Ce protocole décrit les étapes détaillées de l’utilisation d’embryons de poisson-zèbre pour des expériences de dépistage basées sur les rayonnements et certaines approches observationnelles pour évaluer le traitement de différents médicaments et rayonnements. Cela aidera les lecteurs à établir un criblage de médicaments à semi-haut débit impliquant une exposition aux rayons X à l’aide d’embryons de poisson-zèbre, ce qui guidera l’évaluation de la radiotoxicité et de l’efficacité des différents médicaments utilisés. Cette procédure peut être utilisée pour dépister et valider ou évaluer différents médicaments en tant que radiosensibilisants ou protecteurs potentiels, qui peuvent être explorés ou utilisés dans le domaine de la radiothérapie ou de la radiobiologie du cancer.
Pour commencer, surveillez les embryons en croissance au microscope à dissection. Identifiez le stade approprié et retirez tous les embryons morts ou en mauvaise santé. Assurez-vous que la stadification de l’embryon est adéquate grâce à la radiothérapie et que des doses de médicament seront administrées à un stade particulier de la gastrulation.
Avant de commencer l’expérience, répartissez soigneusement les embryons sains dans les plaques expérimentales à l’aide d’une pipette Pasteur. Pour chaque groupe expérimental, prélever 15 à 20 embryons. Lors de la mise en place d’une expérience sur les rayonnements, inclure un groupe témoin non irradié et un groupe témoin uniquement des rayonnements.
Distribuez les embryons dans une plaque de puits si les écrans anti-rayonnement peuvent couvrir et protéger les puits supplémentaires des rayonnements pendant que les autres puits sont exposés à une dose de rayonnement particulière. Sinon, utilisez des plaques ou des disques individuels pour voir les embryons par dose de rayonnement. Allumez l’irradiateur à rayons X et lancez l’initialisation et le préchauffage de la machine.
Placez la plaque expérimentale sous l’irradiateur à l’intérieur de la machine au centre, en veillant à ce que la plaque se trouve directement sous la source de rayons X. Et puis réglez la dose et commencez la radiographie. Une fois l’irradiation terminée, retirez les plaques, arrêtez le programme de la machine, éteignez la machine et vérifiez les plaques au microscope immédiatement après la radiothérapie.
Retirez les embryons morts et enregistrez leur nombre après les avoir évalués au microscope à dissection. Remettez les plaques dans l’incubateur à 28,5 degrés Celsius. Recueillir des données à des intervalles de temps prédéterminés après l’administration du rayonnement.
Consignez toutes les observations possibles telles que la survie, l’efficacité de l’éclosion, le stade de développement, le nombre de battements cardiaques, la courbure du corps et de la queue, l’œdème péricardique et l’extension du sac vitellin, la microcéphalie, le développement de la vessie natatoire, la motilité ou l’activité générale, et cetera. Pour capturer des images, choisissez des embryons représentatifs sur une lame propre. Vérifiez les embryons au microscope, orientez-les dans une direction particulière.
La courbe de survie pour les embryons irradiés six heures après la fécondation a montré que dans le groupe témoin et les embryons exposés à 2 gris et 5 gris, il n’y avait pas de mort significative chez les embryons. Le nombre de battements cardiaques par minute a suggéré que la fréquence cardiaque diminuait énormément avec l’augmentation des doses de rayons X. Dans le groupe témoin, à tous les intervalles de 24 heures, on a constaté une augmentation de la fréquence cardiaque.
Une déformation cardiovasculaire sévère est suspectée chez les embryons exposés à des radiations de 15 et 20 gris alors que le rythme cardiaque a énormément chuté. Différents défauts phénotypiques et de développement sont représentés et évalués pour les embryons exposés à des doses variables de rayonnement à différents moments. Des observations morphologiques de la flexion de la colonne vertébrale ou de la queue, des malformations de la tête et de la microcéphalie, des défauts de développement, un œdème péricardique, des déformations du sac vitellin, des déformations de la vessie natatoire et des modifications de la structure de l’œil ont également été effectuées.
