La tomographie par cohérence optique est largement utilisée dans le diagnostic clinique de différentes maladies de la rétine, mais elle est encore difficile à appliquer dans des modèles murins. Ce protocole décrit comment gérer la technique OCT chez les animaux. Cette technologie peut être appliquée à des animaux de différentes tailles de globes oculaires.
Il permet une imagerie transversale rétinienne non invasive, à haute résolution et en temps réel, ainsi que des mesures quantitatives de l’épaisseur de la rétine. OCT aide au diagnostic de la rétinopathie en identifiant les caractéristiques de la lésion telles que l’emplacement, la gamme, la forme et la taille des lésions, ainsi que toutes les anomalies rétiniennes suspectées telles que la néovascularisation rétinienne. Ce protocole est applicable aux études animales ou aux maladies du fond d’œil, y compris les maladies de la rétine.
Avant de commencer la procédure, préparez-vous et suivez le protocole étape par étape. Effectuez l’expérience lorsque l’animal est anesthésié. On devrait être en mesure d’obtenir des images OCT de bonne qualité après un peu de pratique.
Pour commencer, allumez l’ordinateur et démarrez le logiciel. Cliquez sur le bouton du programme de test pour terminer le programme de test. Ensuite, allumez le thermostat et préchauffez-le à 37 degrés Celsius.
Après le test du programme, démarrez la procédure du module OPO. Créez un nouvel objet et remplissez les informations de la souris. Ensuite, préchauffez la couverture électrique et couvrez-la de serviettes chirurgicales.
Placez la souris anesthésiée sur la plate-forme de couverture électrique et enduisez immédiatement les deux yeux de gel médical d’hyaluronate de sodium. Ensuite, placez une lentille de contact 100D sur la cornée de la souris avec le côté concave touchant le gel d’hyaluronate de sodium sur la surface cornéenne. Ensuite, placez la souris sur la petite plate-forme animale à température constante du dispositif cSLO.
Ajustez l’angle de la lentille de contact avec une pince pour maintenir la pupille au centre de la lentille. Ajustez les ajustements de la tête pour que l’œil soit droit devant. Cliquez sur le bouton OPO, choisissez le module souris et démarrez le programme cSLO.
Ensuite, utilisez le levier de commande pour déplacer lentement la lentille préréglée vers la lentille de contact. Faites d’autres ajustements pour aligner l’image du pôle antéro-postérieur, en le centrant sur la tête du nerf optique. Ensuite, démarrez le programme de l’OPO et cliquez sur la barre de progression vers le haut et vers le bas jusqu’à ce que l’image de l’OPO s’affiche.
Ajustez la plage minimale entre 0 et 20 et la plage maximale entre 40 et 60. Ensuite, ajustez la distance et la direction de position de l’objectif prédéfinies jusqu’à ce qu’une image OCT idéale soit obtenue. Sélectionnez la position de numérisation en déplaçant la ligne standard dans le cSLO.
Ensuite, cliquez sur moyenne pour superposer le signal d’image cSLO et OCT et cliquez sur le bouton de prise de vue pour acquérir l’image SLO OCT. Après l’expérience, retirez la lentille de contact 100D et appliquez le gel pour les yeux à la lévofloxacine pour protéger la cornée. Pour la correction de la stratification rétinienne, cliquez sur Examen de charge sur l’interface de l’OPO et appelez les images de l’OPO à partir d’une fenêtre contextuelle.
Ensuite, double-cliquez sur l’image dans le conteneur multimédia pour l’afficher à l’écran. Ensuite, cliquez sur détection de couche pour terminer la superposition automatique sur la rétine. Après avoir sélectionné la ligne de séparation des deux côtés du calque préparée pour l’analyse, cliquez sur Modifier le calque pour ajuster l’espacement et la plage limite.
Ensuite, modifiez la ligne en déplaçant le cercle rouge. Pour mesurer l’épaisseur de la stratification rétinienne, cliquez sur le bouton de mesure et sélectionnez la ligne de séparation du calque à analyser pour afficher la limite du calque sur l’image de l’OPO. Ensuite, sélectionnez se connecter à la couche et rester connecté en déplacement.
Ensuite, sélectionnez la zone pour afficher les résultats et cliquez sur la position à analyser sur l’image de l’OPO pour faire apparaître la ligne de mesure. Cliquez sur la colonne suivante pour les mesures suivantes et pour afficher les données précédentes. Pour mesurer l’épaisseur totale de la rétine, sélectionnez la ligne un et la ligne sept dans la liste dans le coin supérieur droit.
Ensuite, à partir de l’apparition de la structure rétinienne au bord de la papille optique, mesurez quatre valeurs à des intervalles d’espacement de 200 micromètres sur la règle horizontale. Les images OCT de souris C57BL/6 ont montré diverses couches rétiniennes avec une démarcation claire. En revanche, les souris knockout Vldlr présentaient des lésions hyperréfléchissantes anormales.
Les images OCT ont montré des bandes réfléchissantes moyennes sur les surfaces rétiniennes des souris knockout Vldlr. Ces bandes adhéraient au vaisseau rétinien, ce qui correspondait aux caractéristiques OCT d’un décollement incomplet du vitré. Une lésion hyperréfléchissante est apparue sur l’espace sous-rétinien et s’est propagée à la couche nucléaire externe, mais n’a pas percé la couche plexiforme externe.
L’apparition de cette lésion en TCO correspondait à des résultats pathologiques. La section pathologique a montré que la néovascularisation a percé la couche d’épithélium pigmentaire rétinien, les segments interne-externe du photorécepteur et la membrane limitante externe, envahissant la couche nucléaire externe, mais pas la couche plexiforme externe. Une autre bande de lésion hyperréfléchissante, située dans l’espace sous-rétinien, n’impliquait pas la couche nucléaire externe.
Conformément aux résultats pathologiques, cette néovascularisation sous-rétinienne n’a pas percé la membrane limitante externe. La comparaison de l’épaisseur rétinienne de l’œil droit dans les directions temporel, nasale, supérieure et inférieure de la polaire postérieure entre les deux groupes a révélé que l’épaisseur rétinienne des souris knockout Vldlr était significativement inférieure à celle des souris C57BL / 6J. Lors de l’exécution du protocole, placez correctement une lentille de contact 100D sur la cornée, puis ajustez la position de l’image.
Sélectionnez l’emplacement de numérisation et superposez l’image avant la prise de vue. Suite à cette procédure, l’OCT du segment antérieur est réalisable, nécessitant une modification de la distance entre le cristallin préréglé et la cornée. Il peut montrer la cornée, la chambre antérieure, l’iris, le corps ciliaire et le cristallin.
Cette technique fournit un outil important pour la recherche sur la rétinopathie dans des modèles de petits animaux, favorisant la détection et la mesure non invasives de la rétinopathie en recherche fondamentale.
