Ce travail a été soutenu par le National Institutes of Health (R01DK58096 à Vincent Poitout). Vincent Poitout titulaire de la Chaire de recherche du Canada sur le diabète et la fonction des cellules bêta du pancréas. Bader Zarrouki reçu des bourses post-doctorales de Merck et Eli Lilly. Fontés Ghislaine a été soutenu par une bourse post-doctorale de l&#39;Association canadienne du diabète.

Vue d&#39;ensemble: La procédure consiste en la pose de cathéters la veine jugulaire droite et l&#39;artère carotide gauche sous anesthésie générale, qui permet une période de récupération de 7 jours, reliant les cathéters de pompes utilisant un pivot et un système de contrepoids qui permet à l&#39;animal de se déplacer librement dans la cage; et infuser le glucose et / ou de l&#39;Intralipid (une émulsion d&#39;huile de soja qui génère un mélange d&#39;environ 80% unsaturated/20% d&#39;acides gras saturés avec de l&#39;héparine lorsque infusé 9) pendant 72 heures. 1. Canulation de la veine jugulaire droite et l&#39;artère carotide gauche <ol><li> Stériliser les instruments chirurgicaux. tube de canulation doit également être stérilisé à froid en utilisant un agent de stérilisation liquide (2,6% de glutaraldéhyde) avant la procédure. Plonger le tube dans un contenant stérilisé à l&#39;autoclave pour 16-24 heures. Rincez et rincer abondamment avec de l&#39;eau distillée stérile pour éliminer toutes les traces de glutaraldéhyde avant utilisation. </li><li> Peser le rat pour calculerdosages de médicaments: Carprofen 5 mg / kg: dilution 1/10 = poids corporel (g) x 0,001 ml SC (analgésique) Glycopyrrolate 0,01 mg / kg: dilution 1/10 = BW (g) X 0,0012 ml SC (anticholinergique) </li><li> Anesthésier le rat en utilisant l&#39;isoflurane et de l&#39;oxygène. </li><li> Placez le rat sur son estomac. Raser la zone derrière les oreilles à la base des épaulements. Posez le rat sur son dos. Rasez la région sous le cou aux pattes avant. </li><li> Préparation du site chirurgical à la chlorhexidine, de l&#39;alcool, et de l&#39;iode. Administrer des médicaments. </li><li> Transférez le rat dans le domaine chirurgical. </li><li> En utilisant une technique aseptique, canulate la veine jugulaire droite et l&#39;artère carotide gauche avec un PE-50 canule attachée à une seringue de 1 ml remplie avec 5 U de sérum physiologique hépariné. Rincer les canules avec 50 U de sérum physiologique hépariné pour éviter la coagulation au cours de la période de récupération. Utiliser des aiguilles 23G émoussés. Fermez chaque canule avec une épingle 23G. </li><li> Après la chirurgie, couper environ 2,5 mm de laincisives du bas et placez le rat dans une veste de perfusion pour éviter les canules d&#39;être mangé. </li><li> Fournir de l&#39;oxygène (1 L / min pendant 10 minutes) pour aider à évacuer l&#39;isoflurane. </li><li> Placez le rat dans une cage chauffée jusqu&#39;à ce qu&#39;elle soit complètement réveillé. </li><li> Exploiter quatre rats pour utiliser un par état ​​de perfusion (tableau 1). </li></ol> 2. Soins post-opératoire (traitement post-chirurgical et de la connexion des cathéters) <ol><li> Peser les rats le jour 1 et le jour 2 post-chirurgie. </li><li> Administrer glycopyrrolate (BW (g) x 0,00048 ml) SC deux fois le 1er jour post-opératoire et une fois sur 2 jours après l&#39;intervention chirurgicale. </li><li> Traitements de soutien supplémentaires peuvent être administrés si nécessaire: fluides, tapis de chauffage, l&#39;alimentation humide, l&#39;oxygénothérapie, les analgésiques, les anticholinergiques. </li><li> Au jour 7 post-chirurgie, peser les rats pour calculer les débits de perfusion. </li><li> Connectez chaque rat à un système de perfusion à l&#39;aide d&#39;une attache et pivotante montée sur un sommet de la grille de la cage (figure 1).</li><li> Rincer les canules avec 5 U de sérum physiologique hépariné pour enlever les caillots. Rincer les canules une fois de plus avec 50 U de sérum physiologique hépariné pour empêcher la coagulation. </li><li> Laisser les rats s&#39;acclimater à la longe et pivotent pendant au moins 24 heures avant le début de la perfusion. </li></ol> 3. Infusion <ol><li> Dessiner 0,15 ml de sang de la carotide de chaque glycémie chez le rat et la mesure. Rincer les canules jugulaires. Utilisez 50 U de sérum physiologique hépariné pour empêcher la coagulation dans les deux canules de chaque rat. </li><li> Transférer l&#39;échantillon de sang pour un tube collecteur de 0,5 ml contenant 2% d&#39;EDTA. Centrifuger à 10000 rpm pendant 2 min et congeler le plasma à -20 ° C. </li><li> Remplir deux seringues de 60 ml de chacune des conditions de perfusion répertoriées ci-dessous. Lieu seringue 1 sur la position avant de la pompe et des seringues 2 place sur la position arrière de la pompe. </li><li> Rejoignez chaque paire de solutions avec raccords en Y et les tubes de T22 CO-EX qui a été stérilisé. Placez les seringues sur une Harvard 33Pompe à deux seringues. </li><li> Changez le fond de la cage et enlevez tous les aliments de la grille du haut de la cage. </li><li> Pesez 150 g de norme chow et le placer sur la grille du haut de la cage. </li><li> Branchez les seringues à l&#39;émerillon sur le gril de la cage. Rincer les seringues correctement pour éliminer l&#39;air emprisonné dans les lignes. </li><li> Calculer les débits de perfusion en utilisant le poids du corps qui a été prise avant de connecter le rat dans le système de perfusion. Les taux sont calculés avec un fichier Microsoft Excel qui convertit le débit de perfusion de glucose (GIR) en ml / h. </li><li> Régler la pompe pour administrer des débits de 60 ml seringues selon les réglages du fabricant. Entrez le taux de seringue 1 (seringue avant) et le taux de seringue 2 (arrière seringue). </li><li> Démarrer la pompe. </li></ol> 4. Surveillance <ol><li> Après le démarrage de la pompe, vérifier qu&#39;il n&#39;y a pas de fuite de la rotule ou des canules et que le tube de perfusion n&#39;est pas tordu. Vérifiez également qu&#39;il n&#39;y a pas de bulles d&#39;airla tubulure. </li><li> Après 3 heures de perfusion, prélever un échantillon de sang pour contrôler la glycémie. Répétez après 6, 24, 48, et 72 heures de perfusion. Par mesure de précaution, la glycémie est également surveillée après 30, 34, 54, et 60 h de la perfusion. La glycémie peut être mesurée à l&#39;aide d&#39;une goutte de sang total à l&#39;aide d&#39;un moniteur de glucose portable. Cela limite la quantité de sang prélevé pendant la perfusion et évite donc modifier sensiblement le volume sanguin et / ou de l&#39;hématocrite. </li><li> Le taux de seringue 1 est modifiée en fonction des valeurs de glycémie à maintenir la glycémie à 220-250 mg / dl. Le taux de seringue 2 ne change pas au cours de la perfusion de 72 heures parce que les acides gras libres sont maintenus à 1 mmol / L. </li><li> conditions liées à la perfusion sont jumelés afin que le volume reçu pour les animaux témoins est équivalent au volume reçu pour les animaux de laboratoire (tableau 1). </li><li> Après 24 heures de perfusion, changer le fond de la cage et peser les aliments restant dans la grille de la cage. Retourner la partie non consommée to la grille de la cage. Répétez après 48 h. </li><li> seringues de recharge jour au besoin au cours de l&#39;heure 72 de la perfusion. </li><li> Au cours de la perfusion, toujours observer le rat pour détecter tout signe d&#39;inflammation ou d&#39;inconfort. Administrer les soins appropriés si nécessaire. </li></ol> 5. Euthanasie post-perfusion <ol><li class="jove_content"> Après 72 heures de perfusion, les rats sont anesthésiés par voie intraveineuse avec 0,5 ml d&#39;un cocktail kétamine / xylazine (182 mg / kg de kétamine et de 11,6 mg / kg de xylazine dilué 1:2 avec du NaCl à 0,9%). </li><li class="jove_content"> Le réflexe toe-pincement est utilisé pour vérifier le niveau de l&#39;anesthésie. Anesthésique est administré supplémentaires au besoin. </li><li class="jove_content"> Lorsque le rat est anesthésié, la cavité abdominale est ouverte avec des ciseaux chirurgicaux. Le rat est saigné par tirage de 10 à 15 ml de sang dans une seringue à partir de l&#39;aorte ou la veine cave. </li></ol>

<ol>
	<li>Poitout, V., Robertson, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucolipotoxicity:+fuel+excess+and+beta-cell+dysfunction.">Glucolipotoxicity: fuel excess and beta-cell dysfunction.</a> Endocr. Rev. 29, 351-366 (2008).</li><li>Poitout, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucolipotoxicity+of+the+pancreatic+beta+cell.">Glucolipotoxicity of the pancreatic beta cell.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1801, 289-298 (2010).</li><li>Unger, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minireview:+weapons+of+lean+body+mass+destruction:+the+role+of+ectopic+lipids+in+the+metabolic+syndrome.">Minireview: weapons of lean body mass destruction: the role of ectopic lipids in the metabolic syndrome.</a> Endocrinology. 144, 5159-5165 (2003).</li><li>Harmon, J. S., Gleason, C. E., Tanaka, Y., Poitout, V., Robertson, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antecedent+hyperglycemia,+not+hyperlipidemia,+is+associated+with+increased+islet+triacylglycerol+content+and+decreased+insulin+gene+mRNA+level+in+Zucker+diabetic+fatty+rats.">Antecedent hyperglycemia, not hyperlipidemia, is associated with increased islet triacylglycerol content and decreased insulin gene mRNA level in Zucker diabetic fatty rats.</a> Diabetes. 50, 2481-2486 (2001).</li><li>Bachar, E., Ariav, Y., Cerasi, E., Kaiser, N., Leibowitz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+nitric+oxide+synthase+protects+the+pancreatic+beta+cell+from+glucolipotoxicity-induced+endoplasmic+reticulum+stress+and+apoptosis.">Neuronal nitric oxide synthase protects the pancreatic beta cell from glucolipotoxicity-induced endoplasmic reticulum stress and apoptosis.</a> Diabetologia. 53, 2177-2187 (2010).</li><li>Peyot, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-cell+failure+in+diet-induced+obese+mice+stratified+according+to+body+weight+gain:+secretory+dysfunction+and+altered+islet+lipid+metabolism+without+steatosis+or+reduced+beta-cell+mass.">Beta-cell failure in diet-induced obese mice stratified according to body weight gain: secretory dysfunction and altered islet lipid metabolism without steatosis or reduced beta-cell mass.</a> Diabetes. 59, 2178-2187 (2010).</li><li>Hagman, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclical+and+alternating+infusions+of+glucose+and+intralipid+in+rats+inhibit+insulin+gene+expression+and+Pdx-1+binding+in+islets.">Cyclical and alternating infusions of glucose and intralipid in rats inhibit insulin gene expression and Pdx-1 binding in islets.</a> Diabetes. 57, 424-431 (2008).</li><li>Fontes, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucolipotoxicity+age-dependently+impairs+beta+cell+function+in+rats+despite+a+marked+increase+in+beta+cell+mass.">Glucolipotoxicity age-dependently impairs beta cell function in rats despite a marked increase in beta cell mass.</a> Diabetologia. 53, 2369-2379 (2010).</li><li>Stein, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essentiality+of+circulating+fatty+acids+for+glucose-stimulated+insulin+secretion+in+the+fasted+rat.">Essentiality of circulating fatty acids for glucose-stimulated insulin secretion in the fasted rat.</a> J. Clin. Invest. 97, 2728-2735 (1996).</li><li>Leahy, J. L., Cooper, H. E., Weir, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+insulin+secretion+associated+with+near+normoglycemia.+Study+in+normal+rats+with+96-h+in+vivo+glucose+infusions.">Impaired insulin secretion associated with near normoglycemia. Study in normal rats with 96-h in vivo glucose infusions.</a> Diabetes. 36, 459-464 (1987).</li><li>Hager, S. R., Jochen, A. L., Kalkhoff, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin+resistance+in+normal+rats+infused+with+glucose+for+72+h.">Insulin resistance in normal rats infused with glucose for 72 h.</a> The American Journal of Physiology. 260, 353-362 (1991).</li><li>Laybutt, D. R., Chisholm, D. J., Kraegen, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+adaptations+in+muscle+and+adipose+tissue+in+response+to+chronic+systemic+glucose+oversupply+in+rats.">Specific adaptations in muscle and adipose tissue in response to chronic systemic glucose oversupply in rats.</a> The American Journal of Physiology. 273, E1-E9 (1997).</li><li>Jonas, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+glucose+stimulates+early+response+gene+c-Myc+expression+in+rat+pancreatic+beta+cells.">High glucose stimulates early response gene c-Myc expression in rat pancreatic beta cells.</a> The Journal of Biological Chemistry. 276, 35375-35381 (2001).</li><li>Tang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose-induced+beta+cell+dysfunction+in+vivo+in+rats:+link+between+oxidative+stress+and+endoplasmic+reticulum+stress.">Glucose-induced beta cell dysfunction in vivo in rats: link between oxidative stress and endoplasmic reticulum stress.</a> Diabetologia. 55, 1366-1379 (2012).</li><li>Alonso, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+infusion+in+mice:+a+new+model+to+induce+beta-cell+replication.">Glucose infusion in mice: a new model to induce beta-cell replication.</a> Diabetes. 56, 1792-1801 (2007).</li><li>Magnan, C., Gilbert, M., Kahn, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+free+fatty+acid+infusion+in+rats+results+in+insulin+resistance+but+no+alteration+in+insulin-responsive+glucose+transporter+levels+in+skeletal+muscle.">Chronic free fatty acid infusion in rats results in insulin resistance but no alteration in insulin-responsive glucose transporter levels in skeletal muscle.</a> Lipids. 31, 1141-1149 (1996).</li><li>Goh, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid-induced+beta-cell+dysfunction+in+vivo+in+models+of+progressive+beta-cell+failure.">Lipid-induced beta-cell dysfunction in vivo in models of progressive beta-cell failure.</a> Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 292, 549-560 (2007).</li><li>Pascoe, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+fatty+acids+block+glucose-induced+beta-cell+proliferation+in+mice+by+inducing+cell+cycle+inhibitors+p16+and+p18.">Free fatty acids block glucose-induced beta-cell proliferation in mice by inducing cell cycle inhibitors p16 and p18.</a> Diabetes. 61, 632-641 (2012).</li><li>Bell, C. G., Walley, A. J., Froguel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+human+obesity.">The genetics of human obesity.</a> Nature Reviews. Genetics. 6, 221-234 (2005).</li><li>Fontes, G., Hagman, D. K., Latour, M. G., Semache, M., Poitout, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lack+of+preservation+of+insulin+gene+expression+by+a+glucagon-like+peptide+1+agonist+or+a+dipeptidyl+peptidase+4+inhibitor+in+an+in+vivo+model+of+glucolipotoxicity.">Lack of preservation of insulin gene expression by a glucagon-like peptide 1 agonist or a dipeptidyl peptidase 4 inhibitor in an in vivo model of glucolipotoxicity.</a> Diabetes Res. Clin. Pract. 87, 322-328 (2010).</li><li>Crawford, P. A., Schaffer, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+stress+in+the+myocardium:+Adaptations+of+gene+expression.">Metabolic stress in the myocardium: Adaptations of gene expression.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. , (2012).</li><li>Kewalramani, G., Bilan, P. J., Klip, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+insulin+resistance:+assault+by+lipids,+cytokines+and+local+macrophages.">Muscle insulin resistance: assault by lipids, cytokines and local macrophages.</a> Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab Care. 13, 382-390 (2010).</li><li>Cusi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+obesity+and+lipotoxicity+in+the+development+of+nonalcoholic+steatohepatitis:+pathophysiology+and+clinical+implications.">Role of obesity and lipotoxicity in the development of nonalcoholic steatohepatitis: pathophysiology and clinical implications.</a> Gastroenterology. 142, 711-725 (2012).</li></ol>

Vincent Poitout est co-fondateur de et a reçu des contrats de recherche de Bêtagenex Inc., une organisation de recherche sous contrat qui offre le modèle de perfusion présentée dans cet article comme un service commercial.

Bien qu&#39;un certain nombre d&#39;études antérieures ont employé des perfusions de glucose chroniques (par exemple 10-15) ou des lipides (par exemple 16,17) chez les rongeurs, à notre connaissance la perfusion combinée de ces deux carburants n&#39;a été signalée chez les souris 18. Le modèle de perfusion chronique présentée ici offre plusieurs avantages à étudier les effets sur les excès de nutriments sur une variété de fonctions biologiques chez les r...

Niveaux chroniquement élevés de glucose et de lipides dans la circulation ont été proposées pour contribuer à la pathogenèse du diabète de type 2 en modifiant la fonction de plusieurs organes impliqués dans le maintien de l&#39;homéostasie du glucose, y compris, mais sans s&#39;y limiter, le pancréas des cellules bêta (revue en 1). Les dépôts d&#39;hypothèse de glucotoxicité que l&#39;hyperglycémie chronique aggrave le défaut des cellules bêta qui a donné lieu à une hyperglycémie, en premier lieu, créant ainsi un cercle vicieux et de contribuer à la détérioration du contrôle de la glycémie chez 2 patients diabétiques de type. De même, l&#39;hypothèse de glucolipotoxicité propose que des élévations concomitantes de la glycémie et des lipides, comme souvent observées dans le diabète de type 2, sont préjudiciables à la cellule beta. Décrypter les mécanismes cellulaires et moléculaires des effets délétères de nutriments chroniquement élevés sur la fonction des cellules bêta du pancréas est la clé de la understanding de la pathogénie du diabète de type 2 1. À cette fin, un grand nombre d&#39;études ont examiné les mécanismes d&#39;excès de nutriments ex vivo chronique dans les îlots de Langerhans isolés ou in vitro dans des lignées de cellules sécrétrices d&#39;insuline clonales. Cependant, la traduction des résultats obtenus dans ces systèmes modèles pour l&#39;ensemble de l&#39;organisme est complexe, notamment parce que les concentrations d&#39;acides gras utilisés dans des cellules en culture ou îlots correspondent rarement les taux circulants dans le voisinage des cellules bêta in vivo 2. D&#39;autre part, les mécanismes de défaillance des cellules bêta en réponse à un excès de nutriments ont été examinés dans des modèles rongeurs de diabète, comme en témoigne le rat Zucker Diabetic Fatty 3,4, la gerbille Psammomys obesus 5 et le régime riche en gras- Fed souris 6. Ces modèles, cependant, sont caractérisées par des anomalies métaboliques intrinsèques et ne sont pas facilement prêter à des manipulations de glucose dans le sanget / ou les niveaux de lipides dans un cadre plus contrôlée et moins chronique. Pour être en mesure de modifier les taux circulants de nutriments dans un délai de jours chez les animaux normaux par ailleurs, nous avons développé un modèle de perfusion chronique chez les rats normaux qui nous permet d&#39;examiner les effets des lipides et du glucose, seul ou en combinaison, sur les paramètres et les fonctions physiologiques 7,8.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Saline 0.9%</td>
			<td>BD</td>
			<td>JB1324</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dextrose 70%</td>
			<td>McKesson</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Intralipid 20%</td>
			<td>Fresenius Kabi</td>
			<td>JB6023</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Metricide (Glutaraldehyde 2.6%)</td>
			<td>Metrex</td>
			<td>11-1401</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Heparin Sodium 10,000 USP u/ml</td>
			<td>PPC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Metacam</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Glycopyrrolate</td>
			<td>Sandoz</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Abbott</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Chlohexidine 2%</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Alcohol 70%</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Iodine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>PE-50</td>
			<td>BD</td>
			<td>427411</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>CO-EX T22</td>
			<td>Instech Solomon</td>
			<td>BCOEX-T22</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Connector 22G</td>
			<td>Instech Solomon</td>
			<td>SC22/15</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Swivel 22G</td>
			<td>Instech Solomon</td>
			<td>375/22PS</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Y-Connector 22G</td>
			<td>Instech Solomon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Counterbalance and arm</td>
			<td>Instech Solomon</td>
			<td>CM375BP</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>23 G blunted needles</td>
			<td>Instech Solomon</td>
			<td>LS23</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>23 G canulation pins</td>
			<td>Instech Solomon</td>
			<td>SP23/12</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Tethers (12 inch)</td>
			<td>Lomir</td>
			<td>RT12D</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Infusion jackets </td>
			<td>Lomir</td>
			<td>RJ01, RJ02, RJ03, RJ04</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>(SM-XL)</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Tether attachment piece</td>
			<td>Lomir</td>
			<td>RS T1</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>60 ml syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309653</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>1 ml syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309602</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

a model of chronic nutrient infusion in the rat

L&#39;exposition chronique à des niveaux excessifs de nutriments est postulé pour affecter le fonctionnement de plusieurs organes et de tissus et de contribuer au développement des nombreuses complications liées à l&#39;obésité et le syndrome métabolique, y compris le diabète de type 2. Pour étudier les mécanismes par lesquels des niveaux excessifs de glucose et d&#39;acides gras affectent le pancréas des cellules bêta et la sécrétion d&#39;insuline, nous avons établi un modèle de perfusion nutritive chronique chez le rat. La procédure consiste en la pose de cathéters la veine jugulaire droite et l&#39;artère carotide gauche sous anesthésie générale, qui permet une période de récupération de 7 jours, reliant les cathéters de pompes utilisant un pivot et un système de contrepoids qui permet à l&#39;animal de se déplacer librement dans la cage, et infusant glucose et / ou de l&#39;Intralipid (une émulsion d&#39;huile de soja qui génère un mélange d&#39;environ 80% unsaturated/20% d&#39;acides gras saturés quand infusé avec de l&#39;héparine) pendant 72 heures. Ce modèle offre plusieurs avanges, y compris la possibilité de moduler finement les niveaux cibles de glucose et d&#39;acides gras circulants, l&#39;option de co-insuffler composés pharmacologiques, et le laps de temps relativement court, par opposition aux modèles alimentaires. Il peut être utilisé pour examiner les mécanismes du dysfonctionnement des nutriments induite par une variété d&#39;organes et de tester l&#39;efficacité des médicaments dans ce contexte.

Sur une série de 42 rats qui ont subi une chirurgie, 5 rats ont été perdus au cours de la période post-opératoire et 1 rat ont été perdues pendant la perfusion, soit un taux de réussite global de 86%. Le poids corporel moyen des 37 rats qui ont finalement été infusés était de 608 ± 5 g avant la chirurgie et 588 ± 6 g au début de la perfusion (moyenne ± SE, n = 37, p &lt;0,0001 par test t apparié). Les résultats représentatifs suivants ont été obtenus en 2 groupes de perfusion:. Saline (SAL) et de gl...

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A Model of Chronic Nutrient Infusion in the Rat

Un protocole d&#39;infusions chroniques de glucose et Intralipide chez le rat est décrite. Ce modèle peut être utilisé pour étudier l&#39;impact de l&#39;excès de nutriments sur la fonction des organes et des paramètres physiologiques.

Un modèle d&#39;infusion de nutriments chronique chez le rat

Chronic exposure to excessive levels of nutrients is postulated to  affect the function of several organs and tissues and to contribute to the  ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

12.6K vues.  CRCHUM. Un protocole d'infusions chroniques de glucose et Intralipide chez le rat est décrite. Ce modèle peut être utilisé pour étudier l'impact de l'excès de nutriments sur la fonction des organes et des paramètres physiologiques.

Vidéo: A Model of Chronic Nutrient Infusion in the Rat

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant vasculopathy (TVP).
The commonly used animal model for cardiovascular chronic rejection studies is the heterotopic heart transplant model performed in laboratory rodents. This model is used widely in experiments since Ono and Lindsey (3) published their technique. To analyze the findings in the blood vessels, the heart has to be sectioned and all vessels have to be measured.
Another method to investigate chronic rejection in cardiovascular questionings is the aortic transplant model (1, 2). In the orthotopic aortic transplant model, the aorta can easily be histologically evaluated (2). The PVG-to-ACI model is especially useful for CAV studies, since acute vascular rejection is not a major confounding factor and Cyclosporin A (CsA) treatment does not prevent the development of CAV, similar to what we find in the clinical setting (4). A7-day period of CsA is required in this model to prevent acute rejection and to achieve long-term survival with the development of TVP.
This model can also be used to investigate acute cellular rejection and media necrosis in xenogeneic models (5).

This video demonstrates the orthotopic aortic transplant model as a simple model to study the development of transplant vasculopathy (TVP) in rats.

Orthotopique aortique transplantation: un modèle de rat pour étudier le développement de la vasculopathie chronique

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

Recherche

Médecine

Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized by increased urgency and frequency of urination, as well as nocturia and general pelvic pain, especially upon bladder filling or voiding. Despite years of research, the cause of IC/BPS remains elusive and treatment strategies are unable to provide complete relief to patients. In order to study nervous system contributions to the condition, many animal models have been developed to mimic the pain and symptoms associated with IC/BPS. One such murine model is urinary bladder distension (UBD). In this model, compressed air of a specific pressure is delivered to the bladder of a lightly anesthetized animal over a set period of time. Throughout the procedure, wires in the superior oblique abdominal muscles record electrical activity from the muscle. This activity is known as the visceromotor response (VMR) and is a reliable and reproducible measure of nociception. Here, we describe the steps necessary to perform this technique in mice including surgical manipulations, physiological recording, and data analysis. With the use of this model, the coordination between primary sensory neurons, spinal cord secondary afferents, and higher central nervous system areas involved in bladder pain can be unraveled. This basic science knowledge can then be clinically translated to treat patients suffering from IC/BPS.

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition characterized in part by pelvic pain. In order to study nervous system contributions to the condition, a physiological model of urinary bladder pain is used in mice and rats.

Réponses vessie distension évoqués viscéromotrice comme modèle pour douleur à la vessie chez la souris

Approximately 3-8 million people in the United States suffer from interstitial cystitis/bladder pain syndrome (IC/BPS), a debilitating condition ...

Slow-release Drug Delivery through Elvax 40W to the Rat Retina: Implications for the Treatment of Chronic Conditions

Diseases of the retina are difficult to treat as the retina lies deep within the eye. Invasive methods of drug delivery are often needed to treat these diseases. Chronic retinal diseases such as retinal oedema or neovascularization usually require multiple intraocular injections to effectively treat the condition. However, the risks associated with these injections increase with repeated delivery of the drug. Therefore, alternative delivery methods need to be established in order to minimize the risks of reinjection. Several other investigations have developed methods to deliver drugs over extended time, through materials capable of releasing chemicals slowly into the eye. In this investigation, we outline the use of Elvax 40W, a copolymer resin, to act as a vehicle for drug delivery to the adult rat retina. The resin is made and loaded with the drug. The drug-resin complex is then implanted into the vitreous cavity, where it will slowly release the drug over time. This method was tested using 2-amino-4-phosphonobutyrate (APB), a glutamate analogue that blocks the light response of the retina. It was demonstrated that the APB was slowly released from the resin, and was able to block the retinal response by 7 days after implantation. This indicates that slow-release drug delivery using this copolymer resin is effective for treating the retina, and could be used therapeutically with further testing.

This paper details how Elvax 40W can be used as a slow-release method for drug delivery to the adult rat retina. The protocol for preparing, loading, and delivering the drug-resin complex to the eye is described.

À libération lente Drug Delivery par Elvax 40W pour le Retina Rat: Implications pour le traitement des maladies chroniques

Diseases of the retina are difficult to treat as the retina lies deep within the eye. Invasive methods of drug delivery are often needed to treat these ...

Neurodegeneration in an Animal Model of Chronic Amyloid-beta Oligomer Infusion Is Counteracted by Antibody Treatment Infused with Osmotic Pumps

Decline in hippocampal-dependent explicit memory (memory for facts and events) is one of the earliest clinical symptom of Alzheimer&#39;s disease (AD). It is well established that synapse loss and ensuing neurodegeneration are the best predictors for memory impairments in AD. Latest studies have emphasized the neurotoxic role of soluble amyloid-beta oligomers (A&#946;o) that begin to accumulate in the human brain approximately 10 to 15 yr before the clinical symptoms become apparent. Many reports indicate that soluble A&#946;o correlate with memory deficits in AD models and humans. The A&#946;o-induced neurodegeneration observed in neuronal and brain slice cultures has been more challenging to reproduce in many animal models. The model of repeated A&#946;o infusions shown here overcome this issue and allow addressing two key domains for developing new disease modifying therapies: identify biological markers to diagnose early AD, and determine the molecular mechanisms underpinning A&#946;o-induced memory deficits at the onset of AD. Since soluble A&#946;o aggregate relatively fast into insoluble A&#946; fibrils that correlate poorly with the clinical state of patients, soluble A&#946;o are prepared freshly and injected once per day during six days to produce marked cell death in the hippocampus. We used cannula specially design for simultaneous infusions of A&#946;o and continuous infusion of A&#946;o antibody (6E10) in the hippocampus using osmotic pumps. This innovative in vivo method can now be used in preclinical studies to validate the efficiency of new AD therapies that might prevent the deposition and neurotoxicity of A&#946;o in pre-dementia patients.

To study the effects of A&#946;o in vivo, we developed a model based on repeated hippocampal infusions of soluble A&#946;o coupled with continuous infusion of A&#946;o antibody (6E10) in the hippocampus using osmotic pumps to counteract the neurotoxic effect of A&#946;o.

Neurodégénérescence dans un modèle animal de chronique bêta-amyloïde Oligomère Infusion est contrecarré par Antibody traitement Infused avec les pompes osmotiques

Decline in hippocampal-dependent explicit memory (memory for facts and events) is one of the earliest clinical symptom of Alzheimer&#39;s disease (AD). It ...

Use of a Central Venous Line for Fluids, Drugs and Nutrient Administration in a Mouse Model of Critical Illness

This protocol describes a centrally catheterized mouse model of prolonged critical illness. We combine the cecal ligation and puncture method to induce sepsis with the use of a central venous line for fluids, drugs and nutrient administration to mimic the human clinical setting. Critically ill patients require intensive medical support in order to survive. While the majority of patients will recover within a few days, about a quarter of the patients need prolonged intensive care and are at high risk of dying from non-resolving multiple organ failure. Furthermore, the prolonged phase of critical illness is hallmarked by profound muscle weakness, and endocrine and metabolic changes, of which the pathogenesis is currently incompletely understood. The most widely used animal model in critical care research is the cecal ligation and puncture model to induce sepsis. This is a very reproducible model, with acute inflammatory and hemodynamic changes similar to human sepsis, which is designed to study the acute phase of critical illness. However, this model is hallmarked by a high lethality, which is different from the clinical human situation, and is not developed to study the prolonged phase of critical illness. Therefore, we adapted the technique by placing a central venous catheter in the jugular vein allowing us to administer clinically relevant supportive care, to better mimic the human clinical situation of critical illness. This mouse model requires an extensive surgical procedure and daily intensive care of the animals, but it results in a relevant model of the acute and prolonged phase of critical illness.

This protocol describes a centrally catheterized mouse model of prolonged critical illness. We combine the cecal ligation and puncture method to induce sepsis with the use of a central venous line for fluids, drugs and nutrient administration to mimic the human clinical setting.

Utilisation d&#39;une ligne centrale pour les fluides veineuses, les drogues et l&#39;administration des nutriments dans un modèle de souris de maladies graves

This protocol describes a centrally catheterized mouse model of prolonged critical illness. We combine the cecal ligation and puncture method to induce ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Mesure de la contractilité isométrique de l’artère mésentérique de souris à l’aide de fil myographie

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

A New Best Practice for Validating Tail Vein Injections in Rat with Near-infrared-Labeled Agents

Intravenous (IV) administration of agents into the tail vein of rats can be both difficult and inconsistent. Optimizing tail vein injections is a key part of many experimental procedures where reagents need to be introduced directly into the bloodstream. Unwittingly, the injection can be subcutaneous, possibly altering the scientific outcomes. Utilizing a nanoemulsion-based biological probe with an incorporated near-infrared fluorescent (NIRF) dye, this method offers the capability of imaging a successful tail vein injection in vivo. With the use of a NIRF imager, images are taken before and after the injection of the agent. An acceptable IV injection is then qualitatively or quantitatively determined based on the intensity of the NIRF signal at the site of injection.

Here we present a method to validate tail vein injections in rats by utilizing near-infrared fluorescence imaging data from dyes incorporated into agents or biological probes. The tail is imaged before and after the injection, the fluorescent signal is quantified, and an assessment of the injection quality is made.

Une nouvelle pratique exemplaire pour la validation des Injections veine queue de Rat avec Agents proche-infrarouge-étiqueté

Intravenous (IV) administration of agents into the tail vein of rats can be both difficult and inconsistent. Optimizing tail vein injections is a key part ...

Acupuncture in a Rat Model of Asthma

A high platform can fix rats without restriction and completely expose the acupoints on the back during acupuncture manipulation. This article describes methods for the fabrication of the high platform, establishes a rat model of asthma and measures changes in respiratory function using a noninvasive and real-time whole-body plethysmography (WBP) system.

Acupuncture dans un modèle de rat de l’asthme

A high platform can fix rats without restriction and completely expose the acupoints on the back during acupuncture manipulation. This article describes ...

A Mouse Model for Chronic Pancreatitis via Bile Duct TNBS Infusion

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. Several rodent models have been developed to study CP, of which the bile duct 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS) infusion model replicates the features of neuropathic pain seen in CP. However, bile duct drug infusion in mice is technically challenging. This protocol demonstrates the procedure of bile duct TNBS infusion for generation of a CP mouse model. TNBS was infused into the pancreas through the ampulla of Vater in the duodenum. This protocol optimized drug volume, surgical techniques, and drug handling during the procedure. TNBS-treated mice showed features of CP as reflected by bodyweight and pancreas weight reductions, changes in pain-associated behaviors, and abnormal pancreatic morphology. With these improvements, mortality associated with TNBS injection was minimal. This procedure is not only critical in generating pancreatic disease models but is also useful in local pancreatic drug delivery.

Chronic pancreatitis (CP) is a disease characterized by inflammation and fibrosis of the pancreas, often associated with intractable abdominal pain. This article focuses on refining the technique to generate a mouse model of CP via bile duct infusion with 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS).

Un modèle murin pour la pancréatite chronique par perfusion de TNBS dans les voies biliaires

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. ...

Amélioration de la thérapie FSN dans le modèle du rat : minimiser l’inconfort et maximiser l’efficacité

Efficacy of Fu's Subcutaneous Needling on Sciatic Nerve Pain: Behavioral and Electrophysiological Changes in a Chronic Constriction Injury Rat Model

Fu&#39;s subcutaneous needling (FSN), an invented acupuncture technique from traditional Chinese medicine, is used worldwide for pain relief. However, the mechanisms of action are still not fully understood. During FSN treatment, the FSN needle is inserted and retained in the subcutaneous tissues for a long duration with a swaying movement. However, challenges arise from maintaining a posture while manipulating FSN in animal models (e.g., rats) for researchers. Uncomfortable treatment can lead to fear and resistance to FSN needles, increasing the risk of injury and may even affect research data. Anesthesia may also affect the study results too. Hence, there is a need for strategies in FSN therapy on animals that minimize injury during the intervention. This study employs a chronic constriction injury model in Sprague-Dawley rats to induce neuropathic pain. This model replicates the pain induced by nerve injury observed in humans through surgical constriction of a peripheral nerve, mimicking the compression or entrapment seen in conditions such as nerve compression syndromes and peripheral neuropathies. We introduce an appropriate manipulation for easily inserting an FSN needle into the subcutaneous layer of the animal&#39;s body, including needle insertion and direction, needle retention, and swaying movement. Minimizing the rat&#39;s discomfort prevents the rat from being tense, which causes the muscle to contract and hinder the entry of the needle and improves the study efficiency.

Pleins feux sur l’auteur : Dévoilement des effets thérapeutiques du traitement par FSN – Lien entre la recherche et les applications cliniques dans le traitement de la douleur neuropathique

We present a protocol for using Fu's subcutaneous needling in a chronic constriction injury model to induce sciatic nerve pain in rats.

Efficacité de l’aiguilletage sous-cutané de Fu sur la douleur du nerf sciatique : changements comportementaux et électrophysiologiques dans un modèle de rat de constriction chronique

Fu&#39;s subcutaneous needling (FSN), an invented acupuncture technique from traditional Chinese medicine, is used worldwide for pain relief. However, the ...