Bu çalışma KKTC / FDA tarafından finanse edildi.

Video gösterilmemiş olmasına rağmen, fareler ilk olarak en az 3 dakika içinde anestezi ile sonuçlanan, pentobarbital, 300 mg / kg &#39;lik bir dozda verilmiş ve ardından dekapitasyon ile öldürüldü. Beyinleri hızla o vardı ama dikkatle kafatası çıkarılır ve 5 dakika buz-soğuk serum fizyolojik içinde soğutulmuş. Bu, önceki MAV (I üst tabaka) korteks yüzeyinden ayrılabilir, böylece MAV kesme için bu kadar süre için beyin soğuması için önemlidir. Beyin sonra buz-soğuk normal salin ya da 0.1 M sodyum fosfat-tamponlu salin pH = 7.4 dolu buz üzerine oturan bir cam petri tabak (1 cm derinlikte) alt kısmına yerleştirilmiştir. Bütün disseksiyon tuzlu batırılır çoğunlukla beyin ile yapılır. 1. Epifiz Bezi çıkarılması <ol><li> Beynin dorsal yüzü yukarı (Petri kabı altına göre) yerleştirin. Epifiz bezi t sadece rostral iki hemisfer arasındaki en kaudal ventral bölgede yer almaktadıro beyincik (pineal girinti), ve hemen altında ya da üstünde colliculi menenjlerin yüzeyinde yer almaktadır. İlk iki küçük bükük ucu forseps kullanarak epifiz bezi çıkarın. Bu korteks gibi pembe renklidir ancak genellikle kan ve beyin çıkartılmasından oluşan rezidüel damarlarda kalıntılarında çevrilidir. </li></ol> 2. MAV çıkarılması <ol><li> &quot;Baş aşağı&quot; üzerine beyin Flip ve vertebral arter, beyinin zarları ve yataktan pons kapsayan küçük arterler ve meninks ayırın. Önbeyin MAV çıkarılması işlemi başlar. Bu diseksiyon sürecinde ventral başlamak önemlidir. Willis daire büyük ana arterler, orta serebral arter (MCA) ve anterior arterler güçlü ve hangi &quot;iskele&quot; olarak hizmet pial daha küçük yüzeyel arter ve arteriyoller sonra membran zarları geri kalanı ile korteks çıkarılabilir. M için Scremin 7 tarafından gözden bakıncevher görsel temsillerini ve serebral vasküler yüzey ayrıntıları. </li><li> Ya hemisfer ile başlayarak, internal karotis noktada sadece posterior posterior komünikan arter sever küçük bükük ucu forseps kullanın. Bu nedenle, ön beyin ve daha fazla ön ve arka arteriyel ağaçlar ayrılması. Kontralateral hemisferde için aynı işlemi tekrarlayın. </li><li> MCA ve forseps ile anterior arter sürükleyici, ventral anterior korteks (piriform, olfaktör tüberkül) kapsayan MAV koku yolu üzerinde ve çevresinde kaldırdı böylece anterior-dorsal yönde yavaşça çekin. Bu kadar ön korteks (singulat ve orbita) kapsayan MAV ve kaldırır. </li><li> Petri kabı 45 90 ° açıyla beyin çevirin. Lateral kortikal bölgeleri (granüler insular, ikincil somatosensoriyel ve işitsel korteks) çevreleyen MAV ve yanal, daha ön bölgelerde MCA ve ilişkili arter kavrayarak korteks kurtulmuş olabilirler ve yavaşça korteks boyunca dorsal çekerek. Gerekirse, forseps uçları diseksiyon sırasında korteks büyük damar kaldırmak ve serbest bırakmak için kullanılabilir. </li><li> Şimdi MAV ve daha posterior lateral alanların çıkarın. (Not, bu MAV soğuk ve nemli kalmasını sağlamak için bu hasat işlemi sırasında diğer bir hemisfer geçmek için en iyisidir. Ayrıca, korteks MAV kurtarmada direnci geçici kontralateral hemisferde bir yarımkürede anahtarı karşılaşılırsa ve daha sonra orijinal yarımkürede geri dönün.) </li><li> Birincil somatosensoriyel çevreleyen MAV en dorsal bölgelerin çıkarılması ve motor korteks, beynin dorsal yüzü yukarı (Petri kabı altına göre) açmak için. Nihayet beyin MAV boşaltmak için sagital sinüs boyunca forseps uçları kullanılır. Avlanan MAV bu kısmı da test ve analiz kadar buz soğuk tuzlu geçici muhafaza veya daha sonra işlenmek için dondurulabilir. Sık sıkkorteksin en arka / kaudal bölgelere (entorinal görsel ve en kaudal işitsel korteks) kapsayan MAV kortekse bağlı kalır. Onun kaldırma retrosplenial korteks ve colliculi kayaçları arasında MAV disseke edilir videoyu daha sonra gösterilir. </li></ol> 3. Koroid Pleksus çıkarılması <ol><li> Beynin dorsal yüzü yukarı yerleştirin ve büyük forseps hemisfer arasındaki orta hat boyunca küçük forseps aşağı doğru itin ve ardından üst içine korteks ve korpus kallozum (bregma itibaren ≈ -3.3 mm) sayesinde delinme uçları kullanan ile yerde tutun hipokampus midline. </li><li> Lateral ventrikül çoğu açığa dorsal hipokampus ve septum uzak kallozum ile korteks çekmek için forseps kullanın. Koroid pleksus bulunan ve uzunluğu çalışan ana arter demarcating dalgalı kırmızı çizgi ile tespit edilebilir. Üçüncü ven ve yan duvarları manivela için forseps iki ucunu kullanaraktricle ve en kaudal ucunu (bregma 8 ≈ -4.3 mm) büyütebilirsiniz. </li><li> Küçük forseps kullanarak, koroid pleksus ücretsiz bu ucunu çekin. Sonra septum ve kaudat / putamen arasındaki çok ön bölgede (en rostral ölçüde, bregma itibaren ≈ +1.6 mm) gidin ve forseps ventrikülün bu bölümü büyütmek ve koroid pleksus ücretsiz çekme ile. İkinci kalan koroid pleksus elde kontralateral hemisferde aynı prosedürü uygulayın. Yine bu doku ya da test ve analiz kadar buz soğuk tuzlu geçici muhafaza veya daha sonra işlenmek için dondurulabilir. </li></ol> 4. Retrosplenial, İşitsel ve Görsel korteks dahil kortekin daha Kaudal Bölgeleri yanı sıra bu Talamus ve Colliculi örten 3. Ventrikülde Kalan MAV çıkarılması <ol><li> Talamus ve colliculi üzerinde MAV açığa her iki yarımkürede gelen tüm hipokampus çıkarın. Ve kaldırmaMAV bu bölümü, korteks üzerinde MAV çıkarılması çok daha zordur. </li><li> Talamus ön kısmını örten ve nazikçe kaudal çekerek büyük damar tutarak MAV ücretsiz bu kısmı çekin. Bu, vasküler üstü collicular ağa bağlı olan ve dorsal hipokampus ve dorsal talamus ağ için kan tedarik edilir. Kaudal arteriyel daire damarlanmanın son bölümlerini ulaşıncaya kadar kaudal ve yavaş yavaş serbest supracollicular ağ uzağa çekin. Bu noktada, daha fazla bakım taneli retrosplenial, birincil işitsel ve görsel korteksleri yüzey üzerinde kalan arka karın MAV ortadan kaldırmak için dikkat edilmelidir. Korteks daha fazla ön kısımları kapsayan MAV bir diğer bölümü ile olduğu gibi, bu doku ya da test ve analiz zamanına kadar buz gibi soğuk tuzlu su içinde geçici olarak muhafaza edilebilir veya daha sonra işlenmek için dondurulur. Bu ikinci bölüm MAV ile hasat edilmiş, kalan arka karın MAV bir kaldırılması gerekirayrı ayrı analiz edilmelidir eğer d korteks kapsayan ilk disseke MAV bölümüne eklendi. </li></ol> 5. Temsilcisi Sonuçlar Diseksiyon doğru olarak yürütülür, sonuçta elde edilen MAV dokulara 45-35 mg toplam ağırlığında iki dokunulmamış varlık içinde olmalıdır. Korteksin en çevreleyen başlangıçta disseke MAV 25 mg ve talamus kapsayan MAV hakkında tartmak gerekir, colliculi ve oksipital kortekste yaklaşık 15 mg tartmak gerekir. Bu damar içinde kan kalıntı renk olarak hafifçe pembemsi olmalıdır. Iki taraflı koroid pleksus hasat edilen her bir tartı 1-2 mg ile iki tam doku numuneleri içinde olmalıdır. Fazla su doku kaybını önlemek için, bu tür lens temizleme kullandığı gibi kağıt mendil kullanarak depolama veya işleme öncesi MAV kaldırılabilir rağmen disseke koroid pleksus gelen aşırı su çıkarmak için iyi bir fikir değildir. Şekil 1 için oluşturulmuş oldu ifadesi profil karşılaştırarak<html> kullanarak kontrol koşulları altında üç bölgede es (striatum, parietal korteks ve MAV) Agilent-014879 Tüm Rat Genom 4x44K 60mer oligonükleotid dizileri (G4131F, Agilent Technologies, Palo Alto, CA; NCBI GEO Katılım # GPL7294; GSE23093 ve de mevcut GSE29733 NCBI GEO depo). 1) striatum parietal korteks göre ve 2) MAV parietal korteks ile kıyaslandığında resimde iki arsa pictorially ifadeyi gösterir. Bu striatum ve parietal korteks çok daha yakından MAV dışında birbirleriyle ilişkili olduğu açıktır. MAV ile koroid pleksus karşılaştıran veriler, gelecekteki bir yayında sunulacaktır. Ancak, MAV ve koroid pleksus ifadeyi profilleri daha yakından striatum ve parietal korteks için olandan birbirleriyle ilişkili olması muhtemeldir. Şekil 2 MAV yılında diferansiyel gen ekspresyonu hipertermi yanıt (EIH) karşı AMPH karşılaştırıldığında gösterir kontrol etmek ve her bir diğer için. içerik &quot;&gt; kontrol hayvanlarının MAV resmi NCBI gen sembolleri ile 11,000 &#39;den fazla genin gen ekspresyonu striatum ve parietal kortekste kaydedilmiş kıyasla edildi. bu genlerin 2000&#39;den fazla MAV içinde bir 2.5 kat veya daha fazla farklı ekspresyonu İki nöronal zengin dokular ile karşılaştırıldığında, 550 gen ifadesinde 10 kat büyük bir fark vardı. Bunlardan biraz fazla 40% (253) 10 kat veya MAV daha azalmış bir ifade ile gen ve ilişkili olduğu nöronal fonksiyonu. 343 genler parietal korteks ve striatum kıyasla MAV bir 10 kat veya daha fazla ifadesi vardı. genlerin Bu liste MAV çok yüksek zenginleştirme ile genleri belirlemek için bir başlangıç ​​noktası olarak kullanılmıştır. Tablo MAV 15 kat ifade büyük olan 1 listeleri genler parietal korteks ve striatum ile karşılaştırıldığında ve fonksiyon açısından bunları sınıflandırır. Bu genlerin çoğu damar sistemi ve / veya bağışıklık sistemi ile ilişkili bulunmuştur. Bu tgenlerin Dosya türleri yaklaşık 5 zenginleştirilmiş olmalıdır - 10 - çünkü artan damar kendisi ve içinde bulunan kan kat. Ancak, hatta bilinen genel vasküler fonksiyonları ile genler için, 15 kat üzerinde bir artış MAV zenginleşme gösterir. Genlerin numaraları edildi çok büyük bir kat değişiklik ile de olmamıştır; 1) hücre dışı matris proteinleri (özellikle damar ile ilgili olmayan), 2) çözünen taşıyıcı ve 3) lipit ve retinoik asit metabolizması. De, birkaç büyüme ve farklılaşma gen veya transkripsiyon faktörleri bulunmuştur gibi. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/4285/4285fig1.jpg" /> Şekil 1. Parietal korteks ve striatum ile MAV yılında Gen Ekspresyonu karşılaştırılması. Parietal korteks ve striatum (üst plot) ve parietal korteks ve MAV (alt çizim) gen ekspresyonu düzeylerinin karşılaştırılması Volkan arsa. Kırmızı semboller önemli ölçüde farklı betwe olan genlerin ifadetr p bölgeler &lt;0.05 ve bölgeler arasında 1.5 kat veya daha fazla diferansiyel ifadesi var. Siyah semboller anlamlı (p&gt; 0.05) bölgeleri arasındaki farklılık genlerin temsil ve 1.5 kat ifadede farklı daha azdır. Pembe semboller p &lt;0.05 düzeyinde ifadesinde 1.5 kat fark daha az, ancak istatistiksel olarak anlamlı farklı olan genleri gösterir. Sarı semboller 1.5 kat veya daha fazla ifadeye sahip genleri tanımlamak ama bu değişim p &lt;0.05 istatistiksel olarak anlamlı değildir. Kısaltmalar AMPH amfetamin EIH çevre kaynaklı hipertermi MAV meninksler ve ilişkili beyin damarlarında Norm normotermik kontrol <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/4285/4285fig2.jpg" /> Şekil 2. Karşılaştırarak hipertermi ve MAV gen ekspresyonu amfetamin Etkileri. Volcano araziler3 saat zaman noktalarında, tuzlu su, EIH veya AMPH sonra MAV gen ekspresyonunun seviyeleri. Kırmızı semboller siyah noktalar / çevrelerde önemli bölgeler arasında farklılık yoktur genleri temsil ederken önemli ölçüde farklı olduğu düşünülen genlerin ifade. Ek istatistiksel analiz kontrolü ve tedaviler arasındaki fark istatistiksel olarak anlamlı aslında vardı hangi ifadeyi doğrulamak için kullanıldı. <table border="1"><tbody><tr><td fo:width="1in"> MAV İfade Beyin Anlatım </td><td fo:width="4.5in"> NCBI Gen Sembolleri </td><td fo:width="1.5in"> Doku Özgünlük veya Dolaylı Görev (ler) </td></tr><tr><td> &gt; 50 kat </td><td> Col8a1 Anxa2 bir, Des, Esm1, Glycam1, Kl bir, Lect1, leptin reseptör, Lum, Myh11, OGN, Tagln, Thbs2, Tnnt2 </td><td> Damarları ve Kalp </td></tr><tr><td> &gt; 50 kat </td><td> Ccl19, Cd74 a, Defb1, Lrrc21, Mgl1, Mrc1, Msln, Pla2g5, Prg4, RT1-Bb, RT1-Da </td><td> Bağışıklık Sistemi </td></tr><tr><td> &gt; 50 kat </td><td> ADH1, Aebp1, Aldh1a2, Gstm2 </td><td> Retinoik Asit ve Lipit İşleme </td></tr><tr><td> &gt; 50 kat </td><td> Cdh1, Col3a1, Col1a2, Colec12, Cpxm2, CPZ, DCN, Emp3, Gpc3, Nupr1, Omd, Pcolce Slamf9, Tmem27, Tspan8 </td><td> Ekstrasellüler Matriks ve hücre-hücre kavşaklar </td></tr><tr><td> &gt; 50 kat </td><td> Aqp1, Asgr1, Kcnj13, Slc5a5, Slc6a13, Slc6a20, Slc22a6, Sned1, Ttr </td><td> İyon ve Katı Homeostazı </td></tr><tr><td> &gt; 50 kat </td><td> Alx3, Cdkn1c, Foxc2, Igfbp2, Ifitm1, Ifitm2, Nkx6-1, Osr1, Prrx2, Sfrp1, Tbx15. Upk1b, Wisp2, Wnt6 </td><td> Geliştirme ve Transkripsiyon Yönetmeliği </td></tr><tr><td> &gt; 50 kat </td><td> Gpha2, Mfap5, Mpzl2 Plac8, Scgb1c1, Sostdc1, Steap1 </td><td> Bilinmeyen &amp; Çeşitli </td></tr><tr><td> 30 ile 50 kat </td&gt; <td> Anxa1 a, Angpt2, C6 bir, GJB2, Ptgis, Thbd, Timp1 </td><td> Damarları ve Kalp </td></tr><tr><td> 30 ile 50 kat </td><td> Casp12, CCl2, CCR1, CD14, Cxcl10, Ifitm3, Klra5, Lgals1, Lgals3, Ms4a4a, Ms4a7, Plscr1, Spp1, Xcl1 </td><td> Bağışıklık Sistemi </td></tr><tr><td> 30 ile 50 kat </td><td> Col6a3, Cpxm1, Efemp1, fmod, MGP, Nid2 </td><td> Ekstrasellüler Matriks ve hücre-hücre kavşaklar </td></tr><tr><td> 30 ile 50 kat </td><td> Cp, Cubn, Gcgr, S100a6, Scn7a, Sct, Slc4a5, Slc16a11, Slco1a5 </td><td> İyon ve Katı homeostazı </td></tr><tr><td> 30 ile 50 kat </td><td> CFD, Ch25h, Crabp2, Rarres2 </td><td> Retinoik Asit ve Lipit İşleme </td></tr><tr><td> 30 ile 50 kat </td><td> BMP6, Casp12, DAB2, Folr1, Igf2, Msx1, Tbx18, Twist1, Wnt5b </td><td> Geliştirme ve Transkripsiyon Yönetmeliği </td></tr><tr><td> 30 ile 50 kat </td><td> Cela3b, Cln6, C1qtnf7, Copz2, Dhrs7c, Gng11, Prss23, Srpx, Vim </td><td> Bilinmeyen &amp; Çeşitli </td></tr><tr><td> 15 30-kat </td><td> Amiral, Angpt1, Angptl2, BGN, Cklf bir, Cnn1, Cox8h, Ctsk, F13a1, Gja5, Klf4, Lox, Lyz, Myl9, Procr, Pros1, RT1-Ba, Serpinb10, Serping1, Serpinf1, Tgm2, Tnmd, Trim63, Txnip a, Vamp5, VTN </td><td> Damarları ve Kalp </td></tr><tr><td> 15 30-kat </td><td> Ada, Bst2, Ccl6, CD40, CD68, Ctsc, Dap, Faim3, Fkbp9, Fxyd5, Fmo1, Glipr1, Ier3, Ifi47, Igsf6, Msc, Nfatc4, RT1-db1, Serpinb1a, Tir4, Tubb6 </td><td> Bağışıklık Sistemi </td></tr><tr><td> 15 30-kat </td><td> Adamtsl4, COL1A1, Crb3, Dpt, Egfl3, FBN1, Fbln1, Fbln5, FN1, Itgb4, Lama2, Lgals3bp, Loxl1, Mfap4, Mmp14, Mmp23, Ppic, Serpinh1, TIMP3 </td><td> Ekstrasellüler Matriks ve hücre-hücre kavşaklar </td></tr><tr><td> 15 30-kat </td><td> Cybrd1, Selenbp1, Slc2a4, Slc9a2, Slc13a3, Slc16a4, Slc22a8, Slc22a18 </td><td> İyon ve Katı homeostazı </td></tr><tr><td> 15 30-kat </td><td> Agpat2, Bdh2, Cyp26b1, Lpar3, Ltb4dh, Olr1, PON3, Rbp1, Rbp4 </td><td> Retinoik Asit ve Lipit İşleme </td></tr><tr><td> 15 30-kat </td><td> Atf3, Dkk4, Eya2, Ifitm7, Ltbp1, Mustn1, Nr2f2, ptrf, Sphk1, Tgfbi, Tcea3 Tcfap2b, Wnt2b, Wnt5a, Zic1 </td><td> Geliştirme ve Transkripsiyon Yönetmeliği </td></tr><tr><td> 15 30-kat </td><td> Adamts12, Adamtsl3, C1r, Crispld2, Crygn, CYP1B1, Dse, Enpep, Enpp2, Epn3, Flna, Fmo3, Gnmt, Gprc5c, Hspb1, Klc3, Krt18, Krt19, MDK, Mesp1, Ms4a6a, Ms4a6b, Ms4a11, net1, Pdlim2, Phactr2, Plp2, Ppp1r3b, Pqlc3, Rin3, Spag11, Sult1a1, Tmem106a, Wfikkn2 </td><td> Bilinmeyen &amp; Çeşitli </td></tr></tbody></table> * Tabloda yer Genler striatum ve pariet hem fazla 15 kat yukarıda ifadesi olmalıdıral korteks ve arka plan seviyelerinin üzerinde 5 kat. Her gen için iki oranları (MHA / veya striatum MAV / parietal korteks) alt gruplandırma için kullanılmıştır. Bir Genler endotel hücrelerinde bulunan ama aynı zamanda büyük olasılıkla bağışıklık yanıtları arabuluculuk önemli bir rol oynarlar. Tablo 1. 15 kat * veya striatum ve parietal korteks kıyasla MAV daha artmış ekspresyonu ile Genler.

<ol>
	<li>Thomas, M., George, N. I., Patterson, T. A., Bowyer, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amphetamine+and+environmentally+induced+hyperthermia+differentially+alter+the+expression+of+genes+regulating+vascular+tone+and+angiogenesis+in+the+meninges+and+associated+vasculature.">Amphetamine and environmentally induced hyperthermia differentially alter the expression of genes regulating vascular tone and angiogenesis in the meninges and associated vasculature.</a> Synapse. 63, 881-894 (2009).</li><li>Thomas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoplasmic+reticulum+stress+responses+differ+in+meninges+and+associated+vasculature,+striatum,+and+parietal+cortex+after+a+neurotoxic+amphetamine+exposure.">Endoplasmic reticulum stress responses differ in meninges and associated vasculature, striatum, and parietal cortex after a neurotoxic amphetamine exposure.</a> Synapse. 64, 579-593 (2010).</li><li>Ek, C. J., Dziegielewska, K. M., Habgood, M. D., Saunders, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Barriers+in+the+developing+brain+and+Neurotoxicology.">Barriers in the developing brain and Neurotoxicology.</a> Neurotoxicology. , (2012).</li><li>Oldfield, B. J. M., Michael, J., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Rat Nervous System. 2, 391 (1995).</li><li>Johanson, C. E., Stopa, E. G., McMillan, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blood-cerebrospinal+fluid+barrier:+structure+and+functional+significance.">The blood-cerebrospinal fluid barrier: structure and functional significance.</a> Methods Mol. Biol. 686, 101-131 (2011).</li><li>Johanson, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplicity+of+cerebrospinal+fluid+functions:+?+challenges+in+health+and+disease.">Multiplicity of cerebrospinal fluid functions: ? challenges in health and disease.</a> Cerebrospinal Fluid Res. 5, (2008).</li><li>Scremin, O. U., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Rat Nervous System. 2, 3 (1995).</li><li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. , (1995).</li><li>Johnston, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoperiodic+regulation+of+prolactin+secretion:+changes+in+intra-pituitary+signalling+and+lactotroph+heterogeneity.">Photoperiodic regulation of prolactin secretion: changes in intra-pituitary signalling and lactotroph heterogeneity.</a> J. Endocrinol. 180, 351-356 (2004).</li><li>Catala, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+function+of+very+long+chain+polyunsaturated+fatty+acids+in+the+pineal+gland.">The function of very long chain polyunsaturated fatty acids in the pineal gland.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1801, 95-99 (2010).</li><li>Burnstock, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenic+control+of+cerebral+circulation.">Neurogenic control of cerebral circulation.</a> Cephalalgia. 5, 25-33 (1985).</li><li>Hamel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+nerves+and+the+regulation+of+cerebrovascular+tone.">Perivascular nerves and the regulation of cerebrovascular tone.</a> J. Appl. Physiol. 100, 1059-1064 (2006).</li><li>Johanson, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+function+and+nigrostriatal+markers+in+abstinent+methamphetamine+abusers.">Cognitive function and nigrostriatal markers in abstinent methamphetamine abusers.</a> Psychopharmacology (Berl). 185, 327-338 (2006).</li><li>Johnston, M., Papaiconomou, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrospinal+Fluid+Transport:+a+Lymphatic+Perspective.">Cerebrospinal Fluid Transport: a Lymphatic Perspective.</a> News Physiol. Sci. 17, 227-230 (2002).</li><li>Johnston, M., Zakharov, A., Koh, L., Armstrong, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subarachnoid+injection+of+Microfil+reveals+connections+between+cerebrospinal+fluid+and+nasal+lymphatics+in+the+non-human+primate.">Subarachnoid injection of Microfil reveals connections between cerebrospinal fluid and nasal lymphatics in the non-human primate.</a> Neuropathol. Appl. Neurobiol. 31, 632-640 (2005).</li><li>Johnston, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+connections+between+cerebrospinal+fluid+and+nasal+lymphatic+vessels+in+humans,+non-human+primates+and+other+mammalian+species.">Evidence of connections between cerebrospinal fluid and nasal lymphatic vessels in humans, non-human primates and other mammalian species.</a> Cerebrospinal Fluid Res. 1, 2 (2004).</li><li>Kulik, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+cerebral+vasculature+in+normal+and+ischemic+brain.">Regulation of cerebral vasculature in normal and ischemic brain.</a> Neuropharmacol. 55, 281-288 (2008).</li><li>Bowyer, J. F., Ali, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+doses+of+methamphetamine+that+cause+disruption+of+the+blood-brain+barrier+in+limbic+regions+produce+extensive+neuronal+degeneration+in+mouse+hippocampus.">High doses of methamphetamine that cause disruption of the blood-brain barrier in limbic regions produce extensive neuronal degeneration in mouse hippocampus.</a> Synapse. 60, 521-532 (2006).</li><li>Sharma, H. S., Westman, J., Nyberg, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+brain+edema+and+cell+changes+following+hyperthermic+brain+injury.">Pathophysiology of brain edema and cell changes following hyperthermic brain injury.</a> Prog. Brain Res. 115, 351-412 (1998).</li><li>Sharma, H. S., Sjoquist, P. O., Ali, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drugs+of+abuse-induced+hyperthermia,+blood-brain+barrier+dysfunction+and+neurotoxicity:+neuroprotective+effects+of+a+new+antioxidant+compound+H-290/51.">Drugs of abuse-induced hyperthermia, blood-brain barrier dysfunction and neurotoxicity: neuroprotective effects of a new antioxidant compound H-290/51.</a> 13, 1903-1923 (2007).</li><li>Ho, E. L., Josephson, S. A., Lee, H. S., Smith, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebrovascular+complications+of+methamphetamine+abuse.">Cerebrovascular complications of methamphetamine abuse.</a> Neurocrit. Care. 10, 295-305 (2009).</li><li>Ohta, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+ischemic+stroke+associated+with+methamphetamine+use.">Delayed ischemic stroke associated with methamphetamine use.</a> J. Emerg. Med. 28, 165-167 (2005).</li><li>Brenner, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropsychological+and+neuroimaging+findings+in+traumatic+brain+injury+and+post-traumatic+stress+disorder.">Neuropsychological and neuroimaging findings in traumatic brain injury and post-traumatic stress disorder.</a> Dialogues Clin. Neurosci. 13, 311-323 (2011).</li><li>Case, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflicted+traumatic+brain+injury+in+infants+and+young+children.">Inflicted traumatic brain injury in infants and young children.</a> Brain Pathol. 18, 571-582 (2008).</li><li>Maas, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+value+of+computerized+tomography+scan+characteristics+in+traumatic+brain+injury:+results+from+the+IMPACT+study.">Prognostic value of computerized tomography scan characteristics in traumatic brain injury: results from the IMPACT study.</a> J. Neurotrauma. 24, 303-314 (2007).</li></ol>

Biz ifşa etmek başka bir şey var. Burada sunulan çalışma zorunlu Gıda ve İlaç İdaresi görüşlerini temsil olmayabilir.

Teknik MAV yönlerini ve koroid pleksus diseksiyonu Bu, beyin tuzlu su, fosfat tamponlu serum fizyolojik içinde sodyum ya da çoğu zaman &quot;batık&quot; olması MAV ayrılmasının esnasında kritik öneme sahiptir. MAV ve korteks diseksiyonu sırasında kurutmak için izin Bu MAV ve / veya korteks bu kalarak MAV bölümleri kaldırmak için yetersizlik sonucu hasat kortikal doku miktarı artacak kortikal tabaka I. sıkıca yapışmış MAV sonuçlanacaktır. Ayrıca, sabır diseksiyonu sırasında gereklidir. Tek diseksiyonu sırasında bir yarımkürede korteks MAV kaldırarak bazı dirençle karşılaşırsa Yine, diğer yarımkürede geçmek ve direnç karşılaşıldı tarafına daha sonra geri dönün. Bu yöntem mükemmel bazı pratik sürer ve MAV doku devamlılığını hasattan elde edilmeden önce 5 ila 15 &quot;uygulama&quot; diseksiyonu gerektirir. Disseksiyon ve remo başlangıç ​​yöntembeyin tabanında arteriyel çemberde MAV Val destek olarak daha büyük bir damar kullanılarak menenjlerin çıkarılmasına olanak &quot;yapı iskelesi&quot;. Çok başlangıçta kurban sonra MAV damarlarında kan diseksiyonu sırasında fırlayan gerektiğini, MAV ve hasat RNA&#39;nın% 5&#39;inden az kan kökenli olmalıdır. Bu, önceki dekapitasyon ile beyin için kaldırma, histolojik teknikleri kullanılarak, tuzlu 50 ile 70 ml ile perfüze hayvan tarafından hemen hemen tüm kan kaldırmak mümkündür. Ancak, bu daha sonra disseksiyon sırasında MAV dokulara görselleştirmek için çok daha zordur. MAV dokuların &quot;kirlenme&quot; arasında üç büyük olasılıkla kaynak epifiz bezi, kortikal tabaka ben doku ve rezidü koku ampul dokusu vardır ama hazırlık hipofiz bezi dokusu elde etmek de mümkündür. MAV içinde Epifiz kontaminasyon koyu kırmızı renkli bir yuvarlak 1 ila 2 mm çaplı küre içeren MAV tarafından tespit edilir. Birincil işleviEpifiz bezinin MAV normal olarak tamamen farklı olarak kabul edilir. Birincil işlevi sirkadiyen ritim 9 yönlerini düzenleyen melatonin ve lipid öncüllerinin lipoxygenation 10 üretmektir. Lipoksijenaz aktivitesini düzenleyen gen Lox, öncelikle epifiz bezi 10 yetişkin mevcut olduğu düşünülse de, bizim sonuçlarımız da MAV önemli düzeyde sürekli mevcut olduğunu göstermektedir. Bunun içine renk çok solgun bazı 1 ile 2 mm daha yoğun doku olan pembemsi web benzeri MAV dokuda kalan kortikal veya koku ampul kirlenme sonuçlar. Bu, tampon yüzeyine MAV &quot;yüzen&quot;, ve daha sonra iki kesme forseps kullanılarak, ağır kortikal ya da ampul dokuların çıkarılması ile tespit edilebilir. Kortikal tabaka Ben dokusu, hipotalamik doku veya pineal bezden MAV kirlenme varsa, o zaman bazı genleri bir anlamlı olacak&quot;temiz&quot; bir diseksiyon normalde mevcut olandan derecede daha fazla ifade. Epifiz bezi ile MAV kirlenmesi arylalkylamine melatonin sentezi için gerekli olan (Aanat) N-asetiltransferaz, yüksek ekspresyonu neden olur. Pineal kontaminasyon MAV diseksiyonu sırasında oluşursa Maalesef, MAV yılında Lox düzeyleri doğru tespit edilmesi mümkün olmayacaktır. Kortikal dokusu ile MAV kirlenmesi böyle hippocalcin (Hpca), parvalbumin (Pvalb) ve / veya nöronal pentraxin reseptörü (Nptxr) gibi nöron-özgü gen ekspresyonunun neden olur. Hipotalamik doku ile MAV kirlenmesi büyüme hormonu 1 (GH1), proopiomelanocortin (POMC) daha yüksek ifade neden olur. Hasat edilen dokularda biraz kirlenme var olmadığını durumunda, bu genlerin çoğu belirlenmiş ve gen ekspresyon analizi kullanılmamıştır edilebilir. Bu, döner blo bulunan genleri için özellikle önemlidirHala MAV veya koroid pleksus mevcut olabilir od. Hasat MAV ve koroid pleksus gelen gen ifade verileri bilgileri yorum Ilişkili zarları (MHA) ve koroid pleksus ile birlikte beyinsel yüzey (yüzeysel) damar serebral kan akışı ve beyin-omurilik sıvısı (CSF) homeostazı 4,11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 için de gereklidir. Dokusu hasat biyokimyasal ve fizyolojik analizi için uygun olan ve MAV gen ekspresyonu analizi ile amfetamin ve 1,2 hipertermi tarafından üretilen zarar karşı duyarlı olduğu gösterilmiştir. Bu sonuçlar aynı zamanda ağır hipertermi ve genel 18,19,20 olarak beyin damarlarını için amfetamin maruz hakkında bilinenlerin ile orantılı bulunmaktadır. İnsan klinik veriler subdural damar amfetamin ve metamfetamin 21,22 ile zarar duyarlı olduğu inancını destekler. Yanı sıra, majör ve minör serebral vasculatures dahil olmak üzerekafa travması 23,24 25 Kafa Travması türleri araştırırken potansiyel yüksek faiz vardır MAV hasat edilir menenjlerin pial tabakası bu ing. MAV üremesi mevcut gen ekspresyon profili pial ve muhtemelen araknoid meningeal membran BOS kompozisyonu düzenlenmesinde beklenenden daha büyük bir rol oynayabileceğini göstermektedir. Gelecekte, mikroskop kesme tekniği kullanmak suretiyle, daha fazla pial ve araknoid membranları daha büyük bir atardamar damar mevcut ve muhtemelen birbirine ayrılabilir şekilde MAV ihtiva eden dokular ayırmak mümkün olabilir. Bu hasat MAV bu 3 bileşenlerin her birinin işlevi daha iyi bir yorumlama sağlayacaktır.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / ekipman Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> Normal Saline (9 gram tuz / 1 Litre H 2 O) </td><td> In-house </td><td></td><td> Diseksiyon tampon </td></tr><tr><td> 0.1 M sodyum fosfat pH 7.4 </td><td> In-house </td><td></td><td> Diseksiyon tampon </td></tr><tr><td> Kemik rongeurs </td><td> Roboz </td><td> RS-8300 </td><td> Kafatası kemik kaldırma </td></tr><tr><td> Forseps-bükülmüş ucu (4 &quot;uzun ve 0.8 mm genişliğinde ucu) </td><td> Roboz </td><td> RS-5135 veya RS-5137 </td><td> Diseksiyon Forseps </td></tr><tr><td> Forseps-düz uçlu (5.5 &quot;uzun) </td><td> Roboz </td><td> RS-8124 veya RS-8104 </td><td> Thumb Giyinme Forseps </td></tr></tbody></table>

a visual description of the dissection of the cerebral surface vasculature and associated meninges and the choroid plexus from rat brain

Bu video sunumu destekleyen önbeyin fonksiyonu, düzgün beyin içinde ikamet etmeyen, iki en önemli derecede vasküler yapıların hasat yöntemi göstermek için oluşturuldu. Onlar ilişkili meninksler (MAV) ve serebral kan akımı ve beyin omurilik sıvısı (BOS) homeostazı için gerekli olan koroid pleksus ile birlikte serebral yüzeyi (yüzeysel) damar vardır. Hasat edilen doku biyokimyasal ve fizyolojik analizi için uygun olan ve MAV amfetamin ve 1,2 hipertermi tarafından üretilen zarar karşı duyarlı olduğu gösterilmiştir. Kafa travması Kafa Travması türleri araştırırken Yanı sıra, MAV hasat majör ve minör serebral vasculatures potansiyel olarak yüksek ilgi vardır. Bu sunumda disseke MAV pial ve menenjlerin araknoid membran (az dura) ve majör ve minör serebral yüzey damarlar bazı oluşur. Pleksus disseke koroid l bulunduğu yapıdırOldfield ve McKinley 3,4,5,6 tarafından açıklandığı gibi ateral ventriküller. Bu iki dokuları için kullanılan yöntemler de zarları ve büyük serebral yüzey damar yoksun bölgesel kortikal doku hasat kolaylaştırmak, vb alır iki dokuların diseksiyonu gibi striatum, hipotalamus, hipokampus gibi diğer beyin dokuları ile uyumlu 5-10 dakika toplam. Olarak gösterilen ve bu sunum açıklanan disseke MAV ve koroid pleksus için gen ekspresyon düzeyleri, NCBI GEO deposunda GSE23093 (MAV) ve GSE29733 (koroid pleksus) bulunabilir. Bu veri olmuştur ve daha fazla MAV ve koroid pleksus işleyişini anlamak ve nasıl nörotoksik şiddetli hipertermi ve AMPH gibi olayları olumsuz kendi fonksiyonunu etkileyebilir yardım için kullanılıyor.

Watch this Scientific Journal Video about A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain at JoVE.com

A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain

Bu video sunumu önbeyin işlevini destekleyen en önemli iki derece vasküler yapıların hasat yöntemi gösterir. Onlar ilişkili meninksler (MAV) ve serebral kan akımı ve beyin omurilik sıvısı (BOS) homeostazı için gerekli olan koroid pleksus ile birlikte serebral yüzeyi (yüzeysel) damar vardır.

Rat Beyin gelen Serebral Yüzey damarları ve İlişkili Beyin zarları ve Diseksiyon ve Koroid Pleksus bir Görsel Açıklama

This video presentation was created to show a method of harvesting the two most important highly vascular structures, not residing within the brain ...

a-visual-description-dissection-cerebral-surface-vasculature

Research

JoVE Journal

Neuroscience

47.9K Görüntüleme.  National Center for Toxicological Research. Bu video sunumu önbeyin işlevini destekleyen en önemli iki derece vasküler yapıların hasat yöntemi gösterir. Onlar ilişkili meninksler (MAV) ve serebral kan akımı ve beyin omurilik sıvısı (BOS) homeostazı için gerekli olan koroid pleksus ile birlikte serebral yüzeyi (yüzeysel) damar vardır.

Video: A Visual Description of the Dissection of the Cerebral Surface Vasculature and Associated Meninges and the Choroid Plexus from Rat Brain

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable clinical state; in the development of animal models of focal ischemia, however, achieving reproducibility of experimentally induced infarct volume is essential. The rat is a widely used animal model for stroke due to its relatively low animal husbandry costs and to the similarity of its cranial circulation to that of humans2,3. In humans, the middle cerebral artery (MCA) is most commonly affected in stroke syndromes and multiple methods of MCA occlusion (MCAO) have been described to mimic this clinical syndrome in animal models. Because recanalization commonly occurs following an acute stroke in the human, reperfusion after a period of occlusion has been included in many of these models. In this video, we demonstrate the transient endovascular suture MCAO model in the spontaneously hypertensive rat (SHR). A filament with a silicon tip coating is placed intraluminally at the MCA origin for 60 minutes, followed by reperfusion. Note that the optimal occlusion period may vary in other rat strains, such as Wistar or Sprague-Dawley. Several behavioral indicators of stroke in the rat are shown. Focal ischemia is confirmed using T2-weighted magnetic resonance images and by staining brain sections with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) 24 hours after MCAO.

Surgical induction of ischemic brain damage in the rat is a widely used model for stroke research. Here we demonstrate the induction of focal cerebral ischemia by occlusion of the middle cerebral artery. Visualization of the resulting infarct by histological staining and magnetic resonance imaging is also shown.

Endovasküler Dikiş Rat Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fokal Serebral İskemi Model

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

Nörobilim

Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to monitor the disease course in the follow-up period. Changes in the VEP parameters closely correlate with pathological damage in the optic nerve. This protocol provides a detailed description about the rodent model of optic nerve microinjection, in which a partial demyelination lesion is produced in the optic nerve. VEP recording techniques are also discussed. Using skull implanted electrodes, we are able to acquire reproducible intra-session and between-session VEP traces. VEPs can be recorded on individual animals over a period of time to assess the functional changes in the optic nerve longitudinally. The optic nerve demyelination model, in conjunction with the VEP recording protocol, provides a tool to investigate the disease processes associated with demyelination and remyelination, and can potentially be employed to evaluate the effects of new remyelinating drugs or neuroprotective therapies.

Focal demyelination is induced in the optic nerve using lysolecithin microinjection. Visual evoked potentials are recorded via skull electrodes implanted over the visual cortex to examine the signal conduction along the visual pathway in vivo. This protocol details the surgical procedures underlying electrode implantation and optic nerve microinjection.

Deneysel Optik Sinir demyelinizasyon bir Rat Modelinde Görsel Uyarılmış Potansiyel Kayıt

The visual evoked potential (VEP) recording is widely used in clinical practice to assess the severity of optic neuritis in its acute phase, and to ...

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

The choroid plexus is located in the ventricular wall of the brain, the main function of which is believed to be production of cerebrospinal fluid. Choroid plexus epithelial cells (CPECs) covering the surface of choroid plexus tissue harbor multiple unique cilia, but most of the functions of these cilia remain to be investigated. To uncover the function of CPEC cilia with particular reference to their motility, an ex vivo observation system was developed to monitor ciliary motility during embryonic, perinatal and postnatal periods. The choroid plexus was dissected out of the brain ventricle and observed under a video-enhanced contrast microscope equipped with differential interference contrast optics. Under this condition, a simple and quantitative method was developed to analyze the motile profiles of CPEC cilia for several hours ex vivo. Next, the morphological changes of cilia during development were observed by scanning electron microscopy to elucidate the relationship between the morphological maturity of cilia and motility. Interestingly, this method could delineate changes in the number and length of cilia, which peaked at postnatal day (P) 2, while the beating frequency reached a maximum at P10, followed by abrupt cessation at P14. These techniques will enable elucidation of the functions of cilia in various tissues. While related techniques have been published in a previous report1, the current study focuses on detailed techniques to observe the motility and morphology of CPEC cilia ex vivo.

Observation of the Ciliary Movement of Choroid Plexus Epithelial Cells Ex Vivo

In this study, a detailed light microscopic technique was optimized for real-time observation and analysis of the motion of CPEC cilia ex vivo together with an electron microscopic method for ultrastructural analysis.

Koroid Pleksus Epitel Hücreleri Silier Hareketi Gözlem<em&gt; Ex Vivo</em

The choroid plexus is located in the ventricular wall of the brain, the main function of which is believed to be production of cerebrospinal fluid. ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful analysis of synaptic transmission modulation when performing field potential or intracellular recordings. This manuscript describes methodological aspects that might be helpful in improving experimental conditions for the maintenance of acute brain slices and for recording field excitatory postsynaptic potentials in a commercially available submersion chamber with an outflow-carbogenation unit. The outflow-carbogenation helps to stabilize the oxygen level in experiments that rely on the recycling of a small buffer reservoir to enhance the cost-efficiency of drug experiments. In addition, the manuscript presents representative experiments that examine the effects of different carbogenation modes and stimulation paradigms on the activity-dependent synaptic plasticity of synaptic transmission.

This protocol describes the stabilization of the oxygen level in a small volume of recycled buffer and methodological aspects of recording activity-dependent synaptic plasticity in submerged acute hippocampal slices.

Sinaptik plastisite akut Hipokampal dilimleri bir küçük hacimli geri dönüşüm-, perfüzyon- ve batma-tipi oda sistemi içinde tutulan kayıt

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Live Imaging of Primary Cerebral Cortex Cells Using a 2D Culture System

During cerebral cortex development, progenitor cells undergo several rounds of symmetric and asymmetric cell divisions to generate new progenitors or postmitotic neurons. Later, some progenitors switch to a gliogenic fate, adding to the astrocyte and oligodendrocyte populations. Using time-lapse video-microscopy of primary cerebral cortex cell cultures, it is possible to study the cellular and molecular mechanisms controlling the mode of cell division and cell cycle parameters of progenitor cells. Similarly, the fate of postmitotic cells can be examined using cell-specific fluorescent reporter proteins or post-imaging immunocytochemistry. More importantly, all these features can be analyzed at the single-cell level, allowing the identification of progenitors committed to the generation of specific cell types. Manipulation of gene expression can also be performed using viral-mediated transfection, allowing the study of cell-autonomous and non-cell-autonomous phenomena. Finally, the use of fusion fluorescent proteins allows the study of symmetric and asymmetric distribution of selected proteins during division and the correlation with daughter cells fate. Here, we describe the time-lapse video-microscopy method to image primary cerebral cortex murine cells for up to several days and analyze the mode of cell division, cell cycle length and fate of newly generated cells. We also describe a simple method to transfect progenitor cells, which can be applied to manipulate genes of interest or simply label cells with reporter proteins.

Live imaging is a powerful tool to study cellular behaviors in real time. Here, we describe a protocol for time-lapse video-microscopy of primary cerebral cortex cells that allows a detailed examination of the phases enacted during the lineage progression from primary neural stem cells to differentiated neurons and glia.

Primer serebral korteks hücre bir 2D kültür sistemi kullanarak görüntüleme yaşamak

During cerebral cortex development, progenitor cells undergo several rounds of symmetric and asymmetric cell divisions to generate new progenitors or ...

A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor determining patient outcome and is therefore frequently taken as a study endpoint. However, in small animal studies on SAH, quantification of cerebral vasospasm is a major challenge. Here, an ex vivo method is presented that allows quantification of volumes of entire vessel segments, which can be used as an objective measure to quantify cerebral vasospasm. In a first step, endovascular casting of the cerebral vasculature is performed using a radiopaque casting agent. Then, cross-sectional imaging data are acquired by micro computed tomography. The final step involves 3-dimensional reconstruction of the virtual vascular tree, followed by an algorithm to calculate center lines and volumes of the selected vessel segments. The method resulted in a highly accurate virtual reconstruction of the cerebrovascular tree shown by a diameter-based comparison of anatomical samples with their virtual reconstructions. Compared with vessel diameters alone, the vessel volumes highlight the differences between vasospastic and non-vasospastic vessels shown in a series of SAH and sham-operated mice.

The goal of this article is to present a method that allows a 3-dimensional reconstruction of the cerebrovascular tree in mice after micro computed tomography and determination of volumes of entire vessel segments that can be used to quantify cerebral vasospasm in murine models of subarachnoid hemorrhage.

Subaraknoid kanama, bir fare modeli serebral Vasospasm miktar hacimsel bir yöntemi

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor ...

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral vascular effects. Impact (i.e., non-blast) traumatic brain injury (TBI) is known to decrease pressure autoregulation in the cerebral vasculature in both humans and experimental animals. The hypothesis that blast-induced traumatic brain injury (bTBI), like impact TBI, results in impaired cerebral vascular reactivity was tested by measuring myogenic dilatory responses to reduced intravascular pressure in rodent middle cerebral arterial (MCA) segments from rats subjected to mild bTBI using an Advanced Blast Simulator (ABS) shock tube. Adult, male Sprague-Dawley rats were anesthetized, intubated, ventilated and prepared for Sham bTBI (identical manipulation and anesthesia except for blast injury) or mild bTBI. Rats were randomly assigned to receive Sham bTBI or mild bTBI followed by sacrifice 30 or 60 min post-injury. Immediately after bTBI, righting reflex (RR) suppression times were assessed, euthanasia at the time points post-injury was completed, the brain was harvested and the individual MCA segments were collected, mounted and pressurized. As the intraluminal pressure perfused through the arterial segments was reduced in 20 mmHg increments from 100 to 20 mmHg, MCA diameters were measured and recorded. With decreasing intraluminal pressure, MCA diameters steadily increased significantly above baseline in the Sham bTBI groups while MCA dilator responses were significantly reduced (p &#60; 0.05) in both bTBI groups as evidenced by the impaired, smaller MCA diameters recorded for the bTBI groups. In addition, RR suppression in the bTBI groups was significantly (p &#60; 0.05) higher than in the Sham bTBI groups. MCA&#39;s collected from the Sham bTBI groups exhibited typical vasodilatory properties to decreases in intraluminal pressure while MCA&#39;s collected following bTBI exhibited significantly impaired myogenic vasodilatory responses to reduced pressure that persisted for at least 60 min after bTBI.

Here, we present a protocol to describe methods for ex vivo vascular reactivity determination following a primary blast traumatic brain injury (bTBI) using isolated, pressurized, rodent middle cerebral arterial (MCA) segments. bTBI induction is accomplished using a shock tube, also known as an Advanced Blast Simulator (ABS) device.

Serebral arterler patlama kaynaklı Neurotrauma etkilerini basınçlı kemirgen orta

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to intracranial delivery, intra-arterial administration of NSCs is less invasive and produces a more diffuse distribution of NSCs within the brain parenchyma. Further, intra-arterial delivery allows the first-pass effect in the brain circulation, lessening the potential for trapping of cells in peripheral organs, such as liver and spleen, a complication associated with peripheral injections. Here, we detail the methodology, in both mice and rats, for delivery of NSCs through the common carotid artery (mouse) or external carotid artery (rat) to the ipsilateral hemisphere after an ischemic stroke. Using GFP-labeled NSCs, we illustrate the widespread distribution achieved throughout the rodent ipsilateral hemisphere at 1 d, 1 week and 4 weeks after postischemic delivery, with a higher density in or near the ischemic injury site. In addition to long-term survival, we show evidence of differentiation of GFP-labeled cells at 4 weeks. The intra-arterial delivery approach described here for NSCs can also be used for administration of therapeutic compounds, and thus has broad applicability to varied CNS injury and disease models across multiple species.

A method for delivering neural stem cells, adaptable for injecting solutions or suspensions, through the common carotid artery (mouse) or external carotid artery (rat) after ischemic stroke is reported. Injected cells are distributed broadly throughout the brain parenchyma and can be detected up to 30 d after delivery.

Nöral Kök Hücrelerin Sıçan ve Fare Beynine İntra-Arteriyel Teslimatı: Serebral İskemiye Uygulama

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...

Measuring Post-Stroke Cerebral Edema, Infarct Zone and Blood-Brain Barrier Breakdown in a Single Set of Rodent Brain Samples

One of the most common causes of morbidity and mortality worldwide is ischemic stroke. Historically, an animal model used to stimulate ischemic stroke involves middle cerebral artery occlusion (MCAO). Infarct zone, brain edema and blood-brain barrier (BBB) breakdown are measured as parameters that reflect the extent of brain injury after MCAO. A significant limitation to this method is that these measurements are normally obtained in different rat brain samples, leading to ethical and financial burdens due to the large number of rats that need to be euthanized for an appropriate sample size. Here we present a method to accurately assess brain injury following MCAO by measuring infarct zone, brain edema and BBB permeability in the same set of rat brains. This novel technique provides a more efficient way to evaluate the pathophysiology of stroke.

This protocol describes a novel technique of measuring the three most important parameters of ischemic brain injury on the same set of rodent brain samples. Using only one brain sample is highly advantageous in terms of ethical and economic costs.

Tek Bir Kemirgen Beyin Örneklerinde İnme Sonrası Serebral Ödem, Enfarktüs Bölgesi ve Kan-Beyin Bariyeri Kırılımının Ölçülmesi

One of the most common causes of morbidity and mortality worldwide is ischemic stroke. Historically, an animal model used to stimulate ischemic stroke ...

Extraction and Dissection of the Domesticated Pig Brain

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular systems, gastrointestinal systems, and nutrition, and the pig is increasingly being used as a large animal model in neuroscience. Furthermore, the pig is an accepted model to study neurodevelopment as it displays brain growth and development patterns similar to what occurs in humans. As a less common animal model in neuroscience, surgical and dissection procedures on pigs may not be as familiar or well-practiced among researchers. Therefore, a standardized visual protocol detailing consistent extraction and dissection methods may prove valuable for researchers working with the pig. The following video showcases a technique to remove the pig brain while keeping the cortex and brainstem intact and reviews methods to dissect several commonly investigated brain regions including the brainstem, cerebellum, midbrain, hippocampus, striatum, thalamus, and medial prefrontal cortex. The purpose of this video is to provide researchers with the tools and knowledge necessary to consistently perform a brain extraction and dissection on the four-week-old pig.

This protocol details the technique for removal of the pig brain in its entirety and dissection of several brain regions commonly studied in neuroscience.

Evcilleştirilmiş Domuz Beyninin Ekstraksiyonu ve Diseksiyonu

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular ...