La pancréatite chronique est une maladie complexe impliquant une inflammation pancréatique, une fibrose, des douleurs abdominales et d’autres symptômes. Le modèle de perfusion de TNBS des voies biliaires reproduit la douleur neuropathique observée chez les patients atteints de pancréatite chronique. Ce protocole de perfusion de TNBS des voies biliaires a été optimisé pour induire la génération d’un modèle de pancréatite chronique chez la souris.
Comme la fusion des médicaments des voies biliaires chez la souris est techniquement difficile, sa visualisation sera utile aux chercheurs qui débutent dans la méthode. Avant et deux et trois semaines après la chirurgie, utilisez les monofilaments Von Frey pour appliquer différents niveaux de force dans l’ordre croissant sur la région abdominale supérieure d’une souris noire C57 de huit à 10 semaines, 10 fois pendant une à deux secondes par application. Envisagez d’augmenter la rétraction ou le léchage de l’abdomen comme une réponse positive.
Ensuite, chargez une seringue à insuline équipée d’une aiguille de calibre 31 avec 50 microlitres d’une solution de TNBS à 0,75% fraîchement préparée. Chargez une deuxième seringue avec 50 microlitres d’éthanol à 10 % dans une solution saline comme contrôle du véhicule et placez les deux seringues sur de la glace à l’abri de la lumière. Après avoir confirmé un manque de réponse au réflexe de pédale, retirez les poils de la région abdominale de la souris anesthésiée en rasant ou en appliquant une crème dépilatoire et placez la souris sur un coussinet chirurgical chauffé sous un microscope à dissection.
Appliquez une pommade vétérinaire sur chaque œil et désinfectez le site chirurgical avec trois lingettes séquentielles à deux pour cent d’iode et trois lingettes à 70 pour cent d’éthanol utilisez des micro-ciseaux pour faire une incision de 0,5 à un centimètre en un mouvement continu et utilisez des cotons-tiges pour exposer doucement le duodénum et localiser le canal biliaire commun. Pour empêcher l’écoulement du traitement dans le foie et la vésicule biliaire, utilisez le microscope pour placer un micro-hémoclip droit sur le canal commun proximal et insérez l’aiguille de la seringue chargée en TNBS à travers la papille de vater dans le canal pancréatique. Utilisez un micro-hémoclip incurvé pour fixer l’aiguille et infusez la solution dans le canal pancréatique pendant une minute.
Lorsque toute la solution a été livrée, retirez soigneusement les micro-pinces et confirmez que le duodénum est revenu à sa position d’origine. Avant la fermeture de la cavité abdominale, ajoutez 500 microlitres de solution saline stérile de 36 à 37 degrés Celsius pour aider le duodénum à retrouver sa position d’origine et aider à la récupération du péristaltisme. Utilisez une suture continue avec un point de cinq O pour fermer l’incision dans la couche musculaire et fermez la peau à l’aide d’une suture interrompue avec un point de quatre O.
Placez ensuite la souris dans une cage de récupération sur un coussin chauffant avec surveillance jusqu’à ce qu’elle soit complètement couchée. Surveillez la santé et le comportement de la souris quotidiennement pendant la première semaine après la chirurgie pour détecter les signes de détresse, tels que la vocalisation, une posture du dos voûté ou réduire la locomotion et mesurer le poids corporel tous les deux jours. Comme observé, l’injection de 50 microlitres d’encre comme démontré entraîne l’infiltration de l’ensemble du pancréas, permettant l’induction d’un phénotype de maladie plus homogène.
Dans cette analyse représentative, dans les trois premiers jours après la chirurgie, les souris du groupe témoin ont perdu environ six pour cent de leur poids corporel initial avant de récupérer progressivement et de gagner plus de 100% de leur poids corporel d’origine au jour 21. En revanche, les souris qui ont reçu du TNBS ont perdu environ 15% de leur poids corporel d’origine au cours des cinq premiers jours après la chirurgie et ont retrouvé un peu moins de 100% de leur poids corporel d’origine au jour 21. Par rapport aux souris témoins, les animaux injectés de TNBS ont montré une hypersensibilité mécanique abdominale accrue au cours des deuxième et troisième semaines après la chirurgie.
La taille et le poids par poids corporel des pancréas ont été significativement réduits chez les souris TNBS par rapport aux pancréas prélevés sur des animaux témoins, suggérant une atrophie pancréatique marquée chez les animaux traités par TNBS, ce qui correspond aux résultats chez les humains atteints de pancréatite chronique sévère et à long terme. L’analyse histologique de coupes de tissu pancréatique de souris contrôlées traitées à l’éthanol a montré une morphologie normale, tandis que les sections de tissus de souris traitées par TNBS ont présenté une réalisation vide avec une perte massive de cellules acineuses qui ont été remplacées par l’infiltration de cellules graisseuses et la fibrose. Empêcher le TNBS injecté de pénétrer dans la vessie et l’intestin est important car un TNBS a des effets néfastes sur les tissus.
Pendant la perfusion, gardez la main aussi stable que possible pour éviter la ponction du canal biliaire. En plus d’induire le développement d’une pancréatite chronique, cet art de souris par perfusion de voies biliaires peut être utilisé pour le développement d’autres modèles de maladies pancréatiques. Ce modèle murin de pancréatite chronique TNBS peut être utilisé pour étudier à la fois la pathogenèse et le traitement de la pancréatite chronique ainsi que d’autres maladies pancréatiques.
