineale 10, i nostri risultati indicano che è anche costantemente presente a livelli significativi MAV. Residui corticali o olfattiva contaminazione risultati bulbo nella rosa web-come il tessuto MAV avendo alcuni 1-2 tessuti più densi mm che sono più pallido molto nel colore racchiuso in esso. Questo può essere notato da &quot;galleggiare&quot; il MAV sulla superficie del tampone, e quindi rimuovendo i tessuti più pesanti corticali o bulbo utilizzando le due dissettore. Se la contaminazione del MAV da strato corticale I tessuti, tessuti ipotalamica o la ghiandola pineale è presente, diversi geni avrà un significativoespressione cativamente maggiore di quello che è normalmente presente in una dissezione &quot;pulita&quot;. La contaminazione del MAV con ghiandola pineale si tradurrà in maggiore espressione di arylalkylamine N-acetiltransferasi (Aanat), che è necessario per la sintesi di melatonina. Purtroppo, se la contaminazione pineale si verifica durante la dissezione MAV, i livelli di Lox in MAV non potrà essere determinato con precisione. Contaminazione del MAV con tessuto corticale potrebbe causare una maggiore espressione di neurone-specifici geni come hippocalcin (HPCA), parvalbumin (Pvalb) e / o recettore neuronale pentraxina (Nptxr). Contaminazione di MAV con il tessuto ipotalamico comporterà la più alta espressione di ormone della crescita 1 (GH1), proopiomelanocortin (POMC). Nel caso in cui qualche contaminazione esiste nei tessuti raccolti, la maggior parte di tali geni possono essere identificati ed impiegati in analisi di espressione genica. Ciò è particolarmente importante per i geni presenti nel blo circolanteod ancora che possono essere presenti in MAV o plesso coroide. Interpretting dati di espressione genica da raccolte MAV e della coroide plesso La superficie cerebrale (superficiale) vascolare con meningi associati (MAV) e del plesso coroide sono necessari per il flusso sanguigno cerebrale e liquido cerebrospinale (CSF) omeostasi 4,11, 12, 13, 14, 15, 16, 17. Il raccolto tessuto è adatto per l&#39;analisi biochimiche e fisiologiche, e il MAV ha dimostrato di essere sensibili a danneggiare prodotta da anfetamina e 1,2 ipertermia attraverso analisi di espressione genica. Questi risultati sono commisurati con ciò che è anche conosciuto circa l&#39;ipertermia grave e l&#39;esposizione alle anfetamine per la vascolarizzazione del cervello in generale 18-19-20. Dati clinici umani sostiene la convinzione che il sistema vascolare subdurale è sensibile ai danni da anfetamine e metanfetamine 21,22. Inoltre, i maggiori e minori vasculatures cerebrali comzione quelle nello strato piale delle meningi che sono raccolti nel MAV sono di interesse potenzialmente elevato nell&#39;ambito delle indagini concussive tipi di trauma cranico 23,24 25. L&#39;attuale profilo di espressione genica ha prodotto dal MAV indica che il piale e, eventualmente, le membrane meningee aracnoide può giocare un ruolo più importante di quanto previsto nella regolazione della composizione CSF. In futuro, attraverso l&#39;uso di tecniche di dissezione microscopio, può essere possibile separare ulteriormente i tessuti comprendenti il ​​MAV modo che le membrane piali e aracnoide può essere separato dalla presente maggiore vascolarizzazione arteriosa ed eventualmente uno dall&#39;altro. Ciò consentirà una migliore interpretazione della funzione di ciascuno di questi tre componenti del MAV raccolto.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente / attrezzature </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti (opzionale) </td></tr><tr><td> Soluzione fisiologica (9 grammi salini / 1 litro H 2 O) </td><td> Interno </td><td></td><td> Dissezione del buffer </td></tr><tr><td> 0,1 M fosfato di sodio pH 7,4 </td><td> Interno </td><td></td><td> Dissezione del buffer </td></tr><tr><td> Bone Rongeurs </td><td> Roboz </td><td> RS-8300 </td><td> Skull osso rimozione </td></tr><tr><td> Pinze-piegato punta (4 &quot;di lunghezza e 0,8 mm di larghezza punta) </td><td> Roboz </td><td> RS-5135 o RS-5137 </td><td> Dissettore </td></tr><tr><td> Pinza-dritto punta (5.5 &quot;di lunghezza) </td><td> Roboz </td><td> RS-8124 o RS-8104 </td><td> Thumb Dressing pinze </td></tr></tbody></table>

a visual description of the dissection of the cerebral surface vasculature and associated meninges and the choroid plexus from rat brain

La presentazione video è stato creato per mostrare un metodo di raccolta delle due più importanti strutture altamente vascolari, non risiede nel cervello proprio, tale funzione di supporto proencefalo. Essi sono la superficie cerebrale (superficiale) vascolare con meningi associati (MAV) e la coroide plesso che sono necessari per il flusso sanguigno cerebrale e nel liquido cerebrospinale (CSF) omeostasi. Il tessuto raccolto è adatto per l&#39;analisi biochimiche e fisiologiche, e il MAV ha dimostrato di essere sensibile al danno prodotto da amfetamina e 1,2 ipertermia. Inoltre, i maggiori e minori vasculatures cerebrali raccolte in MAV sono di interesse potenzialmente elevato nell&#39;ambito delle indagini concussive tipi di trauma cranico. Il MAV sezionato in questa presentazione consiste nella piale e alcuni della membrana aracnoide (meno dura) delle meningi e il sistema vascolare maggiore e minore superficie cerebrale. Il plesso coroideo sezionato è la struttura che si trova in lateral ventricoli come descritto da Oldfield e McKinley 3,4,5,6. I metodi utilizzati per la raccolta di questi due tessuti anche facilitare la raccolta di tessuto corticale regionale privo di meningi e di superficie più grande vascolarizzazione cerebrale, ed è compatibile con la raccolta tessuti cerebrali come striato, ipotalamo, ippocampo, ecc La dissezione dei due tessuti prende 5-10 totale min. I livelli di espressione genica per la MAV sezionato e della coroide plesso, come illustrato e descritto in questa presentazione sono disponibili all&#39;indirizzo GSE23093 (MAV) e GSE29733 (plesso coroide) al repository NCBI GEO. Questi dati sono stati, e viene, utilizzato per aiutare ulteriormente comprendere il funzionamento del MAV e della coroide plesso e come neurotossici eventi come l&#39;ipertermia grave e AMPH influenzare negativamente la loro funzione.

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A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain

Questa presentazione video mostra un metodo di raccolta delle due più importanti strutture altamente vascolari che supportano la funzione proencefalo. Essi sono la superficie cerebrale (superficiale) vascolare con meningi associati (MAV) e la coroide plesso che sono necessari per il flusso sanguigno cerebrale e nel liquido cerebrospinale (CSF) omeostasi.

Una descrizione visiva della dissezione del sistema vascolare di superficie cerebrale e Meningi associate, e del plesso coroide da cervello di ratto

This video presentation was created to show a method of harvesting the two most important highly vascular structures, not residing within the brain ...

a-visual-description-dissection-cerebral-surface-vasculature

Research

JoVE Journal

Neuroscience

47.9K Views.  National Center for Toxicological Research. Questa presentazione video mostra un metodo di raccolta delle due più importanti strutture altamente vascolari che supportano la funzione proencefalo. Essi sono la superficie cerebrale (superficiale) vascolare con meningi associati (MAV) e la coroide plesso che sono necessari per il flusso sanguigno cerebrale e nel liquido cerebrospinale (CSF) omeostasi.

Video: A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable clinical state; in the development of animal models of focal ischemia, however, achieving reproducibility of experimentally induced infarct volume is essential. The rat is a widely used animal model for stroke due to its relatively low animal husbandry costs and to the similarity of its cranial circulation to that of humans2,3. In humans, the middle cerebral artery (MCA) is most commonly affected in stroke syndromes and multiple methods of MCA occlusion (MCAO) have been described to mimic this clinical syndrome in animal models. Because recanalization commonly occurs following an acute stroke in the human, reperfusion after a period of occlusion has been included in many of these models. In this video, we demonstrate the transient endovascular suture MCAO model in the spontaneously hypertensive rat (SHR). A filament with a silicon tip coating is placed intraluminally at the MCA origin for 60 minutes, followed by reperfusion. Note that the optimal occlusion period may vary in other rat strains, such as Wistar or Sprague-Dawley. Several behavioral indicators of stroke in the rat are shown. Focal ischemia is confirmed using T2-weighted magnetic resonance images and by staining brain sections with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) 24 hours after MCAO.

Surgical induction of ischemic brain damage in the rat is a widely used model for stroke research. Here we demonstrate the induction of focal cerebral ischemia by occlusion of the middle cerebral artery. Visualization of the resulting infarct by histological staining and magnetic resonance imaging is also shown.

Modello di ischemia cerebrale focale da occlusione endovascolare Sutura della arteria cerebrale media nel ratto

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

Ricerca

Neuroscienze

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to monitor the disease course in the follow-up period. Changes in the VEP parameters closely correlate with pathological damage in the optic nerve. This protocol provides a detailed description about the rodent model of optic nerve microinjection, in which a partial demyelination lesion is produced in the optic nerve. VEP recording techniques are also discussed. Using skull implanted electrodes, we are able to acquire reproducible intra-session and between-session VEP traces. VEPs can be recorded on individual animals over a period of time to assess the functional changes in the optic nerve longitudinally. The optic nerve demyelination model, in conjunction with the VEP recording protocol, provides a tool to investigate the disease processes associated with demyelination and remyelination, and can potentially be employed to evaluate the effects of new remyelinating drugs or neuroprotective therapies.

Focal demyelination is induced in the optic nerve using lysolecithin microinjection. Visual evoked potentials are recorded via skull electrodes implanted over the visual cortex to examine the signal conduction along the visual pathway in vivo. This protocol details the surgical procedures underlying electrode implantation and optic nerve microinjection.

Registrazione potenziale evocato visivo in un modello murino di sperimentale del nervo ottico demielinizzazione

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

The choroid plexus is located in the ventricular wall of the brain, the main function of which is believed to be production of cerebrospinal fluid. Choroid plexus epithelial cells (CPECs) covering the surface of choroid plexus tissue harbor multiple unique cilia, but most of the functions of these cilia remain to be investigated. To uncover the function of CPEC cilia with particular reference to their motility, an ex vivo observation system was developed to monitor ciliary motility during embryonic, perinatal and postnatal periods. The choroid plexus was dissected out of the brain ventricle and observed under a video-enhanced contrast microscope equipped with differential interference contrast optics. Under this condition, a simple and quantitative method was developed to analyze the motile profiles of CPEC cilia for several hours ex vivo. Next, the morphological changes of cilia during development were observed by scanning electron microscopy to elucidate the relationship between the morphological maturity of cilia and motility. Interestingly, this method could delineate changes in the number and length of cilia, which peaked at postnatal day (P) 2, while the beating frequency reached a maximum at P10, followed by abrupt cessation at P14. These techniques will enable elucidation of the functions of cilia in various tissues. While related techniques have been published in a previous report1, the current study focuses on detailed techniques to observe the motility and morphology of CPEC cilia ex vivo.

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

In this study, a detailed light microscopic technique was optimized for real-time observation and analysis of the motion of CPEC cilia ex vivo together with an electron microscopic method for ultrastructural analysis.

L&#39;osservazione del movimento ciliare delle cellule epiteliali del plesso coroide<em&gt; Ex Vivo</em

The choroid plexus is located in the ventricular wall of the brain, the main function of which is believed to be production of cerebrospinal fluid. ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful analysis of synaptic transmission modulation when performing field potential or intracellular recordings. This manuscript describes methodological aspects that might be helpful in improving experimental conditions for the maintenance of acute brain slices and for recording field excitatory postsynaptic potentials in a commercially available submersion chamber with an outflow-carbogenation unit. The outflow-carbogenation helps to stabilize the oxygen level in experiments that rely on the recycling of a small buffer reservoir to enhance the cost-efficiency of drug experiments. In addition, the manuscript presents representative experiments that examine the effects of different carbogenation modes and stimulation paradigms on the activity-dependent synaptic plasticity of synaptic transmission.

This protocol describes the stabilization of the oxygen level in a small volume of recycled buffer and methodological aspects of recording activity-dependent synaptic plasticity in submerged acute hippocampal slices.

Registrazione di plasticità sinaptica in fettine ippocampali Acute mantenuti in un piccolo volume riciclaggio - aspersione- e sistema di immersione-tipo camera

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Live Imaging of Primary Cerebral Cortex Cells Using a 2D Culture System

During cerebral cortex development, progenitor cells undergo several rounds of symmetric and asymmetric cell divisions to generate new progenitors or postmitotic neurons. Later, some progenitors switch to a gliogenic fate, adding to the astrocyte and oligodendrocyte populations. Using time-lapse video-microscopy of primary cerebral cortex cell cultures, it is possible to study the cellular and molecular mechanisms controlling the mode of cell division and cell cycle parameters of progenitor cells. Similarly, the fate of postmitotic cells can be examined using cell-specific fluorescent reporter proteins or post-imaging immunocytochemistry. More importantly, all these features can be analyzed at the single-cell level, allowing the identification of progenitors committed to the generation of specific cell types. Manipulation of gene expression can also be performed using viral-mediated transfection, allowing the study of cell-autonomous and non-cell-autonomous phenomena. Finally, the use of fusion fluorescent proteins allows the study of symmetric and asymmetric distribution of selected proteins during division and the correlation with daughter cells fate. Here, we describe the time-lapse video-microscopy method to image primary cerebral cortex murine cells for up to several days and analyze the mode of cell division, cell cycle length and fate of newly generated cells. We also describe a simple method to transfect progenitor cells, which can be applied to manipulate genes of interest or simply label cells with reporter proteins.

Live imaging is a powerful tool to study cellular behaviors in real time. Here, we describe a protocol for time-lapse video-microscopy of primary cerebral cortex cells that allows a detailed examination of the phases enacted during the lineage progression from primary neural stem cells to differentiated neurons and glia.

Immagini di corteccia cerebrale primario celle utilizzando un sistema 2D cultura dal vivo

During cerebral cortex development, progenitor cells undergo several rounds of symmetric and asymmetric cell divisions to generate new progenitors or ...

A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor determining patient outcome and is therefore frequently taken as a study endpoint. However, in small animal studies on SAH, quantification of cerebral vasospasm is a major challenge. Here, an ex vivo method is presented that allows quantification of volumes of entire vessel segments, which can be used as an objective measure to quantify cerebral vasospasm. In a first step, endovascular casting of the cerebral vasculature is performed using a radiopaque casting agent. Then, cross-sectional imaging data are acquired by micro computed tomography. The final step involves 3-dimensional reconstruction of the virtual vascular tree, followed by an algorithm to calculate center lines and volumes of the selected vessel segments. The method resulted in a highly accurate virtual reconstruction of the cerebrovascular tree shown by a diameter-based comparison of anatomical samples with their virtual reconstructions. Compared with vessel diameters alone, the vessel volumes highlight the differences between vasospastic and non-vasospastic vessels shown in a series of SAH and sham-operated mice.

The goal of this article is to present a method that allows a 3-dimensional reconstruction of the cerebrovascular tree in mice after micro computed tomography and determination of volumes of entire vessel segments that can be used to quantify cerebral vasospasm in murine models of subarachnoid hemorrhage.

Un metodo volumetrico per la quantificazione di Vasospasm cerebrale in un modello murino di emorragia subaracnoidea

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor ...

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral vascular effects. Impact (i.e., non-blast) traumatic brain injury (TBI) is known to decrease pressure autoregulation in the cerebral vasculature in both humans and experimental animals. The hypothesis that blast-induced traumatic brain injury (bTBI), like impact TBI, results in impaired cerebral vascular reactivity was tested by measuring myogenic dilatory responses to reduced intravascular pressure in rodent middle cerebral arterial (MCA) segments from rats subjected to mild bTBI using an Advanced Blast Simulator (ABS) shock tube. Adult, male Sprague-Dawley rats were anesthetized, intubated, ventilated and prepared for Sham bTBI (identical manipulation and anesthesia except for blast injury) or mild bTBI. Rats were randomly assigned to receive Sham bTBI or mild bTBI followed by sacrifice 30 or 60 min post-injury. Immediately after bTBI, righting reflex (RR) suppression times were assessed, euthanasia at the time points post-injury was completed, the brain was harvested and the individual MCA segments were collected, mounted and pressurized. As the intraluminal pressure perfused through the arterial segments was reduced in 20 mmHg increments from 100 to 20 mmHg, MCA diameters were measured and recorded. With decreasing intraluminal pressure, MCA diameters steadily increased significantly above baseline in the Sham bTBI groups while MCA dilator responses were significantly reduced (p &#60; 0.05) in both bTBI groups as evidenced by the impaired, smaller MCA diameters recorded for the bTBI groups. In addition, RR suppression in the bTBI groups was significantly (p &#60; 0.05) higher than in the Sham bTBI groups. MCA&#39;s collected from the Sham bTBI groups exhibited typical vasodilatory properties to decreases in intraluminal pressure while MCA&#39;s collected following bTBI exhibited significantly impaired myogenic vasodilatory responses to reduced pressure that persisted for at least 60 min after bTBI.

Here, we present a protocol to describe methods for ex vivo vascular reactivity determination following a primary blast traumatic brain injury (bTBI) using isolated, pressurized, rodent middle cerebral arterial (MCA) segments. bTBI induction is accomplished using a shock tube, also known as an Advanced Blast Simulator (ABS) device.

Effetti del Neurotrauma indotta da Blast il roditore pressurizzato Middle arterie cerebrali

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to intracranial delivery, intra-arterial administration of NSCs is less invasive and produces a more diffuse distribution of NSCs within the brain parenchyma. Further, intra-arterial delivery allows the first-pass effect in the brain circulation, lessening the potential for trapping of cells in peripheral organs, such as liver and spleen, a complication associated with peripheral injections. Here, we detail the methodology, in both mice and rats, for delivery of NSCs through the common carotid artery (mouse) or external carotid artery (rat) to the ipsilateral hemisphere after an ischemic stroke. Using GFP-labeled NSCs, we illustrate the widespread distribution achieved throughout the rodent ipsilateral hemisphere at 1 d, 1 week and 4 weeks after postischemic delivery, with a higher density in or near the ischemic injury site. In addition to long-term survival, we show evidence of differentiation of GFP-labeled cells at 4 weeks. The intra-arterial delivery approach described here for NSCs can also be used for administration of therapeutic compounds, and thus has broad applicability to varied CNS injury and disease models across multiple species.

A method for delivering neural stem cells, adaptable for injecting solutions or suspensions, through the common carotid artery (mouse) or external carotid artery (rat) after ischemic stroke is reported. Injected cells are distributed broadly throughout the brain parenchyma and can be detected up to 30 d after delivery.

Consegna intra-arteriosa di cellule staminali neurali al cervello di ratto e topo: applicazione all'ischemia cerebrale

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...

Measuring Post-Stroke Cerebral Edema, Infarct Zone and Blood-Brain Barrier Breakdown in a Single Set of Rodent Brain Samples

One of the most common causes of morbidity and mortality worldwide is ischemic stroke. Historically, an animal model used to stimulate ischemic stroke involves middle cerebral artery occlusion (MCAO). Infarct zone, brain edema and blood-brain barrier (BBB) breakdown are measured as parameters that reflect the extent of brain injury after MCAO. A significant limitation to this method is that these measurements are normally obtained in different rat brain samples, leading to ethical and financial burdens due to the large number of rats that need to be euthanized for an appropriate sample size. Here we present a method to accurately assess brain injury following MCAO by measuring infarct zone, brain edema and BBB permeability in the same set of rat brains. This novel technique provides a more efficient way to evaluate the pathophysiology of stroke.

This protocol describes a novel technique of measuring the three most important parameters of ischemic brain injury on the same set of rodent brain samples. Using only one brain sample is highly advantageous in terms of ethical and economic costs.

Misurazione dell'edema cerebrale post-ictus, della zona infarct e della rottura della barriera ematica-encefalica in un singolo set di campioni cerebrali dei roditori

One of the most common causes of morbidity and mortality worldwide is ischemic stroke. Historically, an animal model used to stimulate ischemic stroke ...

Extraction and Dissection of the Domesticated Pig Brain

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular systems, gastrointestinal systems, and nutrition, and the pig is increasingly being used as a large animal model in neuroscience. Furthermore, the pig is an accepted model to study neurodevelopment as it displays brain growth and development patterns similar to what occurs in humans. As a less common animal model in neuroscience, surgical and dissection procedures on pigs may not be as familiar or well-practiced among researchers. Therefore, a standardized visual protocol detailing consistent extraction and dissection methods may prove valuable for researchers working with the pig. The following video showcases a technique to remove the pig brain while keeping the cortex and brainstem intact and reviews methods to dissect several commonly investigated brain regions including the brainstem, cerebellum, midbrain, hippocampus, striatum, thalamus, and medial prefrontal cortex. The purpose of this video is to provide researchers with the tools and knowledge necessary to consistently perform a brain extraction and dissection on the four-week-old pig.

This protocol details the technique for removal of the pig brain in its entirety and dissection of several brain regions commonly studied in neuroscience.

Estrazione e dissezione del cervello di maiale addomesticato

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular ...