Ce travail a été financé par des subventions de la SNF [31003A-138528], le Octav et la Fondation Marcella Botnar, la Fondation Novartis et la Fondation Emma Muschamp. Nous remercions Martine Lambelet, et Jean-Christophe Stehle pour leur excellente assistance technique.

Le comité d&#39;éthique de l&#39;Université de Lausanne a approuvé les expériences, qui sont en conformité avec les principes énoncés dans la Déclaration d&#39;Helsinki de 1975, tel que révisé en 1983 pour l&#39;utilisation de tissus humains. 1. Human grande veine saphène récolte <ol><li> Obtenir des segments de surplus de veines saphènes humaines non variqueuses de patients subissant une chirurgie de dérivation membre inférieur de l&#39;ischémie. Dans la salle d&#39;opération, de désinfecter l&#39;ensemble de la jambe avec une solution d&#39;iode et le drapé du patient pour exposer la jambe de l&#39;aine au pied. </li><li> Faire une incision médiane de l&#39;aine au genou (en laissant la partie interrompue de la peau). </li><li> Récolter la grande veine saphène avec un pédicule de ses environs (technique sans contact) de tissu. Sécurisés branches latérales des veines avec 4-0 cravates en soie. Stocker immédiatement d&#39;au moins 9 cm de segments de surplus de temps de la plus grande veine saphène, avec un diamètre externe de 2,5 à 4 mm à 4 ° C dans un milieu RPMI-1640 Glutamax milieu, additionné de 12,5% de sérum de veau foetal et l&#39;amener au laboratoire. </li></ol> 2 EVP Conception <ol><li> Assembler l&#39;équipement général de la figure 1. Autoclave tous les équipements et garder tous les composants dans des conditions stériles. En outre, s&#39;assurer que le système est étanche et ne fuit pas de produits chimiques dans le milieu. Utilisez le polyméthacrylate de méthyle (PMMA-GS) pour la couverture. Acier (X5 Cr Ni 18 10) et de polyoxyméthylène en plastique (POM) et le support de la veine. </li><li> Conception de la chambre de perfusion à la géométrie souhaitée pour permettre le placement de la veine et de sa connexion. Assurez-vous que la profondeur (ou le rayon si vous utilisez construction cylindrique) est d&#39;au moins 2,5 cm de sorte qu&#39;il permet une flexion minimale et dilatation du vaisseau ainsi que la couverture constante par les milieux de culture (Figure 1). L&#39;étanchéité est un problème majeur et c&#39;est la raison rectangulaire construction PMMA-GS est utilisé. </li><li> Concevoir le soutien de la veine à la geometr souhaitéey. Afin d&#39;éviter le vrillage de la veine ou plus de distension, permettre le réglage de la longueur de poussée ou de traction (vis ne peut être utilisé à cet effet, que la veine soit tordu le long de la vis). REMARQUE: Une tige en acier plein relié par 2 pièces coulissantes en forme de L qui prennent en charge les deux cylindres de la veine (5 mm de diamètre pour s&#39;adapter à la cuve) et la veine (figure 1B et figure 2) est utilisé ici. </li><li> Conception de la colonne de pression, de telle sorte que la &quot;pression de repos» appliquée au système est la suivante: p = 0-10 = hx ρ xg, où p = pression (N / m 2, Pa) h = hauteur de la colonne de fluide (m) ρ = masse volumique du liquide (kg / m 3), et g = l&#39;accélération de la pesanteur (9,81 m / s 2). Conception quatre conduits de raccordement, de haut en bas: à appliquer une pression, pour la sortie (de la veine), l&#39;entrée (à la veine) et de permettre changement de milieu. </li><li> Préparer le milieu. Basé sur des études antérieures 5,11-14, choisissez RPMI-1640, complétée par Glutamax, 12,5% De sérum de veau foetal, et une solution d&#39;antibiotique-antimycotique à 1% (10 000 U / ml de pénicilline G, ainsi que 10 mg / ml de sulfate de streptomycine, plus 25 mg / ml d&#39;amphotéricine B, plus 0,5 ug / ml de gentamycine):. La contrainte de cisaillement (SS) est donnée par SS = 4 μQ / π * r 3 Q représente le débit (ml / sec), r le rayon (cm) du segment de veine, et μ est la viscosité du milieu de perfusion. <ol><li> Moduler SS en ajustant la viscosité par addition de 70 kDa dextran. Mesure de la viscosité avec un viscosimètre. Ici, ajouter 8% de dextran 70 kDa pour définir SS à 9-15 dyn / cm 2. </li></ol></li><li> Mettre la pompe à engrenage pour induire un signal cardioïde pulsatile de 60 impulsions / min et amplitude constante à générer un flux unidirectionnel de 150 ± 15 ml / min, indépendante de la pression appliquée dans le système et commandé par un ordinateur. Assurez-vous que le logiciel de pilotage intègre l&#39;acquisition constante et la surveillance des pressions, vitesse d&#39;écoulement, la fréquence du pouls, et le signal. Si vous le souhaitez, utiliser une deuxième pompe (non synchronisationhronized) pour produire un non-laminaire, l&#39;écoulement turbulent. </li></ol> 3. Assemblée EVP (Figure 1) <ol><li> Avant de commencer, assurez-vous que tout le matériel est stérile. Effectuez toutes les étapes suivantes sous asepsie dans une hotte à flux laminaire. </li><li> Placez la veine dans une boîte de Pétri remplie avec le milieu. Utilisez une lame chirurgicale et diviser la veine en 3 segments égaux. </li><li> Rincer immédiatement un segment dans du PBS. Diviser le segment en 3 parties, fixer un dans le formol pour la morphométrie. Congeler les deux autres pour la transcription quantitative (RT-PCR) et de protéines (western blot) analyse. Tenez compte de ces segments en tant que témoin, non veine perfusée. </li><li> Utiliser les deux segments restants de la perfusion. <ol><li> Injecter très doucement moyen dans la veine et déterminer le sens d&#39;écoulement normale; en présence de la veine soupapes est inversée. </li><li> Sceller les veines est d&#39;une importance capitale pour le succès expérimental. Vérifier les fuites à travers collatéraux. Fixez les fuites avec 6-0 points de suture de soie. </li> &lt;/ Ol&gt; </li><li> Connectez le segment de veine entre les deux cylindres métalliques, une extrémité à la fois (2.3, Figure 1). Fixer les cylindres avec Ethibon 3-0 autour des indentations (figure 1A et B). <ol><li> Placer le segment veineux ensemble dans la chambre de perfusion préalablement remplie avec un milieu. Répétez la même procédure pour le deuxième segment. REMARQUE: une panne de bien sceller la veine de la bouteille sera une source de la fuite, nécessite une réintervention, et augmenter de façon significative le risque d&#39;infection et d&#39;insuffisance expérimentale. </li></ol></li><li> Pour renforcer (mesh) du deuxième segment, de libérer les deux cylindres avec la veine (ci-joint) des pièces en forme de L (2.3 et figure 1). <ol><li> Soyez doux et ne pas toucher la veine avec des instruments. Faites glisser la maille d&#39;abord sur le cylindre puis sur la veine. Une bousculade push / pull obtiendra le maillage sur la veine. </li><li> Une fois que le maillage couvre toute la surface de la veine assurer la jveine acketed aux cylindres avec Ethibon 3-0. </li><li> Réassembler le composé veine / cylindre sur le support en forme de L et le transférer à la chambre de perfusion, préalablement remplie avec un milieu. </li></ol></li><li> Connecter chaque cylindre métallique (et en sortie) à un séparateur en Y en utilisant un tube de silicone traitée avec du peroxyde d&#39;un diamètre intérieur de 3,2 mm. </li><li> Raccorder la sortie à un deuxième séparateur séparateur en Y à l&#39;aide du même type de tube. De ce répartiteur en Y, utiliser un tube pour mesurer la pression de perfusion à travers les deux navires. Connectez l&#39;autre à la colonne pour former un système en boucle fermée (Figure 2). </li><li> A l&#39;intérieur de l&#39;incubateur, utiliser un long (d&#39;un mètre de longueur) pour connecter le tube de la colonne de pression à la tête de la pompe. </li><li> Remplissez le mettre en place en reliant la tête de la pompe à l&#39;entrée Y-splitter avec un autre tube de grande longueur (Figure 1). </li></ol> 4 veines perfusion <ol><li> Après l&#39;assemblée EVP a été completed, remplir la colonne avec le milieu (rester en dessous de la veine conduit d&#39;évacuation pour permettre le remplissage). Ajouter plus moyen dans la colonne jusqu&#39;à ce que le système est plein. Déplacer tout le système dans l&#39;incubateur maintenu à 37 ± 0,1 ° C avec un pH maintenu constant à 7,40 ± 0,01 (en utilisant un algorithme de CO 2 / pH sur la base de l&#39;équation de Henderson-Hasselbach). </li><li> Apportez la tête de pompe à engrenage extérieur de l&#39;incubateur et le connecter à l&#39;entraînement de la pompe à engrenages. Visser les tiges pour fixer l&#39;ensemble. </li><li> Mettez la puissance de la pompe, assurez-vous qu&#39;il est activé sur le logiciel de pilotage et permet 5 min à moyen et à répartir de façon égale dans tous les compartiments. </li><li> Pour contrôler la pression, utilisez un contrôle de la ligne artérielle. Raccorder la sortie de pression d&#39;EVP (il correspond à cathéter artériel) pour le transducteur de pression relié à l&#39;ordinateur. <ol><li> Assurez-vous que le tube est entièrement remplie de fluide et ne contient pas de bulles. De-bulles, le système de culture à travers le &quot;li artérielne &quot;tube (Figure 2). Faites attention à l&#39;écran et de regarder pour un signal cardioïde pulsatile de 60 impulsions / min d&#39;amplitude constante. A ce stade, la pression moyenne est comprise entre 0 à 10 mm Hg. Si la pression est &lt;0 et la colonne vide progressivement rechercher une fuite (veine collatérale ou joint insuffisant entre la veine et le tube). </li></ol></li><li> Régler la pression minimale de 6 mm Hg pour un test veineuse ou à 90 mm Hg pour un test artérielle. Dans ces conditions, un injecteur d&#39;air applique la pression nécessaire à la colonne et le système. </li><li> Changer le milieu tous les 2 jours en utilisant le tube relié à la colonne de pression. Pour éviter d&#39;endommager le changement de pression, ouvrir le bouchon de la première colonne. </li></ol> 5. achèvement de la perfusion <ol><li> Après 3 ou 7 jours de perfusion: prendre les EVP sur l&#39;incubateur et démonter les veines. Jeter le 5 mm proximale et distale veine extrémités fixées à l&#39;équipement. Couper, un rin 5 mm d&#39;épaisseur centralegs du segment restant et fixer dans du formol (morphométrie). Geler les fragments restants et réduire en poudre pour d&#39;autres analyses moléculaires. </li></ol>

<ol>
	<li>Sal Go, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Executive+summary:+heart+disease+and+stroke+statistics--2014+update:+a+report+from+the+american+heart+association.">Executive summary: heart disease and stroke statistics--2014 update: a report from the american heart association.</a> Circulation. 129, 399-410 (2014).</li><li>Sal Conte, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Results+of+PREVENT+III:+a+multicenter,+randomized+trial+of+edifoligide+for+the+prevention+of+vein+graft+failure+in+lower+extremity+bypass+surgery.">Results of PREVENT III: a multicenter, randomized trial of edifoligide for the prevention of vein graft failure in lower extremity bypass surgery.</a> Journal of Vascular Surgery. 43, 742-751 (2006).</li><li>Yu, P., Nguyen, B. T., Tao, M., Bai, Y., Ozaki, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+vein+graft+hemodynamic+manipulations+to+enhance+experimental+utility.">Mouse vein graft hemodynamic manipulations to enhance experimental utility.</a> The American Journal of Pathology. 178, 2910-2919 (2011).</li><li>Davies, M. G., Hagen, P. 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Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+biology+of+saphenous+vein+grafts+fitted+with+external+synthetic+sheaths+and+stents.">On the biology of saphenous vein grafts fitted with external synthetic sheaths and stents.</a> Biomaterials. 28, 895-908 (2007).</li><li>Zilla, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constrictive+external+nitinol+meshes+inhibit+vein+graft+intimal+hyperplasia+in+nonhuman+primates.">Constrictive external nitinol meshes inhibit vein graft intimal hyperplasia in nonhuman primates.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 136, 717-725 (2008).</li><li>Zilla, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilization+of+shape+memory+in+external+vein-graft+meshes+allows+extreme+diameter+constriction+for+suppressing+intimal+hyperplasia:+a+non-human+primate+study.">Utilization of shape memory in external vein-graft meshes allows extreme diameter constriction for suppressing intimal hyperplasia: a non-human primate study.</a> Journal of Vascular Surgery. 49, 1532-1542 (2009).</li><li>Yeoman, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+constitutive+model+for+the+warp-weft+coupled+non-linear+behavior+of+knitted+biomedical+textiles.">A constitutive model for the warp-weft coupled non-linear behavior of knitted biomedical textiles.</a> Biomaterials. 31, 8484-8493 (2010).</li><li>Longchamp, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+external+mesh+reinforcement+to+reduce+intimal+hyperplasia+and+preserve+the+structure+of+human+saphenous+veins.">The use of external mesh reinforcement to reduce intimal hyperplasia and preserve the structure of human saphenous veins.</a> Biomaterials. 35, 2588-2599 (2014).</li><li>Saucy, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+pulsatile+perfusion+of+human+saphenous+veins+induces+intimal+hyperplasia+and+increased+levels+of+the+plasminogen+activator+inhibitor+1.">Ex vivo pulsatile perfusion of human saphenous veins induces intimal hyperplasia and increased levels of the plasminogen activator inhibitor 1.</a> European Surgical Research. Europaische Chirurgische Forschung. Recherches Chirurgicales Europeennes. 45, 50-59 (2010).</li><li>Dubuis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atorvastatin-loaded+hydrogel+affects+the+smooth+muscle+cells+of+human+veins.">Atorvastatin-loaded hydrogel affects the smooth muscle cells of human veins.</a> The Journal of pharmacology and experimental. 347, 574-581 (2013).</li><li>Deglise, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+connexin43+expression+in+human+saphenous+veins+in+culture+is+associated+with+intimal+hyperplasia.">Increased connexin43 expression in human saphenous veins in culture is associated with intimal hyperplasia.</a> Journal of Vascular Surgery. 41, 1043-1052 (2005).</li><li>Muto, A., Model, L., Ziegler, K., Eghbalieh, S. D., Dardik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+vein+graft+adaptation+to+the+arterial+circulation:+insights+into+the+neointimal+algorithm+and+management+strategies.">Mechanisms of vein graft adaptation to the arterial circulation: insights into the neointimal algorithm and management strategies.</a> Circulation Journal : Official Journal of the Japanese Circulation Society. 74, 1501-1512 (2010).</li><li>Tao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+murine+intimal+hyperplasia+model+founded+on+a+focal+carotid+stenosis.">A simplified murine intimal hyperplasia model founded on a focal carotid stenosis.</a> The American Journal of Pathology. 182, 277-287 (2013).</li><li>Berard, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salvage+treatment+for+venous+aneurysm+complicating+vascular+access+arteriovenous+fistula:+use+of+an+exoprosthesis+to+reinforce+the+vein+after+aneurysmorrhaphy.">Salvage treatment for venous aneurysm complicating vascular access arteriovenous fistula: use of an exoprosthesis to reinforce the vein after aneurysmorrhaphy.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery : the Official Journal of the European Society for Vascular Surgery. 40, 100-106 (2010).</li></ol>

Les auteurs n&#39;ont rien à divulguer.

Cette étude révèle une ex vivo système veine de perfusion (EVP) d&#39;effectuer des études approfondies hémodynamiques dans les veines humaines. Ce système permet de veines saphènes sous perfusion des paramètres hémodynamiques déterminées en l&#39;absence de facteurs aggravants inflammatoires et de la croissance libérés par les cellules circulantes in vivo. Ainsi, il permet une meilleure compréhension des voies sous-jacents impliqués dans le contrôle de IH dans les veines humaines gref...

Les maladies cardiovasculaires sont la principale cause de morbidité et de mortalité dans les pays occidentaux 1. Malgré les progrès réalisés dans les traitements endovasculaires, la chirurgie de pontage reste le pilier de thérapies contemporaines, ainsi plus d&#39;un demi-million de greffes veineuses sont effectuées chaque année aux États-Unis. Cependant, malgré des décennies de recherche, 30-60% de la baisse des greffes extrémité de la veine échouent dans les premières années en raison de l&#39;hyperplasie intimale (IH) 2. Les forces mécaniques, en particulier à faible contrainte de cisaillement (SS) et haute tension de la paroi, jouent un rôle essentiel dans l&#39;initiation et le développement de cette réponse hyperplasique 3,4. Pour résoudre ce problème, un ex vivo veines système de perfusion (EVP) a été généré pour étudier, dans des conditions strictement contrôlées hémodynamiques (pression et la contrainte de cisaillement), le comportement des veines saphènes humaines. Dans cette étude, après insertion dans la circulation artérielle analogue, l&#39;hypertension (moyenne = 100 mm Hg) a été suffisant pour stimuler prolifration et la migration des cellules musculaires lisses dans l&#39;intima (IH) 5. Études sur les mammifères ont suggéré l&#39;utilisation du renforcement externe comme une méthode efficace pour soutenir la &quot;veine artérialisée&quot; et contrecarrer l&#39;hémodynamique aigu change la veine faces une fois implanté dans un milieu artérielle. Le maillage empêché surdistension, des contraintes de cisaillement, et de réduire la tension de la paroi et par conséquent IH 6-10. Cependant, les mécanismes sous-jacents et son applicabilité aux veines humaines dans l&#39;amélioration de dérivation perméabilité n&#39;ont pas été entièrement caractérisé. Nos EVP ont été utilisées pour comparer, dans un état imitant les modifications une veine visages fois inséré dans un régime artérielle (stress et de pression à cisaillement élevé), le comportement des veines saphènes humaines dans l&#39;absence et la présence d&#39;un macroporeuse maille polyester tubulaire externe. En empêchant le remodelage pathologique et IH, le maillage a fourni la preuve de son efficacité clinique potentielle 11 </sup&gt;. Cette étude 1) présente un modèle ex vivo de veines saphènes humaines perfusion sous pression contrôlée et la contrainte de cisaillement 2) démontre que maille polyester macro-poreuse externe réduit IH et fournit des informations cruciales pour son application clinique potentielle.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1113">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:453px;">Name</td>
			<td style="width:371px;">Company</td>
			<td style="width:145px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:144px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RPMI 1640 - Glutamax</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>61870-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"><a name="RANGE!A3">Penicilline/Streptomycine/Fungizone</a></td>
			<td>Bioconcept</td>
			<td>4-02F00-H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dextran from Leuconostoc spp. 500 gr.</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>31390</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tampon PBS CHUV pH 7.1-7.3 1 lt.</td>
			<td>Laboratorium und Grosse Apotheke Dr. G. Bichsel AG</td>
			<td>100 0 324 00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cryosectionning embedding medium - Tissue-Tek OCT Compound</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-373-65</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Silicon Tubing (Peroxide) L/S 16 (96400-16 ) - 7.5m</td>
			<td>Idex Health &#38; Science GMBH</td>
			<td>MF0037ST</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Y-splitter&#160;</td>
			<td>Idex Health &#38; Science GMBH</td>
			<td>Y-connector</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">35 mm Culture dish</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS430165-100EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 ml Falcon tube</td>
			<td>BD Bioscence</td>
			<td>352096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50 ml Falcon tube</td>
			<td>BD Bioscence</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gearing pump - Reglo-Z</td>
			<td>Idex Health &#38; Science GMBH</td>
			<td>SM 895&#160;</td>
			<td>&#160;App-Nr 03736-00194</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pump Head</td>
			<td>Idex Health &#38; Science GMBH</td>
			<td>MI0008&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Monitoring Kit TRANSPAC IV</td>
			<td>icumedical</td>
			<td>011-0J736-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">20 mL Syringes</td>
			<td>B. Braun Medical SA</td>
			<td>4612041-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Etibon 3-0 FS-2</td>
			<td>Ethicon- Johnson&#38;Johnson</td>
			<td>EH7346H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mesh ProVena 6-8mm</td>
			<td>B. Braun Medical SA</td>
			<td>1105012-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaCl: Sodium Chlorure Solution perfusion 0.9% (100 ml)</td>
			<td>B. Braun Medical SA</td>
			<td>534534</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Masterflex L/S Standard Drive</td>
			<td>Cole-Parmer Instrument Co</td>
			<td>7521-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Acquisition card</td>
			<td>National Instruments</td>
			<td>PCI-6024 E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flowmeter module</td>
			<td>Transonic Systems Inc.</td>
			<td>TS410 and T402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stopcock with 3-ways</td>
			<td>BD Connexta Luerlock</td>
			<td>394600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Millex Filter</td>
			<td>Milian</td>
			<td>SE2M229I04</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

procedure for human saphenous veins ex vivo perfusion and external reinforcement

Le pilier de thérapies contemporaines pour une maladie étendue artérielle occlusive est pontage veineux. Cependant, sa durée de vie est menacé par une hyperplasie de l&#39;intima (IH) qui mène éventuellement à une occlusion des vaisseaux et échec de la greffe. Les forces mécaniques, en particulier à faible contrainte de cisaillement et haute tension de la paroi, sont pensés pour initier et de soutenir ces changements cellulaires et moléculaires, mais leur contribution exacte reste à démêler. Pour évaluer de façon sélective le rôle de la pression et la contrainte de cisaillement sur ​​la biologie de IH, un ex vivo système de perfusion (EVP) a été créé pour perfuser les segments de veines saphènes humaines sous régime artérielle (stress de cisaillement élevé et haute pression). D&#39;autres innovations techniques ont permis à la perfusion simultanée de deux segments de la même veine, on renforcé avec un maillage externe. Les veines ont été récoltées en utilisant une technique sans contact et immédiatement transférés au laboratoire pour le montage dans la EVP. Un segment de la isol fraîchementATED veine n&#39;a pas été perfusé (contrôle, jour 0). Les deux autres segments ont été perfusés pendant jusqu&#39;à 7 jours, un être complètement à l&#39;abri avec un 4 mm (diamètre) maillage externe. La pression, la vitesse d&#39;écoulement, et la fréquence du pouls ont été contrôlés en permanence et adaptés à reproduire les conditions hémodynamiques régnant dans l&#39;artère fémorale. A la fin de la perfusion, les veines ont été démontées et utilisées pour l&#39;analyse histologique et moléculaire. Sous conditions ex vivo, la perfusion à haute pression (artérielle, moyenne = 100 mm Hg) est suffisante pour générer IH et le remodelage des veines humaines. Ces altérations sont réduits en présence d&#39;un filet de polyester externe.

L&#39;EVP est un outil précieux pour évaluer de manière indépendante les forces hémodynamiques sur la veine saphène humaine greffe remodelage et IH. La figure 1 montre la chambre de perfusion et le support de la veine. Dans les figures 1A et B, le soutien de la veine avant (figure 1A) et après (figure 1B) assemblage, respectivement, sont représentés. Il se compose (de haut en bas) de 1 brut tube en ...

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Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

Les mécanismes conduisant au développement de l&#39;hyperplasie intimale (IH) et la veine échec de la greffe sont encore mal compris. Cette étude décrit un système ex vivo pour perfuser les veines humaines sous écoulement et pression contrôlée. En outre, l&#39;efficacité de renforcement de maille externe pour limiter le développement d&#39;IH a été évaluée.

Procédure pour saphènes humaines veines<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Perfusion et renforcement externe

The mainstay of contemporary therapies for extensive occlusive arterial disease is venous bypass graft. However, its durability is threatened by intimal ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

11.1K vues.  Brigham and Women's Hospital/Harvard Medical School.  Les mécanismes conduisant au développement de l'hyperplasie intimale (IH) et la veine échec de la greffe sont encore mal compris. Cette étude décrit un système ex vivo pour perfuser les veines humaines sous écoulement et pression contrôlée. En outre, l'efficacité de renforcement de maille externe pour limiter le développement d'IH a été évaluée. 

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Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for liver transplantation die without receiving an organ transplant or are delisted for disease progression. One strategy to increase the donor pool is the utilization of marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or donation after cardiac death (DCD). The current preservation technique of cold static storage is only poorly tolerated by marginal livers resulting in significant organ damage. In addition, cold static organ storage does not allow graft assessment or repair prior to transplantation.
These shortcomings of cold static preservation have triggered an interest in warm perfused organ preservation to reduce cold ischemic injury, assess liver grafts during preservation, and explore the opportunity to repair marginal livers prior to transplantation. The optimal pressure and flow conditions, perfusion temperature, composition of the perfusion solution and the need for an oxygen carrier has been controversial in the past.
In spite of promising results in several animal studies, the complexity and the costs have prevented a broader clinical application so far. Recently, with enhanced technology and a better understanding of liver physiology during ex vivo perfusion the outcome of warm liver perfusion has improved and consistently good results can be achieved.
This paper will provide information about liver retrieval, storage techniques, and isolated liver perfusion in pigs. We will illustrate a) the requirements to ensure sufficient oxygen supply to the organ, b) technical considerations about the perfusion machine and the perfusion solution, and c) biochemical aspects of isolated organs.

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or livers retrieved after cardiac death (DCD) tolerate conventional, cold static storage only poorly. We developed a novel model of subnormothermic ex vivo liver perfusion for preservation, assessment, and repair of marginal liver grafts prior to transplantation.

Technique de Subnormothermic<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Foie de perfusion pour l&#39;entreposage, de l&#39;évaluation et de réparation des marginaux greffes du foie

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for ...

Recherche

Médecine

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial cells tend to lose hormone receptor expression. Widely used hormone receptor positive breast cancer cell lines are of limited relevance to the in vivo situation. Here, we describe an ex vivo model to study hormone action in the human breast. Fresh human breast tissue specimens from surgical discard material such as reduction mammoplasties or mammectomies are mechanically and enzymatically digested to obtain tissue fragments containing ducts and lobules and multiple stromal cell types. These tissue microstructures kept in basal medium without growth factors preserve their intercellular contacts, the tissue architecture, and remain hormone responsive for several days. They are readily processed for RNA and protein extraction, histological analysis or stored in freezing medium. Fluorescence activated cell sorting (FACS) can be used to enrich for specific cell populations. This protocol provides a straightforward, standard approach for translational studies with highly complex, varied human specimens.

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

We have developed a novel ex vivo model to study hormone action in the human breast. It is based on tissue microstructures isolated from surgical breast tissue specimens which preserve tissue architecture, intercellular interactions, and paracrine signaling.

Une<em&gt; Ex vivo</em&gt; Modèle pour étudier action hormone dans le sein humain

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a serious problem. Therefore, the acceptance criteria for organ donors have been extended leading to the usage of marginal kidney grafts. These marginal organs tolerate cold storage poorly resulting in increased preservation injury and higher rates of delayed graft function. To overcome the limitations of cold storage, extensive research is focused on alternative normothermic preservation methods.
Ex vivo normothermic organ perfusion is an innovative preservation technique. The first experimental and clinical trials for ex vivo lung, liver, and kidney perfusions demonstrated favorable outcomes.
In addition to the reduction of cold ischemic injury, the method of normothermic kidney storage offers the opportunity for organ assessment and repair. This manuscript provides information about kidney retrieval, organ preservation techniques, and isolated ex vivo normothermic kidney perfusion (NEVKP) in a porcine model. Surgical techniques, set up for the perfusion solution and the circuit, potential assessment options, and representative results are demonstrated.

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

The severe organ shortage has resulted in increased use of marginal kidney grafts for transplantation. This has triggered interest in alternative storage methods, since marginal grafts especially tolerate cold storage poorly. The technique of normothermic ex vivo kidney perfusion (NEVKP) represents a novel preservation method for kidney grafts prior to &#160;transplantation.

Normothermique<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Kidney Perfusion pour la préservation du rein Greffes avant la transplantation

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been introduced as a method to evaluate and modify organ function. NEVLP has many advantages in comparison to hypothermic and subnormothermic perfusion including reduced preservation injury, restoration of normal organ function under physiologic conditions, assessment of organ performance, and as a platform for organ repair, remodeling, and modification. Both murine and porcine NEVLP models have been described. We demonstrate a rat model of NEVLP and use this model to show one of its important applications &#8212; the use of a therapeutic molecule added to liver perfusate. Catalase is an endogenous reactive oxygen species (ROS) scavenger and has been demonstrated to decrease ischemia-reperfusion in the eye, brain, and lung. Pegylation has been shown to target catalase to the endothelium. Here, we added pegylated-catalase (PEG-CAT) to the base perfusate and demonstrated its ability to mitigate liver preservation injury. An advantage of our rodent NEVLP model is that it is inexpensive in comparison to larger animal models. A limitation of this study is that it does not currently include post-perfusion liver transplantation. Therefore, prediction of the function of the organ post-transplantation cannot be made with certainty. However, the rat liver transplant model is well established and certainly could be used in conjunction with this model. In conclusion, we have demonstrated an inexpensive, simple, easily replicable NEVLP model using rats. Applications of this model can include testing novel perfusates and perfusate additives, testing software designed for organ evaluation, and experiments designed to repair organs.

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

There is a significant liver donor shortage, and criteria for liver donors have been expanded. Normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) has been developed to evaluate and modify organ function. This study demonstrates a rat model of NEVLP and tests the ability of pegylated-catalase, to mitigate liver preservation injury.

Un petit modèle Animal de Perfusion hépatique normothermique Ex Vivo

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

Determining and Controlling External Power Output During Regular Handrim Wheelchair Propulsion

The use of a manual wheelchair is critical to 1% of the world&#39;s population. Human powered wheeled mobility research has considerably matured, which has led to improved research techniques becoming available over the last decades. To increase the understanding of wheeled mobility performance, monitoring, training, skill acquisition, and optimization of the wheelchair-user interface in rehabilitation, daily life, and sports, further standardization of measurement set-ups and analyses is required. A crucial stepping-stone is the accurate measurement and standardization of external power output (measured in Watts), which is pivotal for the interpretation and comparison of experiments aiming to improve rehabilitation practice, activities of daily living, and adaptive sports. The different methodologies and advantages of accurate power output determination during overground, treadmill, and ergometer-based testing are presented and discussed in detail. Overground propulsion provides the most externally valid mode for testing, but standardization can be troublesome. Treadmill propulsion is mechanically similar to overground propulsion, but turning and accelerating is not possible. An ergometer is the most constrained and standardization is relatively easy. The goal is to stimulate good practice and standardization to facilitate the further development of theory and its application among research facilities and applied clinical and sports sciences around the world.

Accurate and standardized assessment of external power output is crucial in the evaluation of physiological, biomechanical, and perceived stress, strain, and capacity in manual wheelchair propulsion. The current article presents various methods to determine and control power output during wheelchair propulsion studies in the laboratory and beyond.

Détermination et contrôle de la puissance externe pendant la propulsion régulière en fauteuil roulant handrim

The use of a manual wheelchair is critical to 1% of the world&#39;s population. Human powered wheeled mobility research has considerably matured, which ...

External Cephalic Version: Is it an Effective and Safe Procedure?

External cephalic version (ECV) is an effective procedure for reducing the number of cesarean sections. To date, there is no video publication showing the methodology of this procedure. The main objective is to show how to perform ECV with a specific protocol with tocolysis before the procedure and analgesia. Moreover, we describe and analyze the factors associated with successful ECV, and also compare to deliveries in the general pregnant population.
A retrospective and descriptive analysis of ECV carried out at the Hospital Clinico Universitario Virgen de la Arrixaca in Murcia (Spain) between 1/1/2014 and 12/31/2018 was assessed. The latest data available of labor deliveries in the local center, which is the biggest maternity department in Spain, were from 2018.
320 patients were recruited and 3 pregnant women were lost during the study. ECV was carried out at 37&#177;3 weeks gestation. ECV was successful in 82.5% (N=264). 19 complications were reported (5.9%): 8 vaginal bleeding (2.5%), 9 fetal bradycardia (2.8%), 1 preterm rupture of membranes (0.3%) and 1 cord prolapse (0.3%). A previous vaginal delivery increases the success rate of ECV ORadjusted=3.03 (1.62-5.68). Maternal Body Mass Index (BMI) affects the success of ECV ORadjusted=0.94 (0.89-0.99). Patients with BMI&#62;40 kg/m2 have an ORadjusted=0.09 (0.009-0.89) compared with those with BMI &#60;25 kg/m2. If ECV was successful, the cesarean delivery index is 22.2% (17.5-27.6%), the eutocic delivery index is 52.1% (46.1-58.1%) and the instrumented vaginal delivery index is 25.7% (20.7-31.2%). There are no differences in cesarean and eutocic delivery indexes after successful ECV. However, a successful ECV is associated with a 6.29% increase in the instrumented delivery rate (OR=1.63).
ECV is an effective procedure to reduce the number of cesarean sections for breech presentations. Maternal BMI and previous vaginal delivery are associated with ECV success. Successful ECV does not modify the usual delivery pattern.

This article shows how to perform the external cephalic version (ECV) by two experienced obstetricians in the obstetric operating room in the presence of an anesthesiologist and a midwife. The ECV is carried out with analgesia and tocolysis. Two attempts are made under ultrasonography control.

Version céphalique externe : Est-ce une procédure efficace et sûre?

External cephalic version (ECV) is an effective procedure for reducing the number of cesarean sections. To date, there is no video publication showing the ...

Normothermic Ex Vivo Pancreas Perfusion for the Preservation of Pancreas Allografts before Transplantation

Pancreas transplantation (PTx) is a curative treatment for people who live with the burden of a diagnosis of diabetes mellitus (DM). However, due to organ shortages and increasing numbers of patients being listed for PTx, new strategies are needed to increase the number of available grafts for transplantation. 
Static cold storage (SCS) is considered the gold standard for standard criteria organs. However, standard criteria donors (SCD) are becoming scarce and new strategies that can increase the rate of organ acceptance from extended criteria donors (ECD) are urgently needed. 
Normothermic ex vivo perfusion (NEVP) is one of the strategies that has become increasingly popular over the past couple of decades. This preservation method has already been used successfully in other organs (liver, kidneys, and lungs) but has been minimally explored in pancreas transplantation. The few papers that describe the method for pancreas show little success, edema being one of the major issues. The following manuscript describes the successful NEVP method and setup developed by our group to perfuse swine pancreas.

Normothermic Ex Vivo Pancreas Perfusion for the Preservation of Pancreas Allografts before Transplantation

Normothermic ex vivo machine perfusion (NEVP) has scarcely been explored for the preservation of pancreas allografts. We present an innovative preservation technique for pancreas allografts before transplantation.

Perfusion pancréatique ex vivo normamère pour la conservation des allogreffes de pancréas avant transplantation

Pancreas transplantation (PTx) is a curative treatment for people who live with the burden of a diagnosis of diabetes mellitus (DM). However, due to organ ...

Retinal Explant of the Adult Mouse Retina as an Ex Vivo Model for Studying Retinal Neurovascular Diseases

One of the challenges in retina research is studying the cross-talk between different retinal cells such as retinal neurons, glial cells, and vascular cells. Isolating, culturing, and sustaining retinal neurons in vitro have technical and biological limitations. Culturing retinal explants may overcome these limitations and offer a unique ex vivo model to study the cross-talk between various retinal cells with well-controlled biochemical parameters and independent of the vascular system. Moreover, retinal explants are an effective screening tool for studying novel pharmacological interventions in various retinal vascular and neurodegenerative diseases such as diabetic retinopathy. Here, we describe a detailed protocol for retinal explants' isolation and culture for an extended period. The manuscript also presents some of the technical problems during this procedure that may affect the desired outcomes and reproducibility of the retinal explant culture. The immunostaining of the retinal vessels, glial cells, and neurons demonstrated intact retinal capillaries and neuroglial cells after 2 weeks from the beginning of the retinal explant culture. This establishes retinal explants as a reliable tool for studying changes in the retinal vasculature and neuroglial cells under conditions that mimic retinal diseases such as diabetic retinopathy.

Retinal Explant of the Adult Mouse Retina as an Ex Vivo Model for Studying Retinal Neurovascular Diseases

This protocol presents and describes steps for the isolation, dissection, culturing, and staining of retinal explants obtained from an adult mouse. This method is beneficial as an ex vivo model for studying different retinal neurovascular diseases such as diabetic retinopathy.

Explant rétinien de la rétine de souris adulte comme modèle ex vivo pour l’étude des maladies neurovasculaires rétiniennes

One of the challenges in retina research is studying the cross-talk between different retinal cells such as retinal neurons, glial cells, and vascular ...

<meta charset="utf8"></head><body>Avancement de la transplantation pulmonaire avec perfusion à base de polyhHb dans des modèles EVLP de rat

Exploring Alternative Perfusion Solutions Using Next-Generation Polymerized Hemoglobin-Based Oxygen Carriers in a Model of Rat Ex Vivo Lung Perfusion

Lung transplantation is hampered by the lack of suitable donors. Previously, donors that were thought to be marginal or inadequate were discarded. However, new and exciting technology, such as ex vivo lung perfusion (EVLP), offers lung transplant providers extended assessment for marginal donor allografts. This dynamic assessment platform has led to an increase in lung transplantation and has allowed providers to use donors that were previously discarded, thus expanding the donor pool. Current perfusion techniques use cellular or acellular perfusates, and both have distinct advantages and disadvantages. Perfusion composition is critical to maintaining a homeostatic environment, providing adequate metabolic support, decreasing inflammation and cellular death, and ultimately improving organ function. Perfusion solutions must contain sufficient protein concentration to maintain appropriate oncotic pressure. However, current perfusion solutions often lead to fluid extravasation through the pulmonary endothelium, resulting in inadvertent pulmonary edema and damage. Thus, it is necessary to develop novel perfusion solutions that prevent excessive damage while maintaining proper cellular homeostasis. Here, we describe the application of a polymerized human hemoglobin (PolyhHb)-based oxygen carrier as a perfusate and the protocol in which this perfusion solution can be tested in a model of rat EVLP. The goal of this study is to provide the lung transplant community with key information in designing and developing novel perfusion solutions, as well as the proper protocols to test them in clinically relevant translational transplant models.

<meta charset="utf8"></head><body>Pleins feux sur l’auteur : Utilisation de l’hémoglobine humaine polymérisée de nouvelle génération pour améliorer l’évaluation et la préservation des poumons du do

Here, we describe the application of a polymerized human hemoglobin (PolyhHb)-based oxygen carrier as a perfusate and the protocol in which this perfusion solution can be tested in a model of rat ex vivo lung perfusion.

Exploration de solutions de perfusion alternatives à l’aide de transporteurs d’oxygène polymérisés à base d’hémoglobine de nouvelle génération dans un modèle de perfusion pulmonaire ex vivo chez le rat