Mohammed R. Milad is supported by NIMH grant R01 MH097880 and institutional funds from the Department of Psychiatry at MGH.

NOTE: Toutes les procédures dans ce protocole ont été approuvés par le Sous-comité sur la recherche de protection des animaux, qui sert de la Commission institutionnelle de protection des animaux et l&#39;utilisation (IACUC) pour le Massachusetts General Hospital, et sont en conformité avec les Instituts nationaux de la santé des lignes directrices. 1. logement des animaux et la manipulation procédure <ol><li> À l&#39;arrivée, la maison des adultes Sprague Dawley rats femelles environ 8-10 semaines d&#39;âge (pesant 200 à 225 g) en groupes de bacs en plastique 3-4 pouces avec une literie de copeaux de bois. Les maintenir à un régime d&#39;accès ad libitum à chow et de l&#39;eau et un cycle de 12 heures de lumière / obscurité. Laissez rats se acclimater à des conditions de logement et animalerie pour un minimum de 1 semaine. NOTE: Toutes les procédures dans ce manuscrit sont réalisées durant le cycle de lumière. </li><li> Après cette période d&#39;acclimatation, les animaux pour traiter toutes les 5 min chacun pour 2-3 jours. Correctement ramasser le rat un à la fois (soutenu par le torse et non par la queue),les tenir en toute sécurité, et de les caresser pendant ce temps. Manipuler les animaux qui apparaissent plus stressés, nerveux ou anxieux pendant des périodes de temps plus longues. Pour ce faire, pour minimiser le stress de manipulation, ce qui pourrait affecter les étapes suivantes dans ce protocole. REMARQUE: Le nombre de jours et la quantité de la manipulation des animaux peuvent varier entre les différents laboratoires de temps; Toutefois, ceux-ci doivent être cohérentes entre les expériences dans le même laboratoire. </li></ol> 2. Suivi du cycle oestral: Ecouvillon vaginal Smearing et Procédure de coloration <ol><li> Ajouter une solution saline à 0,9% (chlorure de sodium dissous dans l&#39;eau distillée). Humidifiez un coton-tige dans cette solution. Éponger la pointe avec une serviette en papier pour éviter la sursaturation, ce qui pourrait conduire à la collecte insuffisante de l&#39;échantillon ou la perte de cellules. Tenant la queue vers le haut loin de l&#39;ouverture vaginale, insérez délicatement le coton-tige dans le canal vaginal et rouler autour des murs pour capturer les cellules vaginales lâches. </li><li> Si l&#39;animal urine sur le litpointe de tonnes, le remplacer par un nouveau, que la contamination de l&#39;urine, il sera difficile pour l&#39;identification de phase. Soyez extrêmement prudent pour ne pas causer de la détresse à l&#39;animal au cours de cette procédure, car l&#39;exposition au stress va perturber le cycle oestral. Lorsque pistonnage, visent à parvenir à une insertion rapide et retrait qui ne est pas trop profonde à minimiser la stimulation supplémentaire pour le col, ce qui peut induire pseudogestation. REMARQUE: pseudogestation peut être identifié comme un cycle oestral acyclique qui dure généralement pendant environ 12 jours, ce est à dire jours consécutifs de dioestrus 25. </li><li> Retirez délicatement l&#39;embout applicateur et le rouler sur une lame de microscope pré-étiquetés. Evitez d&#39;appuyer trop fort trop de liquide sur la lame peut rendre l&#39;identification de phase difficile une fois sec. NOTE: Une diapositive peut contenir plusieurs jours pour chaque animal, même si cela peut être fait en fonction des préférences individuelles. </li><li> Assurez-vous que les transferts échantillon sur la diapositive. Prélever des échantillons pour Several jours consécutifs sur une diapositive à être en mesure de mieux suivre et identifier les phases quotidiennes oestraux changements. NOTE: Si possible, il est aussi idéal si les personnes qui recueillent des échantillons restent les mêmes pour tous les animaux. </li><li> Une fois que la lame est sèche, commencer le protocole de coloration pour l&#39;identification des phases. En utilisant le kit de coloration (voir le tableau des matériaux), immergez diapositives 10 fois dans le fixateur (bleu clair), 10 fois dans la solution de coloration (rose), et 5 fois dans une solution de contraste (violet). Rincer les lames délicatement sous l&#39;eau courante. Laissez sécher à l&#39;air complètement diapositives avant l&#39;examen au microscope. NOTE: Le cycle long oestrus généralement 4-5 jours se compose de (dans cet ordre): l&#39;oestrus (E), metestrus (M), dioestrus (D), et proestrus (P) 26. Oestrus est caractérisé par bleu, cellules cornées metestrus par les leucocytes, et une combinaison de cellules cornées et nucléées, diestrus est similaire à metestrus en présence de types de cellules, sauf qu&#39;ils sont très rares, et par des agrégats proestrus pourpre teintéles cellules nucléées de (figure 1). Il existe différentes procédures de coloration, en plus de ceux décrits ci-dessus, qui sont tout aussi efficace pour frottis vaginal cytologie. </li><li> Prélever des échantillons pendant au moins deux cycles complets (~ 8-10 jours) afin de suivre les phases précision avant l&#39;expérimentation. Soyez cohérent avec le moment de la journée les échantillons sont prélevés. Prélever des échantillons de frottis vaginal tous les jours pendant et jusqu&#39;à la fin de l&#39;expérience. </li></ol> 3. pré-exposition <ol><li> Avant le début de l&#39;expérience, de pré-exposer les animaux au conditionnement chambres permettent aux animaux de se acclimater au contexte (chambres de conditionnement) avant le test comportemental. <ol><li> Pré-exposer les femmes à des chambres de conditionnement (situés dans des boîtes sonores atténuation) avec les lumières de la maison pendant 20 à 30 minutes par jour pendant 3 jours avant toute expérimentation. Attribuer la boîte, ils sont pré-exposés à leur chambre pour l&#39;étude. Nettoyer soigneusement til boîtes (murs et plateaux) entre les sessions et les animaux pour enlever les odeurs, car ils peuvent influer sur le comportement et le cycle oestral. </li></ol></li></ol> 4. Jour 1: accoutumance / conditionnement de la peur <ol><li> Une fois que les animaux ont été vérifiés pour être en phase oestrus de leurs cycles oestraux, commencer la phase d&#39;accoutumance / conditionnement de l&#39;expérience 3-jours. <ol><li> Prenez pré-ton mesures de base de gel (CS) des présentations avant la première tonalité stimulus conditionné sur chaque jour de l&#39;expérience. Pour ce faire, par l&#39;acquisition de scores pour cent de congélation (calculé en divisant les secondes passées immobiles par la durée de l&#39;essai, multiplié par 100) au cours de l&#39;intervalle de temps stimulus-absent au début du premier procès CS-alone avant le début CS. NOTE: Ces mesures peuvent être utilisées pour évaluer et comparer les niveaux de gel de base avec ceux au cours accoutumance, le conditionnement, l&#39;extinction, et le rappel. </li><li> Pour assurer la formation d&#39;extinction pendant la phase de metestrus,conditionner les rats dans leur dernier jour de l&#39;oestrus. Swab et d&#39;identifier la phase d&#39;oestrus (étape 2) chaque jour avant de commencer le protocole expérimental (conditionné / extinction / rappel). Comme la phase oestrus peut durer plus d&#39;une journée, l&#39;histoire de cycle d&#39;utilisation de prédire la longueur des phases pour déterminer quand les animaux sont prêts à commencer la formation. </li></ol></li><li> Dans les chambres de conditionnement, connectez pied-choc plancher grillagé à un générateur de stimulation électrique. Utilisez un niveau de stimulation de 0,5 à 0,6 mA que le stimulus inconditionnel (US). Utilisez un 4 kHz, 80 dB ton que le stimulus conditionné (CS). REMARQUE: Ces paramètres peuvent varier selon les laboratoires et peut être modifié pour le conditionnement optimal. <ol><li> Si le programme d&#39;analyse de congélation nécessite des repères visuels (par opposition à temporelle), co-activer une lumière LED avec le ton. Positionner la lumière à l&#39;extérieur de la chambre opérante, dans la trame vidéo. Au début de chaque essai, activez la lumière LED et le garder allumé jusqu&#39;à la fin de ee procès. NOTE: Cette lumière ne est pas visible par l&#39;animal et ne sert de marqueur pour l&#39;initiation et à la fin de l&#39;essai dans les fichiers vidéo enregistrés (à utiliser pour mesurer le comportement de congélation). </li></ol></li><li> Placez les animaux dans les chambres de conditionnement pour cinq essais CS-seules d&#39;accoutumance. Immédiatement après la session d&#39;habituation, effectuer 7 paires essais CS-américaines de conditionnement de la peur. Assurez-vous que le ton CS dure 30 sec et coterminates le choc 0,5 sec US. D&#39;effectuer des essais dans toutes les sessions (habituation, le conditionnement, l&#39;extinction, et de rappel) avec un intervalle intertrial variable de 3 minutes en moyenne. </li><li> A la fin de la session de conditionnement, les animaux revenir dans leur cage d&#39;origine et à l&#39;animalerie jusqu&#39;au lendemain. </li></ol> 5. Jour 2: Préparation Estradiol <ol><li> Swab et d&#39;identifier la phase d&#39;oestrus pour tous les animaux qui ont subi Jour 1 de ce protocole. Préparer estradiol (également connu sous E2, 17beta-estradiol, oubêta-estradiol) pour un / kg dose de 15 pg par injection sous-cutanée en utilisant l&#39;huile de sésame ou 0,9% de solution saline comme véhicule. </li><li> Pour calculer la quantité d&#39;estradiol pour préparer les injections, utiliser les poids de corps de tous les animaux qui ont été mesurés et enregistrés quand ils ont été conditionnés au jour 1 de ce protocole. </li><li> Faire des calculs de normaliser le volume administré de l&#39;estradiol (soit 0,2 ml) par rat. Depuis estradiol est difficile à dissoudre en raison de son insolubilité dans l&#39;eau et nécessite un grand volume de solvant pour la petite dose, préparer une solution de bouillon en mélangeant estradiol dans l&#39;huile de sésame à feu jusqu&#39;à dissolution. La solution peut ensuite être passé à travers un filtre de 0,22 um pour éliminer les contaminants. Par exemple, ajouter un volume calculé de a / 1 ml d&#39;huile de sésame solution mère de 3000 ug d&#39;estradiol au volume nécessaire totale de l&#39;huile de sésame afin d&#39;obtenir un kg dose de 15 ug / dans un volume de 0,2 ml par injection par animal. NOTE: Vous pouvez également utiliser d&#39;autres formes d&#39;oestrogène tha<html> t sont solubles dans l&#39;eau et plus facile à dissoudre. </li></ol> 6. Jour 2: Administration Estradiol / Formation d&#39;extinction <ol><li> Administrer le sous-cutanée de l&#39;estradiol. Soulever la peau lâche entre l&#39;omoplate par le cou dans un pincement doux et insérer l&#39;aiguille de la seringue dans le triangle formé par les plis de la peau. </li><li> 30 minutes suivantes injections sous-cutanées de l&#39;estradiol, placer les animaux dans les chambres de conditionnement encore et commencer la formation d&#39;extinction. Dans cette session d&#39;extinction, effectuer 20 essais CS-seuls, avec chaque essai constitué d&#39;un 30 sec, 4 kHz, 80 dB ton, présenté à un intervalle intertrial variables moyenne 3 min. NOTE: L&#39;effet de l&#39;estradiol sur le rappel se produit lorsque l&#39;estradiol est administrée avant la formation d&#39;extinction ou immédiatement après extinction. L&#39;effet ne est pas observé quatre heures après l&#39;extinction, il est donc recommandé d&#39;injecter près à temps pour le début ou la fin de la session de formation de 15. </li></ol>. le &quot;&gt; 7 Jour 3: Extinction Rappel <ol><li> 24 heures après la formation d&#39;extinction, tamponner les animaux qui ont rempli Jour 1 et 2 de ce protocole. </li><li> Placez les animaux dans leurs chambres de conditionnement assignées (les mêmes que Jour 1 et 2). Commencez la session de rappel d&#39;extinction en présentant trois essais CS-seuls (les trois essais de rappel d&#39;extinction), qui se compose de seulement 3,80 dB essais CS-seul avec intervalles intertrial similaires aux 20 essais administrés pour la formation d&#39;extinction comme décrit dans l&#39;étape 6.2. </li><li> À la fin de la session de rappel, renvoyer les animaux dans leurs cages à domicile. </li></ol> 8. Analyse des données <ol><li> Acquérir des données comportementales grâce à la vidéo et de les analyser à l&#39;aide de logiciels informatiques. NOTE: Gel scores peuvent également être comptés manuellement par un expérimentateur qui est aveugle au traitement de la toxicomanie par temps de combats de gel lors de la présentation CS de chaque essai, exprimée en pourcentage du temps passé gel pendant le ton. La congélation estdéfinie par l&#39;absence totale de mouvement à l&#39;exception de la respiration au cours des 30 essais sec CS-américains. Calculer pour cent congélation en divisant les secondes passées congélation (immobile) par 30 secondes (durée de l&#39;essai), multiplié par 100. </li></ol>

<ol>
	<li>Baron-Cohen, S., Knickmeyer, R. C., Belmonte, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences+in+the+brain:+implications+for+explaining+autism.">Sex differences in the brain: implications for explaining autism.</a> Science. 310 (5749), 819-823 (2005).</li><li>Voyer, D., Voyer, S., Bryden, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnitude+of+sex+differences+in+spatial+abilities:+a+meta-analysis+and+consideration+of+critical+variables.">Magnitude of sex differences in spatial abilities: a meta-analysis and consideration of critical variables.</a> Psychological Bulletin. 117 (2), 250-270 (1995).</li><li>Pinker, S., Spelke, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Conversation+with+Steven+Pinker+and+Elizabeth+Spelke.">A Conversation with Steven Pinker and Elizabeth Spelke.</a> The Science of Gender and Science. , (2005).</li><li>Hampson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen-related+variations+in+human+spatial+and+articulatory-motor+skills.">Estrogen-related variations in human spatial and articulatory-motor skills.</a> Psychoneuroendocrinology. 15, 97-111 (1990).</li><li>Hampson, E., Kimura, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+effects+of+hormonal+fluctuations+on+human+motor+and+perceptual-spatial+skills.">Reciprocal effects of hormonal fluctuations on human motor and perceptual-spatial skills.</a> Behavioral Neuroscience. 102, 456-459 (1988).</li><li>Hampson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variations+in+sex-related+cognitive+abilities+across+the+menstrual+cycle.">Variations in sex-related cognitive abilities across the menstrual cycle.</a> Brain and Cognition. 14 (1), 26-43 (1990).</li><li>Kilpatrick, D. G., Resnick, H. S., Milanak, M. E., Miller, M. W., Keyes, K. M., Friedman, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=National+estimates+of+exposure+to+traumatic+events+and+PTSD+prevalence+using+DSM-IV+and+DSM-5+criteria.">National estimates of exposure to traumatic events and PTSD prevalence using DSM-IV and DSM-5 criteria.</a> Journal of Traumatic Stress. 26 (5), 537-547 (2013).</li><li>Breslau, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender+differences+in+trauma+and+posttraumatic+stress+disorder.">Gender differences in trauma and posttraumatic stress disorder.</a> Journal of Gender-Specific Medicine. 5 (1), 34-40 (2002).</li><li>Frans, O., Rimmo, P. A., Aberg, L., Fredrikson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trauma+exposure+and+post-traumatic+stress+disorder+in+the+general+population.">Trauma exposure and post-traumatic stress disorder in the general population.</a> Acta Psychiatrica Scandinavica. 111 (4), 291-299 (2005).</li><li>Breslau, N., Kessler, R. C., Chilcoat, H. D., Schultz, L. R., Davis, G. C., Andreski, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trauma+and+posttraumatic+stress+disorder+in+the+community:+the+1996+Detroit+Area+Survey+of+Trauma.">Trauma and posttraumatic stress disorder in the community: the 1996 Detroit Area Survey of Trauma.</a> Archives of General Psychiatry. 55 (7), 626-632 (1996).</li><li>Seedat, S., Stein, D. J., Carey, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-traumatic+stress+disorder+in+women:+epidemiological+and+treatment+issues.">Post-traumatic stress disorder in women: epidemiological and treatment issues.</a> CNS Drugs. 19 (5), 411-427 (2005).</li><li>Holbrook, T. L., Hoyt, D. B., Stein, M. B., Sieber, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender+differences+in+long-term+posttraumatic+stress+disorder+outcomes+after+major+trauma:+women+are+at+higher+risk+of+adverse+outcomes+than+men.">Gender differences in long-term posttraumatic stress disorder outcomes after major trauma: women are at higher risk of adverse outcomes than men.</a> Journal of Trauma. 53 (5), 882-888 (2002).</li><li>Labad, J., Menchon, J. M., Alonso, P., Segalas, C., Jimenez, S., Jaurrieta, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender+differences+in+obsessive-compulsive+symptom+dimensions.">Gender differences in obsessive-compulsive symptom dimensions.</a> Depression and Anxiety. 25 (10), 832-838 (2008).</li><li>Gupta, R. R., Sen, S., Diepenhorst, L. L., Rudick, C. N., Maren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+modulates+sexually+dimorphic+contextual+fear+conditioning+and+hippocampal+long-term+potentiation+(LTP)+in+rats.">Estrogen modulates sexually dimorphic contextual fear conditioning and hippocampal long-term potentiation (LTP) in rats.</a> Brain Research. 888, 356-365 (2001).</li><li>Milad, M. R., Igoe, S. A., Lebron-Milad, K., Novales, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrous+cycle+phase+and+gonadal+hormones+influence+conditioned+fear+extinction.">Estrous cycle phase and gonadal hormones influence conditioned fear extinction.</a> Neuroscience. 164 (3), 887-895 (2009).</li><li>Zeidan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estradiol+modulates+medial+prefrontal+cortex+and+amygdala+activity+during+fear+extinction+in+women+and+female+rats.">Estradiol modulates medial prefrontal cortex and amygdala activity during fear extinction in women and female rats.</a> Biological Psychiatry. 70 (10), 920-927 (2011).</li><li>Lebron-Milad, K., Milad, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences,+gonadal+hormones+and+the+fear+extinction+network:+implications+for+anxiety+disorders.">Sex differences, gonadal hormones and the fear extinction network: implications for anxiety disorders.</a> Biology of Mood &amp; Anxiety Disorders. 2 (3), (2012).</li><li>Rey, C. D., Lipps, J., Shansky, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+d1+receptor+activation+rescues+extinction+impairments+in+low-estrogen+female+rats+and+induces+cortical+layer-specific+activation+changes+in+prefrontal-amygdala+circuits.">Dopamine d1 receptor activation rescues extinction impairments in low-estrogen female rats and induces cortical layer-specific activation changes in prefrontal-amygdala circuits.</a> Neuropsychopharmacology. 39 (5), 1282-1289 (2013).</li><li>Str&#246;m, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovariectomy+and+17&#946;-estradiol+Replacement+in+Rats+and+Mice:+A+Visual+Demonstration.">Ovariectomy and 17&#946;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration.</a> Journal of Visualized Experiments. , e4013 (2012).</li><li>Markham, J. A., Pych, J. C., Juraska, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovarian+hormone+replacement+to+aged+ovariectomized+female+rats+benefits+acquisition+of+the+morris+water+maze.">Ovarian hormone replacement to aged ovariectomized female rats benefits acquisition of the morris water maze.</a> Hormones &amp; Behavior. 42 (3), 284-293 (2002).</li><li>Markowska, A. L., Savonenko, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+of+estrogen+replacement+in+restoration+of+cognitive+function+after+long-term+estrogen+withdrawal+in+aging+rats.">Effectiveness of estrogen replacement in restoration of cognitive function after long-term estrogen withdrawal in aging rats.</a> Journal of Neuroscience. 22 (24), 10985-10995 (2002).</li><li>Bredemann, T. M., McMahon, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=17&#946;+Estradiol+Increases+Resilience+and+Improves+Hippocampal+Synaptic+Function+in+Helpless+Ovariectomized+Rats.">17&#946; Estradiol Increases Resilience and Improves Hippocampal Synaptic Function in Helpless Ovariectomized Rats.</a> Psychoneuroendocrinology. 42, 77-88 (2014).</li><li>Grueso, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early,+but+not+late+onset+estrogen+replacement+therapy+prevents+oxidative+stress+and+metabolic+alterations+caused+by+ovariectomy.">Early, but not late onset estrogen replacement therapy prevents oxidative stress and metabolic alterations caused by ovariectomy.</a> Antioxidants and Redox Signaling. 20 (2), 236-246 (2014).</li><li>Shughrue, P. J., Bushnell, C. D., Dorsa, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+receptor+messenger+ribonucleic+acid+in+female+rat+brain+during+the+estrous+cycle:+a+comparison+with+ovariectomized+females+and+intact+males.">Estrogen receptor messenger ribonucleic acid in female rat brain during the estrous cycle: a comparison with ovariectomized females and intact males.</a> Endocrinology. 131 (1), 381-388 (1992).</li><li>Frye, C. A., Erskine, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+time+of+mating+and+paced+copulation+on+induction+of+pseudopregnancy+in+cyclic+female+rats.">Influence of time of mating and paced copulation on induction of pseudopregnancy in cyclic female rats.</a> Journal of Reproduction and Fertility. 90 (2), 375-385 (1990).</li><li>Becker, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+and+methods+for+research+on+sex+differences+in+brain+and+behavior.">Strategies and methods for research on sex differences in brain and behavior.</a> Endocrinology. 146, 1650-1673 (2005).</li><li>Westwood, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+female+rat+reproductive+cycle:+a+practical+histological+guide+to+staging.">The female rat reproductive cycle: a practical histological guide to staging.</a> Toxicologic Pathology. 36 (3), 375-384 (2008).</li><li>Hurn, P. D., Macrae, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+as+a+Neuroprotectant+in+Stroke.">Estrogen as a Neuroprotectant in Stroke.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 20, 631-652 (2000).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology and Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Gillies, G. E., McArthur, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+actions+in+the+brain+and+the+basis+for+differential+action+in+men+and+women:+a+case+for+sex-specific+medicines.">Estrogen actions in the brain and the basis for differential action in men and women: a case for sex-specific medicines.</a> Pharmacological Reviews. 62 (2), 155-198 (2010).</li><li>Tolin, D. F., Foa, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences+in+trauma+and+posttraumatic+stress+disorder:+a+quantitative+review+of+25+years+of+research.">Sex differences in trauma and posttraumatic stress disorder: a quantitative review of 25 years of research.</a> Psychological Bulletin. 132, 959-992 (2006).</li></ol>

Les auteurs de ce manuscrit ont aucun intérêt financier concurrentes ou d&#39;autres conflits d&#39;intérêts à divulguer.

Peur extinction a été largement étudiée chez les rats mâles avec les mécanismes neuraux conditionné extinction de la peur identifié et évalué en vertu de diverses manipulations. Relativement peu d&#39;études ont examiné les rats femelles ou le rôle des hormones gonadiques dans la peur extinction. Pour étudier spécifiquement les effets des œstrogènes sur la peur extinction, vélo naturellement rats femelles sont soumis à un paradigme comportemental trois jours. Cette procédure consiste à phases accout...

Différences entre les sexes sont inhérentes observées dans divers comportements cognitifs et des paradigmes d&#39;apprentissage chez les humains et les rongeurs. Par exemple, il a été rapporté que les femmes ont généralement des capacités verbales et le souci du détail plus fortes, alors que les hommes ont de meilleures aptitudes spatiales 1-3. Ces différences entre les sexes peuvent être dues en partie à l&#39;influence des hormones gonadiques. Des niveaux élevés d&#39;estradiol améliorer les performances sur des tâches où les femmes sont mieux, mais aggravent la performance sur les tâches que les hommes font généralement bien 4-6. Bien que cette preuve est incontestable, la capacité limitée de contrôler complètement les environnements expérimentaux dans les études humaines, il est difficile de déterminer si ces effets sur le comportement peuvent être attribués spécifiquement aux hormones. Les études animales, en revanche, permettent de circonstances totalement contrôlées. Bien que les mécanismes neuronaux de base de la peur extinction ont été identifiés et sont bien étudiés chez les hommes, il est difficile de savoir sices systèmes sont les mêmes chez les femelles ou leur évolution au cours du cycle œstral. Conditionnement de la peur et l&#39;extinction sont largement utilisés paradigmes comportementaux chez les rongeurs et les humains de mener des études liées à des troubles de l&#39;anxiété. Étant donné que les femmes ont un risque plus élevé pour les troubles anxieux ainsi que la durée des symptômes et la gravité supérieur 7-13, il est essentiel de comprendre les femmes dans ces études. La sous-représentation des femmes dans cette recherche peut être attribuée aux défis de la surveillance de phase oestrus et comptable pour les effets sur le comportement des hormones sexuelles. Les laboratoires qui ne examinent les femmes à cet égard des questions de rencontre qui vont souvent non déclarée ou ne sont pas décrits dans les méthodes de leurs études. De nouvelles preuves chez les rongeurs suggèrent que les différences sexuelles dans la peur extinction sont modulés par les hormones gonadiques 14-18. Dans conditionnement de la peur, les animaux sont formés à craindre un stimulus particulier. Après un certain nombre de présentations non renforcés dele stimulus, les animaux apprennent pas à craindre la queue, un processus appelé extinction. Comment bien l&#39;animal apprend et consolide la mémoire de l&#39;apprentissage de cette tâche peut être observé lors d&#39;un test de rappel de disparaître étant donné un certain temps après la formation d&#39;extinction. Moins expression de la peur pendant le rappel d&#39;extinction démontre une bonne consolidation de la mémoire d&#39;extinction. Les résultats récents de notre laboratoire suggèrent que l&#39;oestrogène peut moduler la consolidation de la mémoire de l&#39;extinction de la peur et améliorer le rappel d&#39;extinction. Plus précisément, les rats femelles qui sont éteints dans proestrus, la phase du cycle œstral durant laquelle taux d&#39;estrogènes circulants pic, présentent meilleure rétention de la mémoire d&#39;extinction. En revanche, les femmes qui sont éteints dans le bas-oestrogène affichage des phases de metestrus relativement pauvre de rappel d&#39;extinction, qui peuvent être améliorées avec l&#39;administration de l&#39;estradiol exogène avant ou immédiatement après la formation d&#39;extinction 15,16. Les mécanismes neuronaux de l&#39;extinction consolidation de la mémoire (de inclCOMPRIS le rôle des hormones gonadiques) chez les femmes ne sont pas claires. Chez les animaux de laboratoire, le rôle des hormones peut être étudiée en utilisant des procédures d&#39;éloignement chirurgicales invasives comme la castration et de l&#39;ovariectomie. Après récupération de la chirurgie, les hormones gonadiques sont souvent manipulés de manière exogène pendant l&#39;exécution d&#39;une tâche comportementale 19. Cette approche a fourni des informations essentielles sur les hormones sexuelles et est utile car il permet des manipulations bien contrôlée d&#39;hormones gonadiques (en termes de calendrier et de la dose) 20-23. Cette approche, cependant, ne permet pas d&#39;évaluer l&#39;influence des fluctuations naturelles qui se produisent à travers le cycle oestral, ni ne représentent qu&#39;elles animaux &quot;normaux&quot;, ce qui limite le potentiel de translation à des études humaines. Il a été bien documenté que les niveaux d&#39;hormones sexuelles femelles pic et du déclin à des phases spécifiques du cycle oestral, et les changements d&#39;expression du récepteur de l&#39;oestrogène dans le cycle,et après ovariectomie 24. Ainsi, il est nécessaire de mener des études sur les femmes ayant des gonades intactes et d&#39;affiner des modèles expérimentaux pour étudier de manière fiable les effets que les états haut et bas oestrogènes peuvent avoir sur les femmes tout au long de leur durée de vie. Ce protocole met l&#39;accent sur l&#39;effet des œstrogènes sur les systèmes neurobiologiques impliqués dans la peur extinction. Il décrit comment: 1) de suivre de près le cycle oestral, 2) préparer les doses efficaces d&#39;estradiol pour l&#39;administration systémique, et 3) suivre un paradigme comportemental qui inclut conditionnement de la peur, de l&#39;extinction, et de rappeler dans le cyclisme naturellement les rats femelles. Ce protocole peut être modifié avec d&#39;autres manipulations pharmacologiques et des outils cellulaires et moléculaires à l&#39;aide des études pour mieux comprendre les différences de sexe qui sont observés dans le comportement conditionné craindre d&#39;extinction. A noter que les modes opératoires décrits ci-dessous sont celles utilisées à l&#39;intérieur de notre laboratoire, et il existe un certain nombre de variantes de ces procédures in la littérature.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="613">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">Name</td>
			<td style="width:159px;">Company</td>
			<td style="width:135px;">Catalog number</td>
			<td style="width:199px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Fear conditioning chamber</td>
			<td style="width:159px;">Coulbourn Instruments</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">Graphic State</td>
			<td style="width:159px;">Coulbourn Instruments</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Sound-attenuating box</td>
			<td style="width:159px;">Med Associates, Inc.</td>
			<td style="width:135px;">NIR-022MD</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Estradiol</td>
			<td style="width:159px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">E1024</td>
			<td style="width:199px;">In sesame oil for subcutaneous injection</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">Sesame oil</td>
			<td style="width:159px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:135px;">S3547-250ML</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">Freezescan</td>
			<td style="width:159px;">Cleversys, Inc.</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Dip quick stain</td>
			<td style="width:159px;">Jorgensen Laboratories, Inc.</td>
			<td style="width:135px;">J0322A1, J0322A2, J0322A3</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Cotton-tipped applicators</td>
			<td style="width:159px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:135px;">23-400-114</td>
			<td style="width:199px;">6-inch, sterile</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">0.9% saline</td>
			<td style="width:159px;">LabChem, Inc.</td>
			<td style="width:135px;">LC23460-2</td>
			<td style="width:199px;">Sodium chloride w/v</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Selectfrost microscope slides</td>
			<td style="width:159px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:135px;">12-550-003</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:120px;">Virex II 256</td>
			<td style="width:159px;">Diversey, Inc.</td>
			<td style="width:135px;">5019317</td>
			<td style="width:199px;">Dilute 1:256 with water</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:120px;">Luer-Lok Tip 1ml Syringes</td>
			<td style="width:159px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:135px;">309628</td>
			<td style="width:199px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:120px;">Hypodermic disposable needles</td>
			<td style="width:159px;">Exelint International, Co.</td>
			<td style="width:135px;">26402</td>
			<td style="width:199px;">26-gauge</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protocol for studying extinction of conditioned fear in naturally cycling female rats

Extinction de la peur conditionnée a été largement étudiée chez les rongeurs mâles. Récemment, il ya eu un nombre croissant d&#39;études indiquant que les mécanismes neuronaux pour certaines tâches comportementales et les comportements de réponse sont différents chez les femelles et les mâles. Utilisation de femelles dans les études de recherche peut représenter un défi en raison de la variation des hormones gonadiques au cours de leur cycle oestral. Ce protocole décrit les procédures bien établies qui sont utiles dans les enquêtes sur le rôle des œstrogènes dans la peur consolidation de la mémoire d&#39;extinction chez les rats femelles. Phase du cycle oestral et de l&#39;administration de l&#39;oestrogène exogène avant la formation d&#39;extinction peut influencer le rappel d&#39;extinction 24 h plus tard. La technique de lubrification vaginale pour l&#39;identification de phase oestrus décrit ici facilite l&#39;examen et la manipulation de vélo naturellement hormones gonadiques. L&#39;utilisation de ce modèle de rongeur de base peut en outre définir les mécanismes par lesquels les œstrogènes peut moduler la mémoire d&#39;extinction de la peur dansfemelles.

Dans ce protocole de rappel peur d&#39;extinction, pour cent gel a été mesurée comme un indicateur de la peur. Les animaux qui éteints bien et gardé le souvenir de la formation d&#39;extinction exposées faible peur sur le dernier jour de l&#39;essai de comportement pendant le rappel d&#39;extinction. Rats mâles et femelles ne diffèrent pas de manière significative dans l&#39;expression de la peur conditionnée pendant le conditionnement, l&#39;extinction, et rappellent phases (figure 2). Cepend...

Watch this Scientific Journal Video about Protocol for Studying Extinction of Conditioned Fear in Naturally Cycling Female Rats at JoVE.com

Protocol for Studying Extinction of Conditioned Fear in Naturally Cycling Female Rats

Gonadal hormones such as estrogen modulate memory formation in a number of experimental paradigms including fear extinction memory. This protocol describes a set of methods for investigating the influence of gonadal hormones specifically during extinction in naturally cycling females, including estrous cycle monitoring and exogenous estrogen administration.

Protocole pour l&#39;étude de l&#39;extinction de la peur conditionnée dans le cyclisme Naturellement rats femelles

Extinction of conditioned fear has been extensively studied in male rodents. Recently, there have been an increasing number of studies indicating that ...

protocol-for-studying-extinction-conditioned-fear-naturally-cycling

Research

JoVE Journal

Behavior

13.1K vues.  Massachusetts General Hospital. Gonadal hormones such as estrogen modulate memory formation in a number of experimental paradigms including fear extinction memory. This protocol describes a set of methods for investigating the influence of gonadal hormones specifically during extinction in naturally cycling females, including estrous cycle monitoring and exogenous estrogen administration.

Vidéo: Protocol for Studying Extinction of Conditioned Fear in Naturally Cycling Female Rats

Stereotaxic Microinjection of Viral Vectors Expressing Cre Recombinase to Study the Role of Target Genes in Cocaine Conditioned Place Preference

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes of interest allows for enhanced temporally- and regionally-specific control of gene deletion, compared to existing methods. While conditional deletion can also be achieved by mating mice that express Cre recombinase under the control of specific gene promoters with mice carrying a floxed gene, stereotaxic microinjection allows for targeting of discrete brain areas at experimenter-determined time points of interest. In the context of cocaine conditioned place preference, and other cocaine behavioral paradigms such as self-administration or psychomotor sensitization that can involve withdrawal, extinction and/or reinstatement phases, this technique is particularly useful in exploring the unique contribution of target genes to these distinct phases of behavioral models of cocaine-induced plasticity. Specifically, this technique allows for selective ablation of target genes during discrete phases of a behavior to test their contribution to the behavior across time. Ultimately, this understanding allows for more targeted therapeutics that are best able to address the most potent risk factors that present themselves during each phase of addictive behavior.

This article describes how to microinject viral vectors into mouse brain and then test in a conditioned place preference paradigm that includes an acquisition, extinction and reinstatement phase.

La micro-injection stéréotaxique de vecteurs viraux exprimant la recombinase Cre pour étudier le rôle des gènes cibles de cocaïne préférence de place conditionnée

Microinjecting recombinant adenoassociated viral (rAAV) vectors expressing Cre recombinase into distinct mouse brain regions to selectively knockout genes ...

Recherche

Sciences du comportement

A Procedure to Study the Effect of Prolonged Food Restriction on Heroin Seeking in Abstinent Rats

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during abstinence. Moreover, various environmental challenges can exacerbate this effect, as well as increase ongoing drug intake.
The procedure we describe here highlights the impact of a common environmental challenge, food restriction, on drug craving that is expressed as an augmentation of drug seeking in abstinent rats.
Rats are implanted with chronic intravenous i.v. catheters, and then trained to press a lever for i.v. heroin over a period of 10-12 days. Following the heroin self-administration phase the rats are removed from the operant conditioning chambers and housed in the animal care facility for a period of at least 14 days. While one group is maintained under unrestricted access to food (sated group), a second group (FDR group) is exposed to a mild food restriction regimen that results in their body weights maintained at 90% of their nonrestricted body weight. On day 14 of food restriction the rats are transferred back to the drug-training environment, and a drug-seeking test is run under extinction conditions (i.e.&#160;lever presses do not result in heroin delivery).
The procedure presented here results in a highly robust augmentation of heroin seeking on test day in the food restricted rats. In addition, compared to the acute food deprivation manipulations we have used before, the current procedure is a more clinically relevant model for the impact of caloric restriction on drug seeking. Moreover, it might be closer to the human condition as the rats are not required to go through an extinction-training phase before the drug-seeking test, which is an integral component of the popular reinstatement procedure.

A procedure that allows a demonstration of robust augmentation of drug seeking in food-restricted rats is described. Following heroin self-administration training, rats go through an abstinence period, in a drug-free environment, during which they are mildly food restricted. Drug seeking is then tested in the drug-associated environment.

Une procédure d&#39;étudier l&#39;effet de la restriction alimentaire prolongée sur l&#39;héroïne cherche à rats abstinents

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during ...

Contextual and Cued Fear Conditioning Test Using a Video Analyzing System in Mice

The contextual and cued fear conditioning test is one of the behavioral tests that assesses the ability of mice to learn and remember an association between environmental cues and aversive experiences. In this test, mice are placed into a conditioning chamber and are given parings of a conditioned stimulus (an auditory cue) and an aversive unconditioned stimulus (an electric footshock). After a delay time, the mice are exposed to the same conditioning chamber and a differently shaped chamber with presentation of the auditory cue. Freezing behavior during the test is measured as an index of fear memory. To analyze the behavior automatically, we have developed a video analyzing system using the ImageFZ application software program, which is available as a free download at http://www.mouse-phenotype.org/. Here, to show the details of our protocol, we demonstrate our procedure for the contextual and cued fear conditioning test in C57BL/6J mice using the ImageFZ system. In addition, we validated our protocol and the video analyzing system performance by comparing freezing time measured by the ImageFZ system or a photobeam-based computer measurement system with that scored by a human observer. As shown in our representative results, the data obtained by ImageFZ were similar to those analyzed by a human observer, indicating that the behavioral analysis using the ImageFZ system is highly reliable. The present movie article provides detailed information regarding the test procedures and will promote understanding of the experimental situation.

This article presents a protocol for a contextual and cued fear conditioning test using a video analyzing system to assess fear learning and memory in mice.

Contextuelles et Cued conditionnement de la peur de test en utilisant un système d&#39;analyse de la vidéo chez des souris

The contextual and cued fear conditioning test is one of the behavioral tests that assesses the ability of mice to learn and remember an association ...

Trace Fear Conditioning in Mice

In this experiment we present a technique to measure learning and memory. In the trace fear conditioning protocol presented here there are five pairings between a neutral stimulus and an unconditioned stimulus. There is a 20 sec trace period that separates each conditioning trial. On the following day freezing is measured during presentation of the conditioned stimulus (CS) and trace period. On the third day there is an 8 min test to measure contextual memory. The representative results are from mice that were presented with the aversive unconditioned stimulus (shock) compared to mice that received the tone presentations without the unconditioned stimulus. Trace fear conditioning has been successfully used to detect subtle learning and memory deficits and enhancements in mice that are not found with other fear conditioning methods. This type of fear conditioning is believed to be dependent upon connections between the medial prefrontal cortex and the hippocampus. One current controversy is whether this method is believed to be amygdala-independent. Therefore, other fear conditioning testing is needed to examine amygdala-dependent learning and memory effects, such as through the delay fear conditioning.

In the following experiment we describe a protocol for trace fear conditioning in mice. This type of associative memory includes a trace period that separates the neutral stimulus and the unconditioned stimulus.

Trace conditionnement de la peur chez la souris

In this experiment we present a technique to measure learning and memory. In the trace fear conditioning protocol presented here there are five pairings ...

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate drug-seeking behavior and prompt relapse in abstinent drug users. We have developed a procedure to study the behavioral and neural processes that mediate the impact of context on alcohol-seeking behavior in rats. Following acclimation to the taste and pharmacological effects of 15% ethanol in the home cage, male Long-Evans rats receive Pavlovian discrimination training (PDT) in conditioning chambers. In each daily (Mon-Fri) PDT session, 16 trials each of two different 10 sec auditory conditioned stimuli occur. During one stimulus, the CS+, 0.2 ml of 15% ethanol is delivered into a fluid port for oral consumption. The second stimulus, the CS-, is not paired with ethanol. Across sessions, entries into the fluid port during the CS+ increase, whereas entries during the CS- stabilize at a lower level, indicating that a predictive association between the CS+ and ethanol is acquired. During PDT each chamber is equipped with a specific configuration of visual, olfactory and tactile contextual stimuli. Following PDT, extinction training is conducted in the same chamber that is now equipped with a different configuration of contextual stimuli. The CS+ and CS- are presented as before, but ethanol is withheld, which causes a gradual decline in port entries during the CS+. At test, rats are placed back into the PDT context and presented with the CS+ and CS- as before, but without ethanol. This manipulation triggers a robust and selective increase in the number of port entries made during the alcohol predictive CS+, with no change in responding during the CS-. This effect, referred to as context-induced renewal, illustrates the powerful capacity of contexts associated with alcohol consumption to stimulate alcohol-seeking behavior in response to Pavlovian alcohol cues.

A procedure to study the capacity of an alcohol associated environmental context to trigger the renewal of alcohol-seeking behavior in rats is described.

Une procédure pour l&#39;observation de renouvellement induite contexte-de pavlovien conditionné alcool comportement de recherche chez le rat

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

A Treatment Package without Escape Extinction to Address Food Selectivity

Feeding difficulties and feeding disorders are a commonly occurring problem for young children, particularly children with developmental delays including autism. Behavior analytic interventions for the treatment of feeding difficulties oftentimes include escape extinction as a primary component of treatment. The use of escape extinction, while effective, may be problematic as it is also associated with the emergence of challenging behavior (e.g., extinction burst). Such challenging behavior may be an acceptable side effect in treatment cases where feeding problems are severe and chronic (e.g., failure to thrive). However, in more acute cases (e.g., selective eating), the negative side effect may be unwarranted and undesired. More recent research on the behavioral treatment of food selectivity has begun to evaluate treatments for feeding difficulties that do not include escape extinction (e.g., demand fading, behavioral momentum), with some success. However, research to date reveals individual differences in responsiveness to such treatments and no clear preferable treatment has emerged. This manuscript describes a multi-component treatment package that includes shaping, sequential presentation and simultaneous presentation, for the treatment of food selectivity in four young children with developmental delays. This treatment package extends the literature on the behavioral treatment for food selectivity and offers a multi-component treatment protocol that may be clinically applicable across a range of treatment scenarios and settings.

Feeding difficulties are a common problem for children with developmental disorders, including autism, and behavioral interventions often include escape extinction. Recent research has begun to evaluate treatments that do not include escape extinction. This manuscript describes a multicomponent treatment package that does not use escape extinction to treat feeding difficulties.

Un package traitement sans évasion Extinction de lutte alimentaire Sélectivité

Feeding difficulties and feeding disorders are a commonly occurring problem for young children, particularly children with developmental delays including ...

Vagus Nerve Stimulation as a Tool to Induce Plasticity in Pathways Relevant for Extinction Learning

Extinction describes the process of attenuating behavioral responses to neutral stimuli when they no longer provide the reinforcement that has been maintaining the behavior. There is close correspondence between fear and human anxiety, and therefore studies of extinction learning might provide insight into the biological nature of anxiety-related disorders such as post-traumatic stress disorder, and they might help to develop strategies to treat them. Preclinical research aims to aid extinction learning and to induce targeted plasticity in extinction circuits to consolidate the newly formed memory. Vagus nerve stimulation (VNS) is a powerful approach that provides tight temporal and circuit-specific release of neurotransmitters, resulting in modulation of neuronal networks engaged in an ongoing task. VNS enhances memory consolidation in both rats and humans, and pairing VNS with exposure to conditioned cues enhances the consolidation of extinction learning in rats. Here, we provide a detailed protocol for the preparation of custom-made parts and the surgical procedures required for VNS in rats. Using this protocol we show how VNS can facilitate the extinction of conditioned fear responses in an auditory fear conditioning task. In addition, we provide evidence that VNS modulates synaptic plasticity in the pathway between the infralimbic (IL) medial prefrontal cortex and the basolateral complex of the amygdala (BLA), which is involved in the expression and modulation of extinction memory.

Vagus nerve stimulation (VNS) has emerged as a tool to induce targeted synaptic plasticity in the forebrain to modify a range of behaviors. This protocol describes how to implement VNS to facilitate the consolidation of fear extinction memory.

Stimulation du nerf vague comme un outil pour induire la plasticité dans les voies pertinentes pour l&#39;extinction d&#39;apprentissage

Extinction describes the process of attenuating behavioral responses to neutral stimuli when they no longer provide the reinforcement that has been ...

Pavlovian Conditioned Approach Training in Rats

Cues that are contingently paired with unconditioned, rewarding stimuli can acquire rewarding properties themselves through a process known as the attribution of incentive salience, or the transformation of neutral stimuli into attractive, &#34;wanted&#39; stimuli capable of motivating behavior. Pavlovian conditioned approach (PCA) develops after the response-independent presentation of a conditioned stimulus (CS; e.g., a lever) that predicts the delivery of an unconditioned stimulus (US; e.g., a food pellet) and can be used to measure incentive salience. During training, three patterns of conditioned responses (CRs) can develop: sign-tracking behavior (CS-directed CR), goal-tracking behavior (US-directed CR), and an intermediate response (both CRs). Sign-trackers attribute incentive salience to reward-related cues and are more vulnerable to cue-induced reinstatement of drug-seeking as well as other addiction-related behaviors, making PCA a potentially valuable procedure for studying addiction vulnerability. Here, we describe materials and methods used to elicit PCA behavior from rats as well as analyze and interpret PCA behavior in individual experiments.

Here, we present a protocol to elicit Pavlovian conditioned approach behavior in rats. This procedure can be used to measure individual differences in the tendency to approach and attribute incentive salience to reward-related cues and investigate addiction vulnerability.

Pavlovien formation d&#39;approche conditionnée chez le rat

Cues that are contingently paired with unconditioned, rewarding stimuli can acquire rewarding properties themselves through a process known as the ...

Stress-Enhanced Fear Learning, a Robust Rodent Model of Post-Traumatic Stress Disorder

Fear behaviors are important for survival, but disproportionately high levels of fear can increase the vulnerability for developing psychiatric disorders such as post-traumatic stress disorder (PTSD). To understand the biological mechanisms of fear dysregulation in PTSD, it is important to start with a valid animal model of the disorder. This protocol describes the methodology required to conduct stress-enhanced fear learning (SEFL) experiments, a preclinical model of PTSD, in both rats and mice. SEFL was developed to recapitulate critical aspects of PTSD, including long-term sensitization of fear learning caused by an acute stressor. SEFL uses aspects of Pavlovian fear conditioning but produces a distinct and robust sensitized fear response far greater than normal conditional fear responses. The trauma procedure involves placing a rodent in a conditioning chamber and administering 15 unsignaled shocks randomly distributed over 90 minutes (for rat experiments; for mouse experiments, 10 unsignaled shocks randomly distributed over 60 minutes are used). On day 2, rodents are placed in a novel conditioning context where they receive a single shock; then, on day 3 they are placed back in the same context as on day 2 and tested for changes in freezing levels. Rodents that previously received the trauma display enhanced levels of freezing on the test day compared to those that received no shocks on the first day. Thus, with this model, a single highly stressful experience (the trauma) produces extreme fear of the stimuli associated with the traumatic event.

Here we describe the detailed methodology required to conduct stress-enhanced fear learning (SEFL) experiments, a preclinical model of post-traumatic stress disorder, in both rats and mice. The model utilizes aspects of Pavlovian fear conditioning and freezing as an index of enhanced fear in rodents.

Peur stress-Enhanced Learning, un modèle robuste rongeur du syndrome de Stress post-traumatique

Fear behaviors are important for survival, but disproportionately high levels of fear can increase the vulnerability for developing psychiatric disorders ...

A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed incubation of drug craving. Here, we describe a morphine conditioned place preference (CPP) protocol for measuring the incubation of craving in rats. In this protocol, a CPP paradigm mainly employing somatosensory cues is used to establish a long-term reward memory of morphine. A three-chamber CPP box that differs in the texture of the chamber floor is constructed. First, the animals are tested for their baseline preference to the two side chambers for three consecutive days. Then, they are injected intraperitoneally with morphine/saline and put into their non-preferred/preferred chamber for 45 min. After 6 days of conditioning, their preference to the side chambers is tested for 15 min at different time points after the last conditioning session. With this paradigm, the reward memory of morphine could last for at least 18 days. To test whether the above-mentioned protocol can model increased craving, the number of entrances into the two side chambers are counted during the abstinence period. The results show that the entrances increased, suggesting that the CPP paradigm could mimic the incubation of craving. Future studies can employ this model to study neural mechanisms underlying long-term memory and incubation of craving.

Here, a morphine conditioned place preference (CPP) protocol is described to measure incubation of craving in rats.

Un protocole de préférence de Place conditionnée pour la mesure de l’Incubation des envies chez les Rats

A major cause of repeated relapses is a craving for the drug. Drug craving increases progressively during the abstinence period, a phenomenon termed ...