Un modèle animal producible est très important pour la recherche sur l’infection osseuse. Cependant, actuellement, il n’existe pas de modèle de lapin pour lequel le statut des infections et le nombre de bactéries est cohérente. Notre modèle de lapin d’infection d’os emploie une bactérie cohérente et est traité par le sulfate de calcium vancomycine-chargé et les fragments autogènes.
La technique pourrait être étendue au diagnostic de l’infection d’os et de la thérapie non union d’os, et en comprenant la pathogénie de l’infection d’os. Cette méthode pourrait fournir un aperçu d’autres modèles d’infection osseuse chez les rats, les souris et les porcs. Il est difficile de charger le même volume de suspension bactérienne dans la moelle osseuse.
La démonstration visuelle peut aider les chercheurs à effectuer les étapes critiques facilement et avec précision. Pour préparer la suspension bactérienne, dissoudre d’abord 0,5 milligramme de poudre lyophilisé S.aureus dans 0,3 millilitres de milieu de culture LB. Bien mélanger la suspension et stries les bactéries sur des plaques tryptiques d’agar de sy pour leur incubation pendant 16 heures à 37 degrés Celsius.
Le lendemain matin, choisissez une seule unité bactérienne de formation de colonies pour la culture dans des tubes de bouillon de syaptique pendant 24 heures à 37 degrés Celsius. Lorsque les bactéries sont en phase de croissance mi-logarithmique, transférer 1 millilitre de bactéries dans un tube de 1,5 millilitre, et de recueillir les bactéries par centrifugation. Ensuite, lavez la pastille bactérienne de cellules trois fois dans 100 microlitres de PBS par lavage, résuspendant les bactéries dans 3 millilitres de PBS frais après le lavage final.
Pour mettre en place le moule infection osseuse, confirmer un manque de réponse à pincement des pattes dans un mâle de trois mois lapin blanc de Nouvelle-Zélande mâle, et utiliser un rasoir électrique pour enlever les cheveux de la région tibiale proximale contre la direction de la croissance des cheveux. Désinfectez la peau exposée avec la solution d’iode povidone, et utilisez un stylo et une règle pour marquer l’extrémité supérieure du tibia et la position du trou de forage pour l’injection de S.Aureus, en prenant soin que la position du trou de forage est au milieu horizontal du plateau tibial. Ensuite, utilisez un scalpel numéro 11 pour faire une incision dans la peau, suivie d’une incision d’un centimètre dans le péritoine.
À l’aide d’une unité électrique de forage osseux, percer un trou de deux millimètres de diamètre dans le tibia, et appuyez sur le trou avec un diamètre de deux millimètres de deux millimètres de long cylindre de cire osseuse. Enlevez toute cire d’os de rechange le long du plan horizontal du plateau tibial, et confirmez que le trou est plein de cire d’os. Ensuite, utilisez des sutures chirurgicales absorbables pour coudre le périoste et la peau dans une suture verticale de matelas pour empêcher l’animal de mâcher les points de suture.
Et utilisez un injecteur d’asepsie d’un millilitre pour injecter lentement une fois 10 aux huit unités de formation de colonies par millilitre de solution S.Aureus dans le trou de forage. Au septième jour, 14, 21 et 28 après injection, placez les lapins infectés dans un restrainer de lapin avec la tête et l’oreille à l’extérieur du restrainer, et recueillez des échantillons de sang des veines auriculaires pour des globules blancs et l’analyse de protéine C réactive. Après l’anesthésie, utilisez un scalpel numéro 11 pour faire des incisions tibiales et péritonéales centimètre, et nettoyer la cire osseuse.
Ensuite, utilisez une unité de forage osseuse électrique pour percer deux trous adjacents de 4,8 millimètres de diamètre pour débrider l’os nécrotique, et utilisez une cuillère osseuse pour débrider la moelle osseuse nécrotique et le tissu de granulation. Ensuite, racler et nettoyer le tissu osseux entre les deux trous, et étendre un millilitre de la moelle osseuse débrided sur les plaques d’agar de sang des moutons pour une incubation d’une nuit à 37 degrés Celsius. Le lendemain matin, sélectionnez des plaques de 30 à 300 colonies et calculez le nombre d’unités de formation de colonies par animal infecté.
Le 28ème jour après l’infection, ajouter un gramme de poudre d’hydrochlorure de vancomycine à 9,5 grammes de sulfate de calcium de qualité médicale, et utiliser une spatule pour remuer le mélange avec trois millilitres de solution saline normale pendant 30 à 45 secondes. Ajouter le produit mélangé dans un moule flexible en gel de silice, et laisser sécher le produit à température ambiante pendant 15 minutes. Ensuite, fléchissez le moule pour enlever le sulfate de calcium chargé de vancomycine, ou perle de VCS.
Pour le traitement antibiotique et l’implantation de l’os autogène, d’abord, réexposer le tibia blessé avant de raser la région de la queue, et désinfecter la peau de la queue exposée avec la solution d’iode povidone. Utilisez des ciseaux chirurgicaux pour couper la queue, et utilisez des sutures chirurgicales absorbables pour fermer la peau dans une suture verticale de matelas pour empêcher l’animal de mâcher les points de suture. Utilisez un scalpel numéro 11 pour couper la peau de la queue pour révéler l’os de la queue.
Enlevez tout muscle, tissu mou et périoste, et détachez le coccyx à chaque articulation. Transférer les fragments d’os dans un plat en plastique de 100 millimètres contenant de la solution saline stérile. Ensuite, utilisez des ciseaux incurvés pour implanter quatre morceaux de la perle vcs dans la cavité de la moelle tibiale, et utilisez des forceps incurvés pour remplir le défaut osseux avec huit morceaux de fragments de coccyx autogènes.
Ensuite, fermez le périoste et les incisions cutanées avec des sutures chirurgicales absorbables d’une manière de suture de matelas. Les niveaux de protéine C réactive et de globules blancs sont plus élevés dans le groupe modèle d’infection osseuse que chez les animaux témoin. Deux, quatre, six, et huit semaines après le traitement autogène de VCS ou de VCS d’os, la protéine C réactive et les niveaux de globules blancs sont sensiblement réduits.
Les images bidimensionnelles de reconstruction indiquent une augmentation progressive du volume d’os pendant la période de 12 semaines après traitement avec VCS ou VCS et os autogène, alors que la perte d’os est significative dans le groupe modèle non traité d’infection d’os. Pour analyser les indices quantitatifs de régénération osseuse, les images du modèle 3D peuvent être reconstruites à l’aide de données bitmap, et un diamètre ovale de 4,8 millimètres par 9,6 millimètres de longueur région ovale d’intérêt peut être sélectionné dans chaque os. Le rapport du volume d’os au volume de tissu dans le groupe modèle non traité d’infection d’os sont sensiblement inférieurs à ceux mesurés dans le VCS et les groupes d’os autogènes de VCS.
Le nombre trabecular et les scores d’épaisseur dans le groupe autogène d’os de VCS sont sensiblement plus élevés que ceux dans le modèle non traité d’infection d’os et les animaux de VCS. En outre, les scores de séparation trabecular dans le groupe autogène d’os de VCS sont nettement inférieurs à ceux mesurés dans le modèle non traité d’infection d’os et les groupes de VCS. Prenez soin de sélectionner les lapins avec un poids corporel approprié.
Bloquer la solution Staphylococcus aureus avec de la cire osseuse. Débridez complètement l’os nécrotique et perforer les deux trous adjacents de 4,8 millimètres de diamètre. Après la procédure, d’autres méthodes de mesure diagnostique telles que l’échographie, la radiologie et la tomographie par ordinateur peuvent être effectuées pour surveiller les processus pathologiques de l’infection osseuse et de la réparation.
Ce modèle amélioré d’infection d’os et le VCS de combinaison et le traitement autogenous d’os pourraient être utiles en étudiant le mécanisme soulignant de l’infection d’os et de la régénération d’os. Comme la poudre lyophilisé Staphylococcus aureus est dangereuse, la suspension bactérienne doit toujours être préparée dans un laboratoire bactérien isolé.
