La thérapie de cellules souches a été largement rapportée comme traitement prometteur pour beaucoup de maladies. Et les techniques de feuille de cellule ont été développées afin d’améliorer la rétention de la cellule et la survie dans les cibles, aussi. Pendant la construction des feuilles cellulaires, l’insuffisance de l’approvisionnement nutritionnel reste un problème clé pour la perte de la fonction des cellules souches, et est une propriété de cellules souches insatisfaisante aurait finalement un effet sur les effets thérapeutiques in vivo.
Notre but de préparer le produit disponible de feuille de cellules souches multicouches, notre équipe a développé l’échafaudage cellulaire de poteauxized, de péricardium et de feuille de cellule. Basé sur l’échafaudage, le démarreur de cellules multicoucouches serait rapidement construit avec de l’hydrogène nonapeptide et un système de perfusion dynamique est utilisé pour assurer l’approvisionnement nutritionnel des cellules souches in vitro. Sortez un échafaudage DBP séché et mettez-le au centre de la base noire.
Placez un anneau de tension blanc sur l’échafaudage DBP et fixez-le dans le porte-tissus. Assurez-vous que l’échafaudage DBP est totalement fixé dans le porte-tissus. Ajouter 100 médiums de culture de microlitres sur l’échafaudage DBP.
Mettez l’échafaud dans l’incubateur de 37 degrés Celsius et laissez-le tremper pendant 15 minutes. Sortez les cellules de l’incubateur, retirez les médiums de culture du plat de culture, lavez doucement les cellules avec deux millilitres de PBS chaud. Retirez tous les PBS du plat de culture et assurez-vous qu’il ne reste plus de liquide.
Ajouter deux millilitres à la solution trypsine à 1,25% au plat, et incuber les cellules pendant trois minutes. Arrêtez l’effet trypsine en ajoutant deux millilitres de culture moyenne. Laver délicatement les cellules du plat.
Transférer les suspensions cellulaires dans un nouveau tube centrifuge de 15 millilitres. Centrifuger les cellules à 220 fois la gravité pendant cinq minutes, et obtenir des sédiments cellulaires. Enlevez le surnatant et éliminez les sédiments cellulaires.
Suspendre à nouveau les cellules avec la solution de saccharose de 10% millilitre de millilitre. Aspirez la suspension cellulaire de 10 microlitres, et le numéro de cellule de contenu lit un hémocytomètre, extrayez trois millions de cellules et transférez dans votre nouveau tube centrifuge de 1,5 millilitre. Centrifugez les cellules à 220 fois la racine carrée pendant cinq minutes, retirez complètement les supernatants et obtenez les sédiments des cellules.
Préparez 20 microlitres solution de saccharose à 10%. Suspendez doucement les cellules et obtenez une suspension uniforme. Ajouter 20 microlitres peptide hydro gel au sommet de la suspension doucement mélanger le gel hydro peptidique, et la suspension des cellules avec le T, sortir l’échafaudage DBP, quitter le porte-tissus, puis aspirer doucement le terre-plein central calcul avec un T.Aspirate le mélange du mélange et ajouter uniformément à l’échafaud DBP.
Ajouter un millilitre de calcium au fond du porte-tissus. Ajouter délicatement quatre millilitres de milieu culturel dans le plat de culture, puis sortir la feuille de cellule. Mettez les cellules dans l’incubateur pendant deux heures laissez-le la culture.
Le système de perfusion dynamique comprend un récipient de culture de perfusion le gaz échangeant des recréations et une bouteille en verre. Les assemblages sont des systèmes de perfusion dynamiques comme le montre la figure. Ajouter deux terre-pleins hydro millilitres dans la bouteille en verre.
Insérez la feuille de cellule dans la chambre du récipient de culture, ajoutez trois médianes de culture millilitres dans le récipient, mettez les systèmes dynamiques de perfusion dans les incubateurs, et commencez à pomper. Ouvrez le récipient de culture dans le couché bipositif. Sortez la feuille de cellule du récipient de culture et mettez-la dans le plat de culture.
Utilisez un forceps pour immobiliser le porteur de tissu et utilisez deux autres forceps pour séparer l’anneau de tension blanc de la base noire. Enfin, obtenez la feuille de cellule multicouches. L’échafaudage DBP est transparent.
Les reventes sem montre que les collèges capturés et les composants sont complètement réservés. Les feuilles cellulaires peuvent être obtenues et retenues au forceps pour une courte conservation. Ces feuilles de cellule pourraient être transférées sur un tube cylindriforme de 1,5 millilitre.
Comme un modèle par exemple en commençant par des affichages cellulaires de BMFC très positif pour le marqueur de cellules souches CD 9O et le CD 29. Après la construction cellulaire, le BMFC’S quittant la feuille de cellule reste des niveaux élevés d’expansion du CD 90 et du CD 29. La construction de la structure cellulaire multicououche est l’étape critique du protocole.
Le temps de casserole exige quatre gel d’hydro lorsque la valeur de PH change de SA à neutre, par conséquent, il est important de laver la cellule avec la solution de saccharose pour enlever les ions de surface. En outre, le rapport de volume de suspension cellulaire et panthihydrogel n’est pas bon ami pour construire la structure temporaire multicouche. Après la formation de la structure des cellules souches 3D, vous verrez que le système dynamique de perfusion est important pour stabiliser la structure multicououche ainsi que pour maintenir les viabilités des cellules souches.
L’infiltration dynamique de la médiane de culture pourrait faciliter des cellules souches proliférer et extrapoler le contexte cellulaire dans la structure multicouche aussi les thermomètres de culture dynamique devraient être ajustés selon différents types de cellules souches.
