Cette méthode peut aider à répondre aux questions clés dans le domaine de la reproduction, telles que la façon de déterminer l’apparition pubertaire chez les souris et les rats par la séparation préputiale, l’ouverture vaginale, et l’établissement du premier estrus avant d’effectuer une étude de fertilité. Le principal avantage de cette technique est qu’en établissant le début puberté utilisant l’approche non invasive démontrée, il est possible de suivre et de mener une étude de fertilité chez les animaux qui sont sexuellement matures. Les implications de cette technique s’étendent au diagnostic des déficits dans la reproduction, tels que provoqués par des mutations génétiques ou des traitements susceptibles d’avoir un impact sur la compétence reproductrice, tels que les produits chimiques perturbateurs endocriniens.
Bien que cette méthode puisse fournir un aperçu de la compétence reproductrice chez la souris, elle peut également être appliquée à d’autres systèmes modèles, tels que les rats et les hamsters. La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle, car elle exige de bonnes et délicates compétences en manipulation animale. Il est particulièrement important de tenir les souris correctement pour l’identification visuelle suivante de la séparation préputiale et de l’ouverture vaginale.
Pour préparer l’aire de travail, placez un coussin sur la table. Ensuite, placez un dessus propre cage de souris avec la grille face vers le haut, sur le pad. Ensuite, mettre en place une échelle dans la zone de travail.
Placez un bécher propre de 500 à 1000 millilitres sur la balance et técez-le. Placez ensuite une feuille à côté de la zone de travail pour enregistrer les données. Après cela, placez la cage à souris dans la zone de travail.
Ouvrez la cage et retirez le couvercle, la bouteille d’eau et le support alimentaire à la table. Tout en tenant la souris par la queue, placez-la sur le dessus propre de cage de souris. Tout en maintenant la prise de la queue, permettre à la souris d’explorer la grille du dessus de la cage.
Tirez doucement la queue vers l’arrière et approchez l’autre main de la peau près du cou et des oreilles. Saisir la peau lâche entre les épaules et le cou avec le pouce et l’index. Puis saisir la peau sur le dos avec les doigts restants et tenir la souris en appuyant doucement contre la main.
Avec la main libre, poussez doucement la peau autour du pénis en arrière. À la séparation préputiale, la peau préputiale glisse vers l’arrière, exposant le pénis de gland. Après examen, enregistrez la présence ou l’absence de séparation préputiale.
Après cela, peser la souris et enregistrer son poids. Réintroduisez ensuite la souris dans la cage d’habitation en tenant le bécher au-dessus du plancher de la cage et en permettant à la souris de sortir d’elle-même. Placez une boule de coton, un grand bécher et une bouteille d’eau stérile dans la zone de travail.
Verser de l’eau stérile dans le bécher. Ensuite, humidifiez la boule de coton avec l’eau stérile dans le bécher, et placez-la à côté du dessus propre de la cage. Placez la cage à souris dans la zone de travail.
Ensuite, transférez la souris sur le dessus de la cage en la tenant près de la base de sa queue. Tirez doucement sur la queue de la souris pour encourager un mouvement vers l’avant par la souris. Après cela, soulevez la queue tout en soutenant les hanches avec trois doigts.
Nettoyez doucement la vulve avec la boule de coton humidifiée, puis examinez la vulve pour déterminer si le vagin est complètement ouvert. Enregistrez si l’ouverture vaginale s’est produite. Pesez ensuite la souris et retournez-la dans la cage d’accueil.
Préparez une cage à souris propre avec couvercle, eau, nourriture, literie et matériel de nidification pour chaque paire de souris reproductrices. Remplissez ensuite les cartes cage avec les informations requises. Placez la cage de literie préparée sur une table propre, puis introduisez lentement une main gantée dans la cage à souris et laissez-la dans la cage pendant une courte période de temps.
Approchez lentement les souris avec la main gantée. Lorsque les souris courent sur la main, saisir la queue d’une souris entre le pouce et l’index, puis soulever la souris par la queue. La souris peut être tenue par la queue sans soutien du corps pendant un jusqu’à deux à trois secondes.
Placez la souris dans la cage de reproduction préparée, puis fermez la cage après vous être assuré que les souris mâles et femelles ont de la nourriture, de l’eau et du matériel de nidification. En utilisant la méthode présentée, deux modèles transgéniques différents de souris ont été étudiés. L’ouverture vaginale et la séparation préputiale se sont produites au même âge et le même poids chez les souris hétérozygotes et les souris témoins.
Inversement, l’ouverture vaginale et la séparation préputiale ont été sensiblement retardées dans les femelles et les mâles conditionnels de KO, et associés au poids corporel accru. À l’âge de 4,5 semaines, les témoins féminins et les souris knockout conditionnelles avaient un poids corporel comparable, tandis que les mâles knockout conditionnels étaient légèrement plus lourds que les témoins. Ceci indique que le retard dans l’ouverture vaginale et la séparation preputial des souris conditionnelles de KO n’a pas été associé à un retard dans le gain de poids.
Après l’accomplissement du début pubertal, l’étude de fertilité a été commencée à l’âge 10 à 16 semaines. Les souris hétérozygotes mâles et femelles étaient sous-fertiles. Les femelles hétérozygotes ont généré moins de portées au cours de l’étude de trois mois, et les souris hétérozygotes mâles et femelles ont généré de plus petites portées.
Pour illustrer l’importance de confirmer le début pubertal avant de mettre en place un essai de fertilité, la compétence reproductrice a été évaluée dans les souris conditionnelles de KO. Au cours de l’étude de fertilité de 70 jours, ni les mâles ko conditionnels ni les femelles n’ont généré de portées. Tout en essayant cette procédure, il est important de se rappeler de manipuler les souris avec soin et de rester calme tout en approchant et en manipulant les animaux.
Après cette procédure, d’autres méthodes comme mesurer les niveaux circulants d’hormone sexuelle peuvent être exécutées pour répondre aux questions additions, comme si l’infertilité ou l’autre sous-fertilité a été provoquée par la testostérone anormale, l’oestrogène, l’hormone stimulante de follicule, et les niveaux lutéinisants d’hormone. N’oubliez pas que travailler avec des souris peut être dangereux en raison du risque de mordre et de développer des allergies. Pour réduire l’exposition, des précautions telles que le port de gants et d’un manteau de laboratoire, et la manipulation minutieuse des souris, doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure.
