Un merci spécial à Sarah Kossak, Mitchell Guanzon, Sung Yeun Yang et Li Guo Jia, pour leur collaboration lors de l&#39;évaluation endoscopique de leurs animaux de laboratoire.

Une. Mise en place du système d&#39;endoscopie <ol><li> Mettre en place le système d&#39;endoscopie avant d&#39;anesthésier les souris, en suivant les instructions du fabricant. Utilisez une urétéroscope vidéo conçu pour les humains de ce protocole (Figure 1). Le diamètre externe du tube d&#39;insertion est de 9,9 Fr (3,3 mm), son extrémité distale est de 8,5 Fr (2,8 mm), et le diamètre intérieur du canal d&#39;instrumentation est 6 Fr (1,2 mm). </li><li> Bien que l&#39;utilisation d&#39;endoscopes n&#39;ont pas été liée à la transmission de la maladie [9], stériliser l&#39;endoscope et de la lentille avec 70% d&#39;éthanol ou 10 par des techniques appropriées lorsque l&#39;on travaille avec des micro-organismes formant des spores. Préparer lubrifiant bactériostatique et non-grattage essuyer tissus pour saturer le bout de l&#39;endoscope. </li><li> Attacher une seringue de 3 ml remplie d&#39;air (ou d&#39;un mélange de gaz approprié de CO 2) à la partie supérieure du canal d&#39;instrumentation. </li><li> Tournez sur la puissance, et mettre en place la balance des blancs dans la lumière blanche normale,ainsi que le mode étroit imagerie de bande (NBI), le cas échéant. Depuis 2001, le PNB a procuré des avantages de l&#39;imagerie diagnostique comme il met l&#39;accent sur ​​les structures fines des vaisseaux sanguins sur les muqueuses, y compris les lésions ulcéreuses et tumorales, qui ont une vascularisation anormale caractéristique 11. Mode NBI-filtre limite la longueur d&#39;onde de la lumière capturée à 390-445 nm et 530-550 nm, qui met en évidence les structures avec l&#39;hémoglobine. </li><li> Imprimer le formulaire d&#39;évaluation de notation (figure 2) pour enregistrer vos résultats. Se familiariser avec les images normales et attendues de l&#39;IBN (figure 3A) et la définition et les qualités de chaque critère avant l&#39;examen (voir la section 6.1). </li><li> Préparer une solution à base de colorant sur le tampon phosphate salin (PBS) pour chromoendo, si on le souhaite. En chromoendoscopie, l&#39;examen est effectué en utilisant un colorant comme agent de contraste pour mettre en évidence les modifications de la muqueuse. Utilisez le bleu de méthylène (0,1-1%) et de l&#39;indigo carmin (0,1%) solutions (figure 3B). Remarqueque le bleu de méthylène est un agent d&#39;oxydo-réduction qui peut produire des radicaux oxydants, la reticulation indirect de résidus d&#39;acides aminés, et la dégradation de l&#39;ADN 12, ce qui pourrait interférer avec l&#39;analyse de l&#39;échantillon. </li></ol> 2. Anesthésie générale de la souris <ol><li> Choisissez l&#39;agent et la voie d&#39;administration anesthésique. Consulter un vétérinaire à partir d&#39;un centre de ressources animales de soins et d&#39;utilisation des animaux institutionnel Comité (IACUC) concernant les interférences potentielles des médicaments avec le système immunitaire et les objectifs de recherche. Certains médicaments peuvent influencer le profil de l&#39;expression des cytokines chez les animaux, y compris les rongeurs 13. Utilisez tribromoéthanol injectable pour les procédures de terminal ou l&#39;isoflurane pour les endoscopies de survie, avec des contrôles appropriés. </li><li> Pour l&#39;induction, administrer 4-5% d&#39;isoflurane dans 100% d&#39;oxygène à un taux de 0,2-0,5 L / min; utiliser 0,5-2% pour l&#39;entretien. Ce protocole n&#39;est pas approprié pour tous les animaux. Consultez votre établissement vétérinairepour les instructions et la formation nécessaires. Respecter les recommandations pertinentes du IACUC pour atteindre les plus hautes normes de bien-être animal. Assurez-vous que la souris si totalement anesthésiée. </li><li> «Strap» La souris anesthésiée à une table de surface de support dans une dorsale ou ventrale en utilisant du ruban adhésif de laboratoire. Méfiez-vous de l&#39;orientation anatomique sur l&#39;écran de votre endoscope. Fixer ses membres inférieurs et la queue. Une bande de bande peut également être placé sur la poitrine pour empêcher le mouvement loin de l&#39;appareil respiratoire, mais éviter de restreindre les mouvements ventilatoires thoraciques. </li></ol> 3. Examen détaillé endoscopique <ol><li> Rechercher des lésions péri-anales avant d&#39;insérer l&#39;endoscope dans le rectum, puis avancez le champ par l&#39;anus. </li><li> Manteau de l&#39;endoscope avec un lubrifiant chirurgical stérile. Veillez à ne pas recouvrir la surface de la CCD (dispositif à couplage de charge) capteur. </li><li> Insérez l&#39;endoscope et commencer l&#39;enregistrement. Les vidéos enregistrées sont utiles pour mévaluation eticulous de l&#39;endoscopie si nécessaire après l&#39;examen. Essayez d&#39;effectuer la endoscopie dans la longueur moins de temps possible pour minimiser l&#39;irritation intestinale / muqueuse. </li><li> Appliquer de l&#39;air à l&#39;aide d&#39;une seringue à mettre lentement en dehors de la paroi intestinale. Selon la taille de la souris, en utilisant 1 à 2 ml d&#39;air. Évitez excessive insufflation d&#39;air, il peut causer de la détresse respiratoire et la mort de la souris anesthésiée. </li><li> Faire progresser l&#39;endoscope avant que vous ne videz pas la façon avec de l&#39;air ou une légère rotation de la portée. Ne pas avancer l&#39;endoscope si vous ne voyez pas la lumière intestinale. Perforations ou rectales / côlon larmes peuvent se produire à ce stade, en particulier chez les jeunes souris (&lt;8-10 semaines). Prenez des photos si nécessaire. </li><li> Comme la portée avance, évaluer s&#39;il ya saignements spontanés (définie comme l&#39;état naturel des muqueuses hémorragie pas associée à l&#39;endoscopie traumatique). Saignements spontanés peut être observé comme l&#39;endoscope entre le rectum et le côlon. </li><li> CommeSess la transparence de la paroi colique. La transparence est définie comme étant la capacité de visualiser les vaisseaux sanguins intra-muros dans le colon et que d&#39;autres viscères environnants (figure 4). Mouvement doux de la portée (arrière-avant, droite, à gauche) vous aidera à déterminer si les vaisseaux sanguins peuvent être vus dans le contexte d&#39;autres viscères. Tissu adipeux mésentérique peut également être considérée. Notez que si le rectum à l&#39;intérieur de la cavité pelvienne apparaît moins transparente que la paroi du côlon dans la cavité abdominale. </li><li> Inspecter pour déterminer le type et le nombre de lésions focales (zones oedémateux, des érosions, des ulcères, des masses tumorales). Ce sera enregistrée sous forme de notation à l&#39;aide du score d&#39;inflammation du côlon et les identificateurs décimaux qui ont été développés. </li><li> Une fois la zone où le colon fléchit caudale dans le côlon proximal est atteinte, retirer l&#39;endoscope lentement et rechercher la présence de saignements de contact (qui se produit en raison de la friabilité des muqueuses après laendoscope est avancé ou retiré). Il n&#39;est pas nécessaire de gratter la surface du colon intentionnellement. Muqueuse colorectale saine ne saigne pas après examen endoscopique approprié. </li></ol> 4. Biopsie <ol><li> Lorsque biopsies sont nécessaires, insérer la pince à biopsie à travers le canal de l&#39;endoscope dédiée pour l&#39;instrumentation. Surveillance de l&#39;avancement de la pince sur l&#39;écran de l&#39;endoscope pour éviter une perforation intestinale. </li><li> Ouvrez les coupes de biopsie de la pince à environ un angle de 60-80 ° tasse à café, et les diriger vers la zone d&#39;intérêt. Une pince ou d&#39;une pression excessive ouverts peuvent comprendre des couches supplémentaires de tissu intestinal, ce qui se traduit par une perforation induite par biopsie des parois intestinales transparentes sains. Si la perforation se produit, euthanasier l&#39;animal pendant l&#39;anesthésie suivant vos recommandations IACUC. Les perforations se traduisent par une endotoxémie et d&#39;une péritonite. </li><li> Fermez les coupes de biopsie, et de les sortir tout en gardant les pinces fermées. </li><li> Remove de l&#39;échantillon à partir de la pince en rinçant le tissu avec une solution qui est doux pour le tissu et la pince. ARN tard et PBS sont des solutions de travail communes, si nécessaire, utiliser l&#39;aiguille pour déloger l&#39;échantillon. Éviter d&#39;éroder les tasses de pince ou arêtes de coupe. </li></ol> 5. Récupération de l&#39;anesthésie <ol><li> À l&#39;issue de l&#39;examen, un environnement chaud à la souris jusqu&#39;à ce qu&#39;il récupère. Utilisez soit une lampe électrique, ou un tampon chaud réglé à 37 ° C. Éviter la surchauffe; vasodilatation périphérique compromet récupération d&#39;animaux. Surveillance de la souris près jusqu&#39;à guérison complète. </li></ol> 6. Scoring System endoscopique intégré de santé colorectal avec décimales identificateurs <ol><li> Utilisez le formulaire de notation (figure 2) et les définitions de paramètres ci-dessous (évaluation endoscopique de murins colorectal inflammation et les tumeurs en utilisant un système décimal pondéré de notation: Définitions des paramètres, et le Protocole) pourexemples et la «distal-proximal endoscopique colite système de notation» en option (D-PECS) que des lignes directrices pour l&#39;évaluation non biaisée et la tenue de registres détaillés. </li><li> Note les quatre paramètres de l&#39;inflammation colorectal décrits sur le formulaire de système de notation (figure 2). Évaluer soigneusement la région péri-anale, la transparence intestinale, le type de saignement intestinal (le cas échéant), et la présence et la quantité de lésions focales (érosive, hémorragique et / ou tumorale). </li><li> Lors de l&#39;évaluation des tumeurs à des fins de recherche, d&#39;examiner la quantité, l&#39;emplacement et la taille, et les décrire à l&#39;aide de la carte du côlon et graphique à barres sur le formulaire de notation. La somme numérique des scores obtenus et le nombre de lésions (le cas échéant) afin de déterminer l&#39;arrière-plan inflammation du côlon, du type de lésion le plus prédominant, et le nombre de lésions. </li></ol>

<ol>
	<li>Huang, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colonoscopy+in+mice.">Colonoscopy in mice.</a> Surg. Endosc. 16, 22-24 (2002).</li><li>Wirtz, S., Becker, C., Blumberg, R., Galle, P. R., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+T+cell-dependent+experimental+colitis+in+SCID+mice+by+local+administration+of+an+adenovirus+expressing+IL-18+antisense+mRNA.">Treatment of T cell-dependent experimental colitis in SCID mice by local administration of an adenovirus expressing IL-18 antisense mRNA.</a> J. Immunol. 168, 411-420 (2002).</li><li>Funovics, M. A., Alencar, H., Su, H. 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Protoc. 1, 2900-2904 (2006).</li><li>Hensley, H. H., Merkel, C. E., Chang, W. C., Devarajan, K., Cooper, H. S., Clapper, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoscopic+imaging+and+size+estimation+of+colorectal+adenomas+in+the+multiple+intestinal+neoplasia+mouse.">Endoscopic imaging and size estimation of colorectal adenomas in the multiple intestinal neoplasia mouse.</a> Gastrointest. Endosc. 69, 742-749 (2009).</li><li>Banerjee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+control+during+GI+endoscopy.">Infection control during GI endoscopy.</a> Gastrointest. Endosc. 67, 781-790 (2008).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleaning+and+disinfection+of+equipment+for+gastrointestinal+endoscopy.+Report+of+a+Working.">Cleaning and disinfection of equipment for gastrointestinal endoscopy. Report of a Working.</a> Party of the British Society of Gastroenterology Endoscopy Committee. Gut. 42, 585-593 (1998).</li><li>Sano, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+diagnostic+method+based+on+color+imaging+using+narrow+band+imaging+(NBI)+system+for+gastrointestinal+tract.">New diagnostic method based on color imaging using narrow band imaging (NBI) system for gastrointestinal tract.</a> Gastrointest. Endosc. 53, 125-12 (2001).</li><li>Davies, J., Burke, D., Olliver, J. R., Hardie, L. J., Wild, C. P., Routledge, M. 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E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+digital+flexible+ureteroscope:+in+vitro+assessment+of+optical+characteristics.">The digital flexible ureteroscope: in vitro assessment of optical characteristics.</a> J. Endourol. 25, 519-522 (2011).</li><li>Machida, H., Sano, Y., Hamamoto, Y., Muto, M., Kozu, T., Tajiri, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Narrow-band+imaging+in+the+diagnosis+of+colorectal+mucosal+lesions:+a+pilot+study.">Narrow-band imaging in the diagnosis of colorectal mucosal lesions: a pilot study.</a> Endoscopy. 36, 1094-1098 (2004).</li><li>Dohoo, I., Martin, W., Stryhn, H., McPike, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cohort+studies.">Cohort studies.</a> Veterinary Epidemiologic Research. , 151-162 (2003).</li><li>Yiou, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathophysiology+of+pelvic+floor+disorders:+evidence+from+a+histomorphologic+study+of+the+perineum+and+a+mouse+model+of+rectal+prolapse.">The pathophysiology of pelvic floor disorders: evidence from a histomorphologic study of the perineum and a mouse model of rectal prolapse.</a> J. Anat. 199, 599-607 (2001).</li></ol>

Aucune financière ou de conflit d&#39;intérêts divulgués.

Il ya plusieurs considérations concernant la modification et la réparation de la technique endoscopique chez la souris. Aspects critiques de la procédure qui doivent être maîtrisées lors de l&#39;utilisation de l&#39;endoscopie souple comprennent l&#39;ajustement du volume d&#39;air nécessaire pour éviter une distension abdominale et de troubles respiratoires de la souris, et les aspects techniques mineures de vue contrôle de la coordination des contrôles d&#39;angulation et de couple . Le contrôle de couple ...

Endoscopie murin a été réalisée comme un outil de recherche utile pour plus d&#39;une décennie 1-3. À ce jour, la plupart des études utilisant l&#39;endoscopie murin ont utilisé les endoscopes rigides, même si certains ont également utilisé la sigmoïdoscopie flexible. Endoscopie murin fournit des résultats immédiats et une estimation plus objective de la mesure de la normalité intestinale, la sévérité de l&#39;inflammation, et la progression de la tumeur par rapport à des mesures indirectes, comme la perte de poids, diarrhée, et l&#39;histologie (qui n&#39;est pas optimale lorsque les lésions sont inégaux), tandis que offrant un aperçu sur l&#39;état de santé général du côlon. Plus particulièrement, l&#39;endoscopie permet d&#39;évaluer répétée de modèles d&#39;animaux de laboratoire au fil du temps, par opposition à l&#39;examen histologique traditionnelle qui exige que l&#39;animal soit euthanasié et colons à être récoltées pour l&#39;analyse 1. Malgré ces avantages, l&#39;utilisation de la technologie endoscopique murin n&#39;a pas été répandu et est limitée par le manque de protocoles normalisés pour implementatisur et la notation des résultats pathologiques. Correctement mis en œuvre, l&#39;endoscopie murin est très prometteuse pour faciliter notre compréhension et la caractérisation de modèles animaux de plusieurs états de maladies gastro-intestinales chroniques, notamment les maladies inflammatoires de l&#39;intestin, colite, et les tumeurs colorectales. L&#39;utilité de la technologie endoscopique murin repose sur sa reproductibilité et l&#39;objectivité, ce qui nécessite l&#39;existence de procédures d&#39;examen normalisés et un système de notation cohérente, non redondante et fiable pour les pathologies intestinales. Au moins trois systèmes de notation pour l&#39;évaluation endoscopique descriptives de la colite 4-6, ainsi que pour les tumeurs du colon chez les souris 4,7,8 ont été publiées. Cependant, ces approches déclarés et les systèmes de notation ne sont pas facilement comparables entre les études. Dans de nombreux cas, il n&#39;existe pas de définition claire des critères utilisés pour la classification des lésions, et lorsque les critères sont donnés, ils sont très variables. De plus,il n&#39;existe aucun système de notation signalés qui intègrent l&#39;évaluation à la fois la colite et les tumeurs, deux pathologies coliques les plus courants qui peuvent se produire simultanément et avoir des effets interactifs sur le résultat, dans un outil de mesure unique. Enfin, les systèmes de notation endoscopiques qui n&#39;existent pour la colite ont souvent catégories inflammatoires de la discrimination limitée (c.-à-. D&#39;options étroites de notation sur des échelles entières courtes, souvent 1-4) pour représenter correctement la maladie scénarios de progression et permettre l&#39;utilisation de l&#39;analyse statistique paramétrique. Dans ce document, nous décrivons l&#39;utilisation d&#39;un endoscope flexible pour évaluer la sévérité de la colite murine et les tumeurs du côlon et de décrire un protocole standardisé pour l&#39;emploi de cette technologie dans l&#39;évaluation anatomique de la région péri-anale, du rectum et du côlon distal. Nous illustrons dépannage efficace pendant l&#39;endoscopie pour minimiser les traumatismes et les artefacts d&#39;image, et nous décrivons un système de notation reproductiblebasée sur des paramètres cliniques publiées validés. Le système de notation intègre l&#39;évaluation de l&#39;inflammation intestinale et les tumeurs en utilisant un niveau élevé de discrimination avec 12 niveaux possibles de la cartographie de l&#39;inflammation, tumeur et des options de tracé, et un nouveau système de l&#39;unité décimale (c&#39;est à dire, les identificateurs décimaux) pour mettre en évidence les résultats avec une valeur diagnostique spécifique ( le développement de tumeurs à savoir, les complications au cours de l&#39;endoscopie, etc.) L&#39;utilisation d&#39;identificateurs décimaux permet un suivi rapide des ensembles de données pertinents pour une analyse ultérieure en aval. Enfin, nous effectuons essais de fiabilité et de validité du système de notation dans plusieurs modèles murins de colite et cancer de la colite associée (sulfate de dextran sodium (DSS) induite par la colite, infection à Clostridium difficile, et azoxyméthane / induite par DSS-cancer du côlon).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="696">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Isoflurane, USP</td>
			<td style="width:160px;">Webster Veterinary&#160;</td>
			<td style="width:217px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:240px;">Surgical lubricant</td>
			<td style="width:160px;">Savage laboratories</td>
			<td style="width:217px;">surgilube, 0281-0205-45</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:240px;">Phosphate Buffered Saline</td>
			<td style="width:160px;">Thermo Scientific&#160;</td>
			<td style="width:217px;">SH30256</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:240px;">RNAlater</td>
			<td style="width:160px;">Ambion</td>
			<td style="width:217px;">AM7021</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:240px;">Methylene Blue 1% Aqueous Solution</td>
			<td style="width:160px;">Fisher Science Education</td>
			<td style="width:217px;">S96393</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:240px;"></td>
			<td style="width:160px;"></td>
			<td style="width:217px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Flexible digital ureteroscope</td>
			<td style="width:160px;">Olympus America</td>
			<td style="width:217px;">URF-V</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Video system center</td>
			<td style="width:160px;">Olympus America</td>
			<td style="width:217px;">VISERA Pro OTV-S7 Pro</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Xenon light source</td>
			<td style="width:160px;">Olympus America</td>
			<td style="width:217px;">VISERA Pro CLV-S40 Pro</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Video recorder</td>
			<td style="width:160px;">MediCapture, Inc.</td>
			<td style="width:217px;">MediCap USB200</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Flexible biopsy cup forceps</td>
			<td style="width:160px;">Olympus America</td>
			<td style="width:217px;">FBC-3115</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Anesthesia machine</td>
			<td style="width:160px;">Euthanex Corporation</td>
			<td style="width:217px;">EZ-7000 Classic System</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

flexible colonoscopy in mice to evaluate the severity of colitis and colorectal tumors using a validated endoscopic scoring system

L&#39;utilisation de l&#39;endoscopie moderne à des fins de recherche a grandement facilité notre compréhension des pathologies gastro-intestinales. En particulier, l&#39;endoscopie expérimental a été très utile pour des études qui nécessitent des évaluations répétées sur un seul animal de laboratoire, tels que ceux évaluer les mécanismes de la maladie intestinale inflammatoire chronique et la progression du cancer colorectal. Cependant, les méthodes utilisées dans les études sont très variables. Au moins trois systèmes de notation endoscopiques ont été publiées pour la colite murine et publié protocoles pour l&#39;évaluation des tumeurs colorectales ne parviennent pas à répondre à la présence d&#39;une inflammation du côlon concomitante. Cette étude développe et valide un système de notation endoscopique reproductible qui intègre en même temps une évaluation de l&#39;inflammation et des tumeurs. Ce nouveau système de notation comporte trois grands volets: 1) l&#39;évaluation de l&#39;étendue et de la gravité de l&#39;inflammation du côlon (basé sur les résultats périanales, la transparence de l&#39;wall, des saignements des muqueuses et des lésions focales), 2) l&#39;enregistrement quantitative des lésions tumorales (de la carte de la grille et graphique à barres), et 3) tri numérique de cas cliniques par leur pertinence pathologique et de la recherche en fonction des unités décimales avec les catégories affectées de lésions observées et complications endoscopiques (identifiants décimales). La vidéo et le manuscrit présenté ici ont été préparés suivant des protocoles IACUC approuvés, pour permettre aux enquêteurs de marquer leurs propres souris expérimentales en utilisant une méthode endoscopique bien validé et hautement reproductible, avec l&#39;option de système de différencier distale de la colite endoscopique proximale (D-PECS ).

Le protocole et les images présentées dans cette étude ont été préparés avec un endoscope souple Olympus URF-V 14 et PNB 11,15. Les images vidéo ont été enregistrés dans le format MPEG-2 et des images au format JPG, TIF, PNG, ou format DICOM avec un maximum de 1280 x 1024 pixels, transférables à des mémoires portables USB flash standard. Le PNB augmente le contraste visuel des tissus contenant de l&#39;hémoglobine. Lumière normale et imagerie PNB sont des éléments clés pour illus...

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Flexible Colonoscopy in Mice to Evaluate the Severity of Colitis and Colorectal Tumors Using a Validated Endoscopic Scoring System

Au cours des dernières années, de nouveaux endoscopes génération ont émergé comme aides à la recherche de diagnostic importants pour évaluer la colite murine et les tumeurs colorectales. Nous présentons ici un protocole détaillé pour l&#39;évaluation endoscopique de tumeurs colorectales et inflammation chez des souris, ainsi que d&#39;un système de pointage roman qui utilise des identificateurs décimaux pour documenter la sévérité de la colite endoscopique et tumeurs colorectales.

La coloscopie flexible chez la souris pour évaluer la sévérité de la colite et de tumeurs colorectales l&#39;aide d&#39;un système validé endoscopique de notation

The use of modern endoscopy for research purposes has greatly facilitated our understanding of gastrointestinal pathologies. In particular, experimental ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

31.5K vues.  Case Western Reserve University School of Medicine, Cleveland.  Au cours des dernières années, de nouveaux endoscopes génération ont émergé comme aides à la recherche de diagnostic importants pour évaluer la colite murine et les tumeurs colorectales. Nous présentons ici un protocole détaillé pour l'évaluation endoscopique de tumeurs colorectales et inflammation chez des souris, ainsi que d'un système de pointage roman qui utilise des identificateurs décimaux pour documenter la sévérité de la colite endoscopiq...

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Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited time. These cultured tumorspheres may exhibit markedly different cellular phenotypes when compared to the original tumors. Demonstration that cultured cells have the capability of forming new tumors is important to ensure that cultured cells model the biology of the original tumor. 
Here we present a protocol for propagating human retinoblastoma tumors in vivo using Rag2-/- immune deficient mice. Cultured human retinoblastoma tumorspheres of low passage or cells obtained from freshly harvested human retinoblastoma tumors injected directly into the vitreous cavity of murine eyes form tumors within 2-4 weeks. These tumors can be harvested and either further passaged into murine eyes in vivo or grown as tumorspheres in vitro. Propagation has been successfully carried out for at least three passages thus establishing a continuing source of human retinoblastoma tissue for further experimentation. 
Wesley S. Bond and Lalita Wadhwa are co-first authors.

A method is described to propagate human retinoblastoma tumors in mice. Tumor cells are directly injected into the eyes of immune deficient mice. Secondary tumors have been successfully established using both cells directly harvested from human tumors and cultured tumorspheres.

Création et propagation des tumeurs de l&#39;homme en rétinoblastome immunitaire chez les souris déficientes

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

Recherche

Médecine

Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several techniques, including infusion of exogenous bacterial toxin (endotoxemia) or bacteria (bacteremia), as well as surgical perforation of the cecum by cecal ligation and puncture (CLP)1-3. CLP allows bacteria spillage and fecal contamination of the peritoneal cavity, mimicking the human clinical disease of perforated appendicitis or diverticulitis. The severity of sepsis, as reflected by the eventual mortality rates, can be controlled surgically by varying the size of the needle used for cecal puncture2. In animals, CLP induces similar, biphasic hemodynamic cardiovascular, metabolic, and immunological responses as observed during the clinical course of human sepsis3. Thus, the CLP model is considered as one of the most clinically relevant models for experimental sepsis1-3.
Various animal models have been used to elucidate the intricate mechanisms underlying the pathogenesis of experimental sepsis. The lethal consequence of sepsis is attributable partly to an excessive accumulation of early cytokines (such as TNF, IL-1 and IFN-&gamma;)4-6 and late proinflammatory mediators (e.g., HMGB1)7. Compared with early proinflammatory cytokines, late-acting mediators have a wider therapeutic window for clinical applications. For instance, delayed administration of HMGB1-neutralizing antibodies beginning 24 hours after CLP, still rescued mice from lethality8,9, establishing HMGB1 as a late mediator of lethal sepsis. The discovery of HMGB1 as a late-acting mediator has initiated a new field of investigation for the development of sepsis therapies using Traditional Chinese Herbal Medicine. In this paper, we describe a procedure of CLP-induced sepsis, and its usage in screening herbal medicine for HMGB1-targeting therapies.

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection, and can be simulated by a surgical technique termed cecal ligation and puncture (CLP). Here we describe a method to use CLP-induced animal model to screen medicinal herbs for therapeutic agents.

L&#39;utilisation de modèle animal de sepsis pour évaluer de nouvelles thérapies à base de plantes

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

Non-invasive Assessment of the Efficacy of New Therapeutics for Intestinal Pathologies Using Serial Endoscopic Imaging of Live Mice

Animal models of inflammatory bowel disease (IBD) and colorectal cancer (CRC) have provided significant insight into the cell intrinsic and extrinsic mechanisms that contribute to the onset and progression of intestinal diseases. The identification of new molecules that promote these pathologies has led to a flurry of activity focused on the development of potential new therapies to inhibit their function. As a result, various pre-clinical mouse models with an intact immune system and stromal microenvironment are now heavily used. Here we describe three experimental protocols to test the efficacy of new therapeutics in pre-clinical models of (1) acute mucosal damage, (2) chronic colitis and/or colitis-associated colon cancer, and (3) sporadic colorectal cancer. We also outline procedures for serial endoscopic examination that can be used to document the therapeutic response of an individual tumor and to monitor the health of individual mice. These protocols provide complementary experimental platforms to test the effectiveness of therapeutic compounds shown to be well tolerated by mice.

We describe methods for longitudinal monitoring of the efficacy of therapeutics for the treatment of colonic pathologies in mice using a rigid endoscope. This protocol can be readily used for the characterization of the therapeutic response of an individual tumor in live mice and also for monitoring potential disease relapse.

Évaluation non invasive de l&#39;efficacité de nouveaux traitements pour les pathologies intestinales en utilisant l&#39;imagerie endoscopique de série de souris vivantes

Animal models of inflammatory bowel disease (IBD) and colorectal cancer (CRC) have provided significant insight into the cell intrinsic and extrinsic ...

Dry Powder and Nebulized Aerosol Inhalation of Pharmaceuticals Delivered to Mice Using a Nose-only Exposure System

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and bronchodilator drugs. Despite the availability of multiple treatments, both diseases are growing public health concerns. The majority of asthma patients are well controlled on current inhaled therapies but a substantial number of patients with severe asthma are not. Asthma affects an estimated 300 million people worldwide and approximately 20 percent have a severe form of the disease. In contrast to asthma, there are few effective therapies for COPD. An estimated 10% of the population has COPD and the trend in death rates is increasing for COPD while decreasing for other major diseases. Although developing drugs for inhaled delivery is challenging, the nose-only inhalation unit enables direct delivery of novel drugs to the lung of rodents for pre-clinical efficacy and safety/toxicology studies. Inhaled drug delivery has multiple advantages for respiratory diseases, where high concentration in the lung improves efficacy and minimizes systemic side effects. Inhaled corticosteroids and bronchodilators benefit from these advantages and inhaled delivery may also hold potential for future biologic therapies. The inhalation unit described herein can generate, sample for characterization, and uniformly deposit a drug aerosol in the lungs of rodents. This enables the pre-clinical determination of the efficacy and safety of drug doses deposited in the lungs of rodents, key data required before initiating clinical development.

The inhalation unit described herein can generate, sample for characterization, and uniformly deposit a drug aerosol in the lungs of rodents. This enables the pre-clinical determination of the efficacy and safety of drug doses deposited in the lungs; key data enabling clinical inhaled drug development.

Poudre sèche et aérosol nébulisée L&#39;inhalation de produits pharmaceutiques à des souris Livrés L&#39;utilisation d&#39;un nez seul système d&#39;exposition

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and ...

Taste Exam: A Brief and Validated Test

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement classic taste-testing methods in two ways. First, we explain how to do a brief assessment of the mouth, including the tongue, to ensure that taste papillae are present and to note evidence of relevant disease. Second, we draw on genetics to validate taste test data by comparing reports of perceived bitterness intensity and inborn receptor genotypes. Discordance between objective measures of genotype and subjective reports of taste experience can identify data collection errors, distracted subjects or those who have not understood or followed instructions. Our expectation is that fast and valid taste tests may persuade researchers and clinicians to assess taste regularly, making taste testing as common as testing for hearing and vision. Finally, because many tissues of the body express taste receptors, taste responses may provide a proxy for tissue sensitivity elsewhere in the body and, thereby, serve as a rapid, point-of-care test to guide diagnosis and a research tool to evaluate taste receptor protein function.

This protocol measures human taste responses and includes a brief anatomical assessment, a short taste test, and a validation method using the subject&#39;s reported sensation and taste receptor genotype.

: Goût un brève et validé Test examen

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement ...

The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status epilepticus (SE) is frequently selected to recapitulate spontaneous recurrent seizures (SRS). Here we present a protocol of SE induction by intraperitoneal (i.p.) injection of pilocarpine and monitoring of chronic recurring seizures in live animals using a wireless telemetry video and electroencephalogram (EEG) system. We demonstrated notable behavioral changes that need attention after pilocarpine injection and their correlation with hippocampal neuronal loss at 7 days and 6 weeks post-pilocarpine. We also describe the experimental procedures of electrode implantation for video and EEG recording, and analysis of the frequency and duration of chronic recurrent seizures. Finally, we discuss the possible reasons why the expected results are not achieved in each case. This provides a basic overview of modeling chronic epilepsy in mice and guidelines for troubleshooting. We believe this protocol can serve as a baseline for suitable models of chronic epilepsy and epileptogenesis.

This manuscript describes a method of inducing status epilepticus by systemic pilocarpine injection and of monitoring spontaneous recurrent seizures in live animals using a wireless telemetry video and electroencephalogram system. This protocol can be utilized for studying the pathophysiologic mechanisms of chronic epilepsy, epileptogenesis, and acute seizures.

Le modèle Pilocarpine d’épilepsie du Lobe Temporal et EEG surveillance d’un système de télémétrie chez la souris

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a diverting enterostomy. The etiology of this disease remains ill-defined but appears to differ from that of classical inflammatory bowel diseases such as Crohn's disease and ulcerative colitis. Research aimed to decipher the pathophysiological mechanisms leading to the development of this disease has been severely hampered by the lack of an appropriate murine model. This protocol generates a murine model of DC that facilitates the study of the immune system's role and its interaction with the microbiome in the development of DC. In this model using C57BL/6 animals, distal parts of the colon are excluded from the fecal stream by creating a distal colostomy, triggering the development of mild to moderate inflammation in the excluded bowel segments and reproducing the hallmark lesions of human DC with a moderate systemic inflammatory response. In contrast to the rat model, a large number of genetically-modified murine models on the C57BL/6 background are available. The combination of these animals with our model allows the potential roles of individual cytokines, chemokines, or receptors of bioactive molecules (e.g., interleukin (IL)-17; IL-10, chemokine CXCL13, chemokine receptors CXCR5 and CCR7, and the sphingosine-1-phosphate receptor 4) to be assessed in the pathogenesis of DC. The availability of congenic mouse strains on the C57BL/6 background largely facilitates transfer experiments to establish the roles of distinct cell types involved in the etiology of DC. Finally, the model offers the opportunity to assess the influences of local interventions (e.g., modification of the local microbiome or local anti-inflammatory therapy) on mucosal immunity in affected and non-affected bowel segments and the on systemic immune homeostasis.

Murine distal colostomy provides a murine model for human diversion colitis, a predominantly lymphocytic colitis in colon segment excluded from the fecal stream.

Murine colostomie distale, un nouveau modèle de colite détournement chez les souris C57BL/6

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Using a Knee Arthrometer to Evaluate Tissue-specific Contributions to Knee Flexion Contracture in the Rat

Normal knee range of motion (ROM) is critical to well-being and allows one to perform basic activities such as walking, climbing stairs and sitting. Lost ROM is called a joint contracture and results in increased morbidity. Due to the difficulty of reversing established knee contractures, early detection is important, and hence, knowing risk factors for their development is essential. The rat represents a good model with which the effect of an intervention can be studied due to the similarity of rat knee anatomy to that of humans, the rat's ability to tolerate long durations of knee immobilization in flexion, and because mechanical data can be correlated with histologic and biochemical analysis of knee tissue.
Using an automated arthrometer, we demonstrate a validated, precise, reproducible, user-independent method of measuring the extension ROM of the rat knee joint at specific torques. This arthrometer can be used to determine the effects of interventions on knee joint ROM in the rat.

The goal of the protocol is to measure the extension range of motion of the rat knee. The effects of various diseases that increase the stiffness of the knee joint and the effectiveness of treatments can be quantified.

À l’aide d’un Arthrometer de genou pour évaluer les Contributions spécifiques des tissus à la Contracture de Flexion du genou chez le Rat

Normal knee range of motion (ROM) is critical to well-being and allows one to perform basic activities such as walking, climbing stairs and sitting. Lost ...

Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal cancer, inflammatory bowel disease, and Parkinson&#8217;s disease. To study the function of the appendix, a gut disease-associated murine appendectomy model has been established and its step-by-step protocol is described here. This report introduces a facile protocol for caecal patch removal in mice followed by the chemical induction of chronic colitis-associated colorectal cancer using a combination of dextran sulfate sodium (DSS) and azoxymethane (AOM). IgA specific cells and IgA concentration were significantly reduced upon removal of the caecal patch in male C57BL/6 mice&#160;compared to those in the sham group. Simultaneously administering 2% DSS and AOM resulted in nearly 80% mice survival in both sham and appendectomy groups without significant body weight loss. Histological results confirmed colonic inflammation and different degrees of adenocarcinoma. This model can be used for the study of the functional role of the appendix in maintaining gut microbiota homeostasis and pathogenesis of gut colitis and malignancies, as well as for the potential development of drug targeting therapies.

The presented protocol describes a facile surgical removal of the appendix (caecal patch) in a mouse followed by the induction of inflammatory bowel disease-associated colorectal cancer. This murine appendectomy model enables investigation of the biological role of the appendix in the pathogenesis of human gastrointestinal disease.

Modèle d'appendicectomie de Murine de cancer colorectal associé de colite chronique par localisation précise du patch caecal

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal ...

Establishing In Situ Closed Circuit Perfusion of Lower Abdominal Organs and Hind Limbs in Mice

Ex vivo perfusion is an important physiological tool to study the function of isolated organs (e.g. liver, kidneys). At the same time, due to the small size of mouse organs, ex vivo perfusion of bone, bladder, skin, prostate, and reproductive organs is challenging or not feasible. Here, we report for the first time an in situ lower body perfusion circuit in mice that includes the above tissues, but bypasses the main clearance organs (kidney, liver, and spleen). The circuit is established by cannulating the abdominal aorta and inferior vena cava above the iliac artery and vein and cauterizing peripheral blood vessels. Perfusion is performed via a peristaltic pump with perfusate flow maintained for up to 2 h. In situ staining with fluorescent lectin and Hoechst solution confirmed that the microvasculature was successfully perfused. This mouse model can be a very useful tool for studying pathological processes as well as mechanisms of drug delivery, migration/metastasis of circulating tumor cells into/from the tumor, and interactions of immune system with perfused organs and tissues.

A protocol is described for in situ perfusion of the mouse lower body, including the bladder, the prostate, sex organs, bone, muscle and foot skin.

Création in situ de la perfusion en circuit fermé des organes abdominaux inférieurs et des membres postérieurs chez les souris

Ex vivo perfusion is an important physiological tool to study the function of isolated organs (e.g. liver, kidneys). At the same time, due to the small ...