La recherche présentée ici a été soutenu par Charles River.

<ol>
	<li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+substances+to+laboratory+animals:+routes+of+administration+and+factors+to+consider.">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> JAALAS. 50, 600-613 (2011).</li><li>Diehl, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood,+including+routes+and+volumes.">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> J. Appl. Toxicol. 21, 15-23 (2001).</li><li>Hurst, J. L., West, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taming+anxiety+in+laboratory+mice.">Taming anxiety in laboratory mice.</a> Nat. Methods. 7, 825-826 (2010).</li><li>Maurer, B. M., D&#246;ring, D., Scheipl, F., K&#252;chenhoff, H., Erhard, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+a+gentling+programme+on+the+behaviour+of+laboratory+rats+towards+humans.">Effects of a gentling programme on the behaviour of laboratory rats towards humans.</a> Appl. Anim. Behav. Sci. 111, 329-341 (2008).</li><li>Cloutier, S., Newberry, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+conditioning+technique+to+reduce+stress+associated+with+repeated+intra-peritoneal+injections+in+laboratory+rats.">Use of a conditioning technique to reduce stress associated with repeated intra-peritoneal injections in laboratory rats.</a> Appl. Anim. Behav. Sci. 112, 158-173 (2008).</li><li>Romanovsky, A. A., Kulchitsky, V. A., Simons, C. T., Sugimoto, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methodology+of+fever+research:+why+are+polyphasic+fevers+often+thought+to+be+biphasic.">Methodology of fever research: why are polyphasic fevers often thought to be biphasic.</a> Am. J. Physiol. 275, 332-338 (1998).</li><li>Turner, P. V., Pekow, C., Vasbinder, M. A., Brabb, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+substances+to+laboratory+animals:+equipment+considerations,+vehicle+selection,+and+solute+preparation.">Administration of substances to laboratory animals: equipment considerations, vehicle selection, and solute preparation.</a> JAALAS. 50, 614-627 (2011).</li><li>Lukas, G., Brindle, S. D., Greengard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+route+of+absorption+of+intraperitoneally+administered+compounds.">The route of absorption of intraperitoneally administered compounds.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 178, 562-564 (1971).</li><li>AALAS. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Laboratory Mouse Handbook. , (2009).</li><li>AALAS. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> LAT Training Manual. , (2009).</li><li>AALAS. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> LATg Training Manual. , (2009).</li><li>Barnett, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manual of Animal Technology. , 440 (2007).</li><li>Baumans, V., Pekow, C. A., Hau, J., Schapiro, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Laboratory Animal Science. 1, 401-446 (2010).</li><li>Bogdanske, J. J., Hubbard-Van Stelle, S., Riley, M. R., Schiffman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Laboratory Mouse Procedural Techniques. , (2011).</li><li>Danneman, P., Suckow, M. A., Brayton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Laboratory Mouse. , (2000).</li><li>Sharp, P. E., La Regina, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Laboratory Rat. , (1998).</li></ol>

Les auteurs sont des employés de Charles River.

Ce protocole doit être considéré comme une introduction à la manipulation des animaux et de l&#39;administration de substances destinées à compléter la formation pratique fournie à l&#39;installation du chercheur. Les moyens de retenue qui seront utilisés et les voies d&#39;administration de la substance doit être pris en compte dans la conception expérimentale et lorsque le protocole de recherche ou comité d&#39;éthique de protocole est écrit. Formation en liées aux animaux procédures est essentielle à la réussite de la recherche. Pour effectuer la plupart des expériences, les animaux doivent être manipulés par du personnel de recherche, et meilleure est la manipulation des animaux, moins souligné l&#39;animal 3. Habituer les animaux au contact humain douce peut réduire le stress et les animaux sujets de recherche plus traitables 4,5. Gérer le stress a été démontré qu&#39;elle affecte certains types de recherche 6 et il est possible qu&#39;elle peut affecter les autres aussi. De retenue des rongeurs doit être accompli avec soin, mais la manipulation cabinet (une tentativeprise en main est susceptible de causer des blessures à des rongeurs et gestionnaire) et doit être la plus courte durée possible. Méthodes de contention sont généralement choisis en fonction de la taille de l&#39;animal ou l&#39;accès demandé. Par exemple, la manipulation des rats adultes par la peau, bien que possible, est souvent rencontré une forte résistance par le rat, en particulier si le gestionnaire est inexpérimenté. La tenue d&#39;une souris ou rat à la main peuvent rendre l&#39;accès aux veines de la queue difficile et un dispositif de retenue est souvent choisi pour garder l&#39;animal le plus immobile possible. Lorsque les chercheurs de manipuler les animaux, ils cherchent souvent à administrer un composé ou biologique pour une étude plus approfondie. La voie d&#39;administration de substances peuvent affecter l&#39;absorption, la biodisponibilité et l&#39;aptitude à une expérience particulière. Familiarité avec les différentes voies devraient fournir aux chercheurs la possibilité d&#39;administrer leur substance de la meilleure façon possible pour leurs recherches. Par exemple, un itinéraire qui favorise l&#39;absorption rapide d&#39;une substance, Comme la voie intraveineuse ou intrapéritonéale, ne doit pas être utilisé si le chercheur veut administrer la substance d&#39;une manière plus lente à action prolongée. Commentaires récents de certaines de ces techniques et des considérations de volume, de l&#39;équipement, et de soluté peut être trouvée dans deux articles par Turner et al. 1,7 Chaque fois que les substances doivent être administrées aux rongeurs de laboratoire, il faut tenir compte de la taille de l&#39;équipement et du volume de la substance (présentées dans le tableau 1). Du matériel mal dimensionné ou de grandes quantités peuvent provoquer des malaises, des blessures ou la mort de l&#39;animal. En général, les substances administrées par voie parentérale sont stériles, sauf si les objectifs de recherche rendrait cela impossible (c&#39;est-à-études bactériennes). Composés et produits biologiques doivent être dans un soluté ou d&#39;un véhicule qui aura le moins d&#39;effet sur l&#39;animal. A pH physiologique (7,3 -7,4) est généralement bien accepté, surtout pour les sous-cutanée, intramusculaire et intraperitoneal routes. Niveaux de pH non physiologiques en substances administrées par ces voies peut entraîner des douleurs ou de la nécrose et de lésions tissulaires. Plus larges gammes de pH sont tolérés avec des routes intra-gastrique et intraveineuse 7. Chez les petits rongeurs, une autre considération importante est la possibilité de refroidir si de grandes quantités de liquides à température ambiante sont donnés. Si des liquides sont administrés par voie intraveineuse ou intrapéritonéale, en particulier à l&#39;appui d&#39;un animal malade, ils doivent être chauffés à la température du corps (37 ° C). Les voies d&#39;administration abordées dans ce protocole sont ceux couramment utilisés dans de nombreux programmes de recherche, sont simples à maîtriser, et ne nécessitent généralement pas d&#39;anesthésie. Une variété presque infinie de voies d&#39;administration sont possibles, cependant, y compris intracrânienne, intrathécale, épidurale, intra-trachéale, intra-osseuse, et intra-articulaire pour n&#39;en citer que quelques-uns. La formation à ces itinéraires spécialisés de l&#39;administration devraient être recherchés auprès des gens WHo ont une vaste expérience de la route et de bons résultats. Chez les rongeurs, la voie intranasale est généralement utilisée pour étudier les substances introduites dans les poumons par l&#39;intermédiaire d&#39;un plus «naturelle»; méthode que l&#39;instillation intratrachéale. Les souris et les rats sont obligatoires nez respirent, afin de les inciter à inhaler de très petites quantités de liquide n&#39;est pas difficile, même chez des animaux conscients. Depuis la muqueuse nasale est bien fourni avec des vaisseaux sanguins, l&#39;administration intranasale de certaines substances peut être similaire à l&#39;administration intraveineuse. Cette route n&#39;est pas recommandé chez les animaux atteints de rhinite, cependant, que cela puisse compromettre l&#39;absorption. Les tentatives pour administrer de grandes quantités par voie intranasale peut entraîner une dyspnée ou la noyade de l&#39;animal. Les injections intramusculaires assurer une absorption rapide des substances. Les injections intramusculaires peut être difficile chez les rats et les souris en raison de leur petite taille et de muscles en conséquence petites. Ils sont réalisés dans la patte arrières. En raison de la possibilité de dommages du nerf sciatique, le quadriceps femoris est le muscle de choix. Bien que les deux sous-cutanée et intradermique impliquer la peau, il existe des différences entre la biodisponibilité des substances placées dans la peau vs l&#39;hypoderme. Administration sous-cutanée est souvent considéré comme un &quot;dépôt&quot; de route, avec une absorption plus lente que d&#39;autres voies, comme par voie intraveineuse ou intrapéritonéale. L&#39;administration intradermique est utilisé pour de très petits volumes de substances, généralement des substances immunostimulantes comme adjuvant d&#39;antigène mélanges. Dans les deux cas, les substances administrées doivent avoir un pH physiologique et non irritant. Intradermique ou sous-cutanée ne doit pas être effectuée dans la nuque, car il s&#39;agit d&#39;un site souvent utilisé pour empêcher les rongeurs. L&#39;administration intraveineuse et intrapéritonéale sont souvent considérés comme équivalents chez les rongeurs. Intraveineuse de dosage fournir plus rAudioPID absorption de composés, cependant, alors que l&#39;administration intrapéritonéale doit être considéré comme à peu près équivalent à une administration orale 8. Des précautions doivent être prises par voie intrapéritonéale avec des composés administrés, car ils peuvent causer de la douleur si elle est mal tamponnée. La voie courante d&#39;administration en bolus intraveineux chez les rongeurs se fait par les veines de la queue. Si l&#39;administration chronique par voie intraveineuse d&#39;une substance est souhaitée, l&#39;implantation des canules veineuse ou artérielle doit être envisagée. Substances administrées par voie intraveineuse doit être livré de manière aseptique et doit être montré pour être sûr d&#39;administrer par voie intraveineuse. Par exemple, les substances qui peuvent induire une hémolyse, la thrombose, vasculite ou ne sont pas appropriées pour une administration intraveineuse. La route gavage intragastrique ou orale est souvent utilisé pour imiter une voie de dosage fréquente chez l&#39;homme. Il permet également le dosage précis de substances par rapport à une administration orale dans la nourriture ou l&#39;eau. Biodisponibilité des composésadministré par gavage varie en fonction de l&#39;état nourri / jeun de l&#39;animal, ainsi que le soluté ou d&#39;un véhicule du composé ou biologique. Aiguilles gavage ou alimentation doit être de la taille appropriée pour l&#39;animal qui est utilisé, et doit être nettoyé entre les animaux, si aiguilles jetables gavage ne sont pas pratiques. Les blessures causées par gavage ne sont pas rares et incluent le dépôt de la substance dans le poumon ou la rupture de l&#39;estomac ou de l&#39;œsophage. La formation devrait être supervisé par un parti expérimenté et engagé sur les animaux euthanasiés en premier, puis les animaux anesthésiés (qui seront euthanasiés) avant gavage sur des animaux éveillés est tentée. Premières tentatives de gavage sur des animaux éveillés devrait impliquer les animaux de taille moyenne et de petits volumes d&#39;une substance, telle qu&#39;une solution saline, qui ne sera pas causer des blessures si la procédure se passe mal. Les animaux doivent être soigneusement évaluée pour des signes de détresse, comme haletant, virant au bleu, des saignements ou une salivation excessive, après le gavage et euthanasiés si nécessaire. Si euthAnasia est nécessaire, l&#39;animal doit être soumis à une autopsie pour déterminer la cause de la procédure de gavage a échoué.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> Aiguilles </td><td> Divers </td><td> Divers </td><td> Les aiguilles sont vendues par calibre et la longueur. Vérifiez à la fois avant de commander. </td></tr><tr><td> Seringues </td><td> Divers </td><td> Divers </td><td> Toujours choisir une taille appropriée pour le volume à administrer. </td></tr><tr><td> DecapiCones </td><td> Braintree scientifique </td><td> DC-200, DCL-120, MDC-200 </td><td> Disponible chez la souris et le rat tailles. </td></tr><tr><td> Restrainer rongeurs </td><td> Harvard Apparatus, Braintree scientifique, Plas-Labs, d&#39;autres </td><td></td><td> Disponible en plexiglas transparent, en plastique réglable, et de taille pour les souris et les rats. </td></tr><tr><td> 50 ml tube conique </td><td> Divers </td><td> &amp; Nbsp; </td><td></td></tr><tr><td> Aiguilles d&#39;alimentation </td><td> VWR, Popper and Sons </td><td> Divers </td><td> Monter le calibre de l&#39;aiguille et de la longueur des animaux tels que décrits ci-dessus. Les deux aiguilles jetables et réutilisables d&#39;alimentation sont disponibles. </td></tr></tbody></table>

manual restraint and common compound administration routes in mice and rats

Etre capable de maîtriser en toute sécurité et efficacement souris et les rats est une partie importante de la recherche. Travailler en toute confiance et humainement, avec souris et les rats nécessite une compétence de base dans les méthodes de manipulation et de contention. Cet article présente les principes de base nécessaires pour manipuler de façon sécuritaire les animaux. D&#39;une seule main, deux mains, et la retenue des objets de retenue spécialement conçus seront illustrés. Souvent, une autre partie de la recherche ou de l&#39;utilisation de contrôle des animaux est l&#39;administration efficace de composés à des souris et des rats. Bien qu&#39;il existe un grand nombre de voies d&#39;administration possibles (limité seulement par la taille et les organes de l&#39;animal), la plupart ne sont pas utilisés régulièrement dans la recherche. Cette vidéo illustre plusieurs des routes les plus courants, y compris par voie intraveineuse, intramusculaire, sous-cutanée et gavage oral. Le but de cet article est d&#39;exposer un spectateur peu familier avec ces techniques à des restrictions de base et des voies d&#39;administration de substances. Cette vidéone remplace pas les mains sur la formation nécessaires à votre installation, mais est destiné à augmenter et compléter cette formation.

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Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats

Travailler en toute sécurité et humainement avec les rongeurs de recherche nécessite une compétence de base dans les méthodes de manipulation et de contention. Cet article présente les principes de base nécessaires pour manipuler de façon sécuritaire et efficace administrer des composés à des souris et des rats.

Manuel de retenue et communes voies d&#39;administration composés chez la souris et le rat

Being able to safely and effectively restrain mice and rats is an important part of conducting research.  Working confidently and humanely with mice and ...

manual-restraint-common-compound-administration-routes-mice

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288.0K vues.  Charles River. Travailler en toute sécurité et humainement avec les rongeurs de recherche nécessite une compétence de base dans les méthodes de manipulation et de contention. Cet article présente les principes de base nécessaires pour manipuler de façon sécuritaire et efficace administrer des composés à des souris et des rats.

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Changes in Mammary Gland Morphology and Breast Cancer Risk in Rats

Studies in rodent models of breast cancer show that exposures to dietary/hormonal factors during the in utero and pubertal periods, when the mammary gland undergoes extensive modeling and re-modeling, alter susceptibility to carcinogen-induced mammary tumors. Similar findings have been described in humans: for example, high birthweight increases later risk of developing breast cancer, and dietary intake of soy during childhood decreases breast cancer risk. It is thought that these prenatal and postnatal dietary modifications induce persistent morphological changes in the mammary gland that in turn modify breast cancer risk later in life. These morphological changes likely reflect epigenetic modifications, such as changes in DNA methylation, histones and miRNA expression that then affect gene transcription . In this article we describe how changes in mammary gland morphology can predict mammary cancer risk in rats. Our protocol specifically describes how to dissect and remove the rat abdominal mammary gland and how to prepare mammary gland whole mounts. It also describes how to analyze mammary gland morphology according to three end-points (number of terminal end buds, epithelial elongation and differentiation) and to use the data to predict risk of developing mammary cancer.

Our protocol describes how to dissect the rat abdominal mammary gland and how to prepare mammary gland whole mounts. It also describes how to analyze mammary gland morphology using three end-points (number of terminal end buds, epithelial elongation and differentiation) and to use these results to predict mammary cancer risk in rats which were exposed to dietary modifications in utero or during prepuberty.

Changements dans la morphologie glande mammaire et le risque de cancer du sein chez les rats

Studies in rodent models of breast cancer show that exposures to dietary/hormonal factors during the in utero and pubertal periods, when the mammary gland ...

Recherche

Biologie

Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice

There are multiple sample types that may be collected from a euthanized animal in order to help diagnose or discover infectious agents in an animal colony. Proper collection of tissues for further histological processing can impact the quality of testing results. This article describes the conduct of a basic gross examination including identification of heart, liver, lungs, kidneys, and spleen, as well as how to collect those organs. Additionally four of the more difficult tissue/sample collection techniques are demonstrated. Lung collection and perfusion can be particularly challenging as the tissue needs to be properly inflated with a fixative in order for inside of the tissue to fix properly and to enable thorough histologic evaluation. This article demonstrates the step by step technique to remove the lung and inflate it with fixative in order to achieve optimal fixation of the tissue within 24 hours. Brain collection can be similarly challenging as the tissue is soft and easily damaged. This article demonstrates the step by step technique to expose and remove the brain from the skull with minimal damage to the tissue. The mesenteric lymph node is a good sample type in which to detect many common infectious agents as enteric viruses persist longer in the lymph node than they are shed in feces. This article demonstrates the step by step procedure for locating and aseptically removing the mesenteric lymph node. Finally, identification of infectious agents of the respiratory tract may be performed by bacterial culture or PCR testing of nasal and/or bronchial fluid aspirates taken at necropsy. This procedure describes obtaining and preparing the respiratory aspirate sample for bacterial culture and PCR testing.

This article describes the procedures for conducting a basic postmortem examination of a mouse or rat, and the collection of basic organs, as well as more challenging sample types from for histological, microbiological, and PCR evaluation.

Autopsie de diagnostic et de certains tissus et de collecte des échantillons dans les rats et les souris

There are multiple sample types that may be collected from a euthanized animal in order to help diagnose or discover infectious agents in an animal ...

Ovariectomy and 17&beta;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

Estrogens are a family of female sexual hormones with an exceptionally wide spectrum of effects. When rats and mice are used in estrogen research they are commonly ovariectomized in order to ablate the rapidly cycling hormone production, replacing the 17&beta;-estradiol exogenously. There is, however, lack of consensus regarding how the hormone should be administered to obtain physiological serum concentrations. This is crucial since the 17&beta;-estradiol level/administration method profoundly influences the experimental results1-3. We have in a series of studies characterized the different modes of 17&beta;-estradiol administration, finding that subcutaneous silastic capsules and per-oral nut-cream Nutella are superior to commercially available slow-release pellets (produced by the company Innovative Research of America) and daily injections in terms of producing physiological serum concentrations of 17&beta;-estradiol4-6. Amongst the advantages of the nut-cream method, that previously has been used for buprenorphine administration7, is that when used for estrogen administration it resembles peroral hormone replacement therapy and is non-invasive. The subcutaneous silastic capsules are convenient and produce the most stable serum concentrations. This video article contains step-by-step demonstrations of ovariectomy and 17&beta;-estradiol hormone replacement by silastic capsules and peroral Nutella in rats and mice, followed by a discussion of important aspects of the administration procedures.

Ovariectomy and 17&amp;#946;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

Ovariectomy and subsequent replacement of 17&beta;-estradiol by means of silastic capsules and peroral Nutella are demonstrated in rats and mice.

Remplacement ovariectomie et 17β-estradiol chez les rats et les souris: une démonstration visuelle

Estrogens are a family of female sexual hormones with an exceptionally wide spectrum of effects. When rats and mice are used in estrogen research they are ...

Detection of Live Escherichia coli O157:H7 Cells by PMA-qPCR

A unique open reading frame (ORF) Z3276 was identified as a specific genetic marker for E. coli O157:H7. A qPCR assay was developed for detection of E. coli O157:H7 by targeting ORF Z3276. With this assay, we can detect as low as a few copies of the genome of DNA of E. coli O157:H7. The sensitivity and specificity of the assay were confirmed by intensive validation tests with a large number of E. coli O157:H7 strains (n = 369) and non-O157 strains (n = 112). Furthermore, we have combined propidium monoazide (PMA) procedure with the newly developed qPCR protocol for selective detection of live cells from dead cells. Amplification of DNA from PMA-treated dead cells was almost completely inhibited in contrast to virtually unaffected amplification of DNA from PMA-treated live cells. Additionally, the protocol has been modified and adapted to a 96-well plate format for an easy and consistent handling of a large number of samples. This method is expected to have an impact on accurate microbiological and epidemiological monitoring of food safety and environmental source.

Detection of Live Escherichia coli O157:H7 Cells by PMA-qPCR

A qPCR assay was developed for detection of Escherichia coli O157:H7 targeting a unique genetic marker, Z3276. The qPCR was combined with propidium monoazide (PMA) treatment for live cell detection. This protocol has been modified and adapted to a 96-well plate format for easy and consistent handling of numerous samples

Détection de Live<em&gt; Escherichia coli</em&gt; O157: H7 par les cellules PMA-qPCR

A unique open reading frame (ORF) Z3276 was identified as a specific genetic marker for E. coli O157:H7. A qPCR assay was developed for detection of E. ...

Plant Promoter Analysis: Identification and Characterization of Root Nodule Specific Promoter in the Common Bean

The upstream sequences of gene coding sequences are termed as promoter sequences. Studying the expression patterns of promoters are very significant in understanding the gene regulation and spatiotemporal expression patterns of target genes. On the other hand, it is also critical to establish promoter evaluation tools and genetic transformation techniques that are fast, efficient, and reproducible. In this study, we investigated the spatiotemporal expression pattern of the rhizobial symbiosis-specific nodule inception (NIN) promoter of Phaseolus vulgaris in the transgenic hairy roots. Using plant genome databases and analysis tools we identified, isolated, and cloned the P. vulgaris NIN promoter in a transcriptional fusion to the chimeric reporter &#946;-glucuronidase (GUS) GUS-enhanced::GFP. Further, this protocol describes a rapid and versatile system of genetic transformation in the P. vulgaris using Agrobacterium rhizogenes induced hairy roots. This system generates &#8805;2 cm hairy roots at 10 to 12 days after transformation. Next, we assessed the spatiotemporal expression of NIN promoter in Rhizobium inoculated hairy roots at periodic intervals of post-inoculation. Our results depicted by GUS activity show that the NIN promoter was active during the process of nodulation. Together, the present protocol demonstrates how to identify, isolate, clone, and characterize a plant promoter in the common bean hairy roots. Moreover, this protocol is easy to use in non-specialized laboratories.

Promoter expression analyses are crucial to improving the understanding of gene regulation and the spatiotemporal expression of target genes. Herein we present a protocol to identify, isolate, and clone a plant promoter. Further, we describe the characterization of the nodule-specific promoter in the common bean hairy roots.

Analyse de végétaux de promoteur : Identification et caractérisation de racine Nodule promoteur spécifique chez le haricot commun

The upstream sequences of gene coding sequences are termed as promoter sequences. Studying the expression patterns of promoters are very significant in ...

Determination of Reproductive Competence by Confirming Pubertal Onset and Performing a Fertility Assay in Mice and Rats

Assessment of reproductive competence is critical for understanding the impact of a treatment or genetic manipulation on the reproductive axis, also termed the hypothalamic-pituitary-gonadal axis. The reproductive axis is a key integrator of environmental and internal input adapting fertility to favorable conditions for reproduction. Prior to embarking upon a fertility study in mice and rats, sexual maturity is evaluated to exclude the possibility that the observed reproductive phenotypes are caused by delayed or absent pubertal onset. This protocol describes a non-invasive approach to assess pubertal onset in males through the determination of preputial separation, and in females through vaginal opening and first estrus. After the confirmation of the completion of puberty and the achievement of sexual maturity, a fertility study can be initiated. The procedure describes the optimal breeding conditions for mice and rats, how to set up a fertility study, and what parameters to evaluate and determine if the treatment or gene deletion has an impact on fertility.

Many treatments and genetic mutations impact the timing of sexual maturity and fertility. This protocol describes a non-invasive method to evaluate pubertal onset in mice and rats prior to setting up a fertility study in sexually mature animals.

Détermination de la compétence reproduction en confirmant début pubertaire et effectuer un test de fertilité chez des Rats et des souris

Assessment of reproductive competence is critical for understanding the impact of a treatment or genetic manipulation on the reproductive axis, also ...

Loop-Mediated Isothermal Amplification for Screening Salmonella in Animal Food and Confirming Salmonella from Culture Isolation

Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) has emerged as a powerful nucleic acid amplification test for the rapid detection of numerous bacterial, fungal, parasitic, and viral agents. Salmonella is a bacterial pathogen of worldwide food safety concern, including food for animals. Presented here is a multi-laboratory-validated Salmonella LAMP protocol that can be used to rapidly screen animal food for the presence of Salmonella contamination and can also be used to confirm presumptive Salmonella isolates recovered from all food categories. The LAMP assay specifically targets the Salmonella invasion gene (invA) and is rapid, sensitive, and highly specific. Template DNAs are prepared from enrichment broths of animal food or pure cultures of presumptive Salmonella isolates. The LAMP reagent mixture is prepared by combining an isothermal master mix, primers, DNA template, and water. The LAMP assay runs at a constant temperature of 65 &#176;C for 30 min. Positive results are monitored via real-time fluorescence and can be detected as early as 5 min. The LAMP assay exhibits high tolerance to inhibitors in animal food or culture medium, serving as a rapid, reliable, robust, cost-effective, and user-friendly method for screening and confirming Salmonella. The LAMP method has recently been incorporated into the U.S. Food and Drug Administration&#8217;s Bacteriological Analytical Manual (BAM) Chapter 5.

Loop-Mediated Isothermal Amplification for Screening Salmonella in Animal Food and Confirming Salmonella from Culture Isolation

Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) is an isothermal nucleic acid amplification test (iNAAT) that has attracted broad interest in the pathogen detection field. Here, we present a multi-laboratory-validated Salmonella LAMP protocol as a rapid, reliable, and robust method for screening Salmonella in animal food and confirming presumptive Salmonella from culture isolation.

Amplification isothermale à médiatographie en boucle pour le dépistage de Salmonella dans les aliments pour animaux et la confirmation de Salmonella de l’isolement culturel

Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) has emerged as a powerful nucleic acid amplification test for the rapid detection of numerous bacterial, ...

Divergence of Root Microbiota in Different Habitats based on Weighted Correlation Networks

The root microbiome plays an important role in plant growth and environmental adaptation. Network analysis is an important tool for studying communities, which can effectively explore the interaction relationship or co-occurrence model of different microbial species in different environments. The purpose of this manuscript is to provide details on how to use the weighted correlation network algorithm to analyze different co-occurrence networks that may occur in microbial communities due to different ecological environments. All analysis of the experiment is performed in the WGCNA package. WGCNA is an R package for weighted correlation network analysis. The experimental data used to demonstrate these methods were microbial community data from the NCBI (National Center for Biotechnology Information) database for three niches of the rice (Oryza sativa) root system. We used the weighted correlation network algorithm to construct co-abundance networks of microbial community in each of the three niches. Then, differential co-abundance networks among endosphere, rhizoplane and rhizosphere soil were identified. In addition, the core genera in network were obtained by the "WGCNA" package, which plays an important regulated role in network functions. These methods enable researchers to analyze the response of microbial network to environmental disturbance and verify different microbial ecological response theories. The results of these methods show that the significant differential microbial networks identified in the endosphere, rhizoplane and rhizosphere soil of rice.

Network analysis was applied to evaluate the association of various ecological microbial communities, such as soil, water and rhizosphere. Presented here is a protocol on how to use the WGCNA algorithm to analyze different co-occurrence networks that may occur in the microbial communities due to different ecological environments.

Divergence du microbiote racinaire dans différents habitats sur la base de réseaux de corrélation pondérés

The root microbiome plays an important role in plant growth and environmental adaptation. Network analysis is an important tool for studying communities, ...

Determination of Self-(In)compatibility and Inter-(In)compatibility Relationships in Citrus Using Manual Pollination, Microscopy, and S-Genotype Analyses

Citrus uses S-RNase-based self-incompatibility to reject self-pollen and, therefore, requires nearby pollinizer trees for successful pollination and fertilization. However, identifying suitable varieties to serve as pollinizers is a time-consuming process. To solve this problem, we have developed a rapid method for identifying pollination-compatible citrus cultivars that utilizes agarose gel electrophoresis and aniline blue staining. Pollen compatibility is determined based on the identification of S genotypes by extracting total DNA and performing PCR-based genotyping assays with specific primers. Additionally, styles are collected 3-4 days after manual pollination, and aniline blue staining is performed. Finally, the growth status of the pollen tubes is observed with a fluorescence microscope. Pollen compatibility and incompatibility can be established by observing whether the pollen tube growth is normal or suppressed, respectively. Due to its simplicity and cost-effectiveness, this method is an effective tool for determining the pollen compatibility and incompatibility of different citrus varieties to establish incompatibility groups and incompatibility relationships between different cultivars. This method provides information essential for the successful selection of suitable pollinizer trees and, thus, facilitates the establishment of new orchards and the selection of appropriate parents for breeding programs.

Determination of Self-Incompatibility and Inter-Incompatibility Relationships in Citrus Using Manual Pollination, Microscopy, and S-Genotype Analyses

This protocol provides a rapid method for determining pollen compatibility and incompatibility in citrus cultivars.

Détermination des relations d’auto-(in)compatibilité et d’inter-(in)compatibilité chez les agrumes à l’aide d’analyses manuelles de pollinisation, de microscopie et de génotype S

Citrus uses S-RNase-based self-incompatibility to reject self-pollen and, therefore, requires nearby pollinizer trees for successful pollination and ...

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Développement de méthodes de transformation et d’édition de gènes dans le bambou

In Planta Gene Expression and Gene Editing in Moso Bamboo Leaves

A novel in planta gene transformation method was developed for bamboo, which avoids the need for time-consuming and labor-intensive callus induction and regeneration processes. This method involves Agrobacterium-mediated gene expression via wounding and vacuum for bamboo seedlings. It successfully demonstrated the expression of exogenous genes, such as the RUBY reporter and Cas9 gene, in bamboo leaves. The highest transformation efficiency for the accumulation of betalain in RUBY seedlings was achieved using the GV3101 strain, with a percentage of 85.2% after infection. Although the foreign DNA did not integrate into the bamboo genome, the method was efficient in expressing the exogenous genes. Furthermore, a gene editing system has also been developed with a native reporter using this method, from which an in situ mutant generated by the edited bamboo violaxanthin de-epoxidase gene (PeVDE) in bamboo leaves, with a mutation rate of 17.33%. The mutation of PeVDE resulted in decreased non-photochemical quenching (NPQ) values under high light, which can be accurately detected by a fluorometer. This makes the edited PeVDE a potential native reporter for both exogenous and endogenous genes in bamboo. With the reporter of PeVDE, a cinnamoyl-CoA reductase gene was successfully edited with a mutation rate of 8.3%. This operation avoids the process of tissue culture or callus induction, which is quick and efficient for expressing exogenous genes and endogenous gene editing in bamboo. This method can improve the efficiency of gene function verification and will help reveal the molecular mechanisms of key metabolic pathways in bamboo.

Pleins feux sur l’auteur : Faire progresser l’édition génomique dans les feuilles de bambou pour des alternatives durables au plastique 

In this study, a novel in planta gene expression and gene editing method mediated by Agrobacterium was developed in bamboo. This method greatly improved the efficiency of gene function validation in bamboo, which has significant implications for accelerating the process of bamboo breeding.

À Planta Expression génique et édition de gènes dans les feuilles de bambou moso

A novel in planta gene transformation method was developed for bamboo, which avoids the need for time-consuming and labor-intensive callus induction and ...