줄기 세포 치료는 널리 많은 질병에 대한 유망한 치료로보고되고있다. 그리고 세포 시트 기술은 세포의 유지및 표적 내의 생존을 향상시키기 위하여 개발되었습니다, 너무. 세포시트 시공 중, 영양 공급부족은 줄기세포의 기능 상실에 대한 주요 문제점으로 남아 있으며, 만족스럽지 못한 줄기세포 특성이 마침내 생체내 치료효과에 영향을 미칠 것이다.
사용 가능한 다층 줄기 세포 시트 제품을 준비하는 우리의 목적, 우리 팀은 세포 극성, 심낭 및 세포 시트 스캐폴드를 개발했습니다. 스캐폴드에 기초하여 다층 세포 스타터는 비단펩티드 수소로 신속하게 시공될 것이며, 역학 관류 시스템은 체외에서 줄기 세포의 영양 공급을 보장하기 위해 사용된다. 말린 DBP 스캐폴드를 꺼내 검은 색 베이스의 중앙에 놓습니다.
DBP 스캐폴드에 백색 장력 링을 넣고 조직 담체에 부착합니다. DBP 스캐폴드가 조직 담체에 완전히 고정되어 있는지 확인합니다. DBP 스캐폴드에 100마이크로리터 배양 배지를 추가합니다.
비계를 섭씨 37도 인큐베이터에 넣고 15분 간 담가 둡니다. 인큐베이터에서 세포를 꺼내 배양 접시에서 배양 배지를 제거하고 따뜻한 PBS의 2 밀리리터로 세포를 부드럽게 씻으십시오. 문화 접시에서 모든 PBS를 제거하고 액체가 남아 있지 않은지 확인하십시오.
접시에 1.25%의 트립신 용액에 2밀리리터를 넣고 3분간 세포를 배양합니다. 두 밀리리터 배양 배지를 추가하여 트립신 효과를 중지합니다. 접시에서 셀을 부드럽게 씻습니다.
새로운 15 밀리리터 원심 관에서 세포 현탁액을 전달합니다. 원심분리기는 5분 동안 220배의 중력으로 세포를 원심하여 세포 퇴적물을 얻습니다. 상체를 제거하고 셀 퇴적물을 닦아냅니다.
다시 3 밀리 리터 10% 자당 용액으로 세포를 일시 중단. 흡면 10 마이크로 리터 세포 현탁액, 및 함량 세포 번호는 혈류계를 읽고, 3 백만 개의 세포를 추출하고 새로운 1.5 밀리리터 원심 튜브로 전송합니다. 원심분리기는 5분 동안 220배 제곱근으로 세포를 원심하여, 슈퍼나티를 완전히 제거하고 세포 퇴적물을 얻습니다.
20 마이크로리터 10% 자당 용액을 준비합니다. 부드럽게 세포를 다시 중단하고 균일 한 현탁액을 얻을 수 있습니다. 서스펜션 상단에 20 마이크로리터 펩타이드 하이드로 젤을 부드럽게 혼합하고, 세포 현탁액을 T와 혼합하고, DBP 스캐폴드를 꺼내 티슈 캐리어를 떠난 다음, 혼합물을 T.Aspirate로 부드럽게 흡인한 다음 혼합물을 흡인시키고 DBP 스캐폴드에 고르게 첨가한다.
티슈 캐리어 의 바닥에 1 밀리리터 칼슘을 넣습니다. 문화 접시에 밀리리터 문화 매체 4개부드럽게 넣은 다음 셀 시트를 나옵니다. 2 시간 동안 인큐베이터에 세포를 넣어 배양하자.
동적 관류 시스템에는 가스 교환 재분과 유리 병이 있는 관류 배양 용기가 포함됩니다. 어셈블리는 그림과 같이 동적 관류 시스템입니다. 유리 병에 하이드로 밀리리터 배양 중앙분리대 2개를 추가합니다.
배양 용기의 챔버에 셀 시트를 삽입하고, 용기에 3 밀리리터 배양 중앙값을 추가하고, 인큐베이터에 동적 관류 시스템을 넣고 펌프를 시작합니다. 양양성 리컴벤트에서 배양 용기를 엽니다. 배양 용기에서 셀 시트를 꺼내 배양 접시에 넣습니다.
하나의 포셉을 사용하여 조직 담체를 고정하고 다른 두 개의 집게를 사용하여 흰색 장력 링을 검은 색 베이스에서 분리하십시오. 마지막으로 다층 셀 시트를 가져옵니다. DBP 스캐폴드는 투명합니다.
SEM 재판매는 캡처된 대학과 구성 요소가 완전히 예약되어 있음을 보여줍니다. 세포 시트는 짧은 보존을 위해 집게에 의해 얻어지고 보유할 수 있다. 이 세포 시트는 1.5 밀리리터 실린드리폼 튜브로 전송될 수 있었다.
예를 들어 줄기 세포 마커 CD 9O 및 CD(29)에 대한 BMFC의 매우 양성의 세포 표시로 시작하는 모델. 세포 건설 후 BMFC의 셀 시트를 떠나는 것은 CD 90 및 CD 29의 높은 확장 수준남아있다. 다계층 셀 구조를 구성하는 것은 프로토콜의 중요한 단계입니다.
팬 시간은 PH 값이 SA에서 중립으로 변경될 때 4개의 하이드로 겔이 필요하므로, 표면 이온을 제거하기 위해 자당 용액으로 세포를 세척하는 것이 중요하다. 또한, 세포 현탁액과 판티하이드로겔의 부피 비율은 임시 다층 구조를 구성하는 데 좋은 친구가 아니다. 3D 줄기세포 구조의 형성 후, 다층 구조를 안정화하고 줄기세포 비부채를 유지하는 데 동적 관류 시스템이 중요하다는 것을 알 수 있다.
배양 중앙값의 동적 침투는 줄기 세포가 다층 구조 내에서 세포 컨텍스트를 증식하고 추정하는 것을 용이하게 할 수 있으며 또한 다른 줄기 세포 유형에 따라 동적 배양 온도계를 조정해야 한다.
