Cette méthode peut aider à répondre aux questions clés liées au développement, au traitement et au diagnostic du mésothéliome pleural humain. Le principal avantage de ce modèle orthotopique préclinique fiable est qu’il reproduit la progression et la pathologie humaines de la maladie dans un microenvironnement proche de celui que l’on trouve chez les patients atteints de mésothéliome pleural. Par conséquent, ce modèle inestimable est d’une grande importance et l’utilisation de l’imagerie moléculaire non invasive permet une surveillance longitudinale conforme au concept de trois R.
Avant de commencer à préparer le système d’anesthésie et la zone chirurgicale dans un capot d’écoulement laminaire en pulvérisant toutes les surfaces avec du désinfectant. Placez les cages de FPS micro-isolées dans le capot d’écoulement désinfecté. Placez un coussin chauffant, une solution povidone-iode 30 jauge hamilton seringue, gaze et coton-tige instruments de chirurgie et micropipettes et des conseils dans le capot d’écoulement laminaire.
Une fois que la souris est correctement anesthésiée injecter sous-cutanée 0,05 milligrammes par kilogramme Buprinorphine pour le soulagement postopératoire de la casserole. Ensuite, placez la souris sur son côté droit sur le dessus de la garniture chauffante et nettoyez la zone chirurgicale avec la solution povidone-iode et faites une incision de 5 millimètres de la peau. Effacer la graisse environnante et les muscles avec des ciseaux contondants pour exposer les côtes.
Homogénéiser la suspension cellulaire et charger 50 microlitres dans la seringue Hamilton en s’assurant d’éviter les bulles d’air. Essuyer l’aiguille avec 70% d’alcool avant chaque injection. Injectez lentement les cellules dans la cavité pleurale entre les sixième et septième côtes tenant l’aiguille à un angle de 30 degrés et de deux à trois millimètres sous les muscles intercostals.
Gardez l’aiguille juste sous les côtes pour éviter de s’injecter dans les poumons. Il doit être visible à travers les muscles. Une fois terminée, fermez la plaie avec trois à quatre sutures absorbables et rangez la souris dans un environnement réchauffé jusqu’à ce qu’elle se réveille.
Lors de l’implantation, il est très important de positionner correctement l’aiguille pour limiter la profondeur de la pénétration de l’aiguille. Utilisez un coussin chauffant ou une lampe infrarouge pour préchauffer les souris à 30 degrés Celsius pendant 30 minutes avant l’injection de fluor-18 (FDG)À l’aide d’un calculateur de dose, préparez trois à quatre doses de fluor-18 (FDG) en 150 à 200 microlitres de solution saline dans des seringues à insuline de 1 millilitre. Assurez-vous d’enregistrer toutes les périodes d’injections de mesures de dose de radioactivité et de TEP afin de calculer les valeurs d’absorption standard ou les VUS.
Peser les souris puis injecter par voie intraveineuse le fluor-18 (FDG)Après l’injection laisser les souris éveillées dans des conditions chaudes pendant 45 minutes. Ensuite, chargez les souris sur le lit du scanner transférer le lit à un scanner et soumettre les animaux à un tomodensitogramme centré sur les poumons. Déplacez le lit vers le sous-système PET insérer l’acquisition une heure après l’injection de fluor-18 (FDG) pour une durée de 15 minutes.
Retirez ensuite les souris de la chambre d’imagerie et permettez-leur de récupérer dans leur cage en les gardant dans une zone dédiée à la désintégration radioactive. Avant l’analyse de l’image, reconstruisez les tomodensitogrammes et les TEP tels que décrits dans le manuscrit. Calibrez les images en scannant un cylindre fantôme et co-enregistrez automatiquement les scans en fonction de la solution logicielle intégrée.
Pour analyser les images charger les données CT comme une référence en cliquant sur l’icône de données ouvertes. Chargez ensuite les données PET comme entrée en cliquant sur l’icône de données de l’appendice. Ajustez l’échelle de couleur de sorte que CT et PET pour contraster les images pour l’inspection visuelle.
Sélectionnez l’outil roi 3D à partir du menu drop down cliquez sur ajouter roi, et nommez les poumons de fichier. Cliquez sur les algorithmes de segmentation et le seuil de voisinage, puis définissez l’entrée comme arrière-plan et image en tant qu’arbitre. Entrez min et max selon les valeurs de densité pulmonaire de la souris.
Inspectez les poumons rendus en 3D en cliquant sur l’icône VTK. Cliquez ensuite sur afficher l’icône de la table et récupérer le volume dans la table générée. Pour analyser le fluor-18 (FDG) dans les tumeurs convertir les images PET en SUV en sélectionnant les arithmétiques du menu drop-down.
Sélectionnez la multiplicité scalaire puis utilisez NP un comme sélectionné et réglez le becquerel par millilitre au facteur SUV comme scalaire. Sélectionnez enfin l’outil roi 3D dans le menu drop-down et cliquez sur ajouter roi et nommer les tumeurs de fichier. Cliquez sur le mode peinture 3D et sphère décocher 2D seulement et ajuster la taille de la forme pour entourer les tumeurs.
Cliquez sur l’icône de table d’exposition et récupérez la valeur maximale suv de la table générée. Les rendus 3D des tomodensitogrammes donnent un aperçu de la localisation tumorale MPM et permettent de calcul des volumes pulmonaires. Les mesures du volume pulmonaire diminuent considérablement au fil du temps après l’injection de tumeurs intrapleurales.
Le TEP fournit des informations précieuses sur l’état métabolique des tumeurs MPM. Les tumeurs ont été distinguées deux semaines après greffe et fluor-18 (FDG)absorption a été quantifiée en extrayant des VUS qui ont été positivement corrélés avec le nombre de jours après injection. En outre, les volumes pulmonaires et l’avidité de fluor-18 (FDG)sont corrélés les uns avec les autres avec un R au carré de 0,6 qui soutient la force de ces mesures pour surveiller le développement orthotopique de tumeur de MPM.
Suivant cette procédure d’autres méthodes telles que l’histologie, l’immunohistochimie, et la cytométrie de flux peuvent être exécutées afin de répondre aux questions orthobiologiques telles que l’état de prolifération et la caractéristique phénotypique des tumeurs et du microenvironnement. Pour conclure, ces techniques précliniques ouvrent la voie aux chercheurs pour explorer la nouvelle stratégie diagnostique et de traitement du mésothéliome pleural. De plus, l’utilisation de l’imagerie moléculaire justifie une traduction rapide de nouvelles découvertes à la clinique.
