Soutenu par DK065872 (PEV), un Prix Smith Family Foundation de l&#39;excellence en recherche biomédicale (PEV), F31 DA023760.

Résumé Deux mois en moyenne l&#39;âge des souris C57BL/6J ou équivalent ou trois mois en moyenne l&#39;âge des rats Sprague-Dawley ou équivalent sont anesthésiés à la kétamine (60 mg / kg ip pour le rat, 100 mg / kg ip chez la souris) et de xylazine (10 mg / kg, ip pour les deux espèces). La sédation est surveillé par un pincement de l&#39;orteil douce retirer réflexes démontré dans <a href="/index/details.stp?ID=236">Walantus et al.</a> (Jupiter, 6, 2007) et <a href="/index/details.stp?ID=404">Szot et al.</a> (Jupiter, 9, 2007). Thermorégulation peut être fournie par un coussin chauffant thermostatregulated (ALA Instruments Inc) et surveillé par un thermomètre rectal. Tête est rasée de la fourrure et nettoyé avec de l&#39;iode avant l&#39;incision. Après incision de la peau (2 cm de long pour les rats, 1 cm de long pour les souris) et la suppression de tous les tissus mous de la surface du crâne, le placement de la canule guide est déterminée par rapport au bregma. Un trou de 6 mm est percé dans le crâne avec une perceuse à piles conçu pour la chirurgie des rongeurs (Outils Fine Science, Inc.) Les soins sont prises afin que le foret ne pénètre pas à travers les membranes méningées ou des vaisseaux sanguins. Crâne est implanté avec bilatérale 5 mm 21 inoxydable de calibre arbres de guidage en acier menant à niveau du noyau accumbens postérieure, striatum dorsal ou cortex préfrontal. Les coordonnées stéréotaxiques sont établis selon Franklin et Paxinos, 1997 (le cerveau de souris en coordonnées stéréotaxiques, Academic Press) ou Paxinos et Watson, 2006 (le cerveau du rat dans les coordonnées stéréotaxiques, Academic Press). Les implants sont garantis par un ciment dentaire. Un bolus de Ringer de la solution saline à 0,9% est donnée à la fin de la chirurgie (5mls SC chez le rat et 1 ml SC chez la souris après fluides sont réchauffé à la température normale du corps) pour éviter la déshydratation. La buprénorphine (0.1-0.5mg/kg SC) est administré deux fois par jour et, ensuite, sur une base comme-nécessaire, si l&#39;animal semble être dans la douleur. Traitement antibiotique local (pommade de bacitracine) et un traitement systémique par antibiotiques (pénicilline 100 000 UI / kg IM toutes les 12 heures pendant les 48 premières heures post-opératoires) sont administrés si infections post-opératoires se produisent. Après la chirurgie, les animaux sont logés individuellement avec de la nourriture et l&#39;eau ad libitum disponibles. Au moins une semaine est autorisé pour la récupération, avant de microdialyse et l&#39;euthanasie. Après récupération de la chirurgie, les animaux sont transférés dans une cage et les sondes de microdialyse microdialyse sont insérés et cimenté dans le puits guide qui ont été installés pendant la chirurgie. Sonde d&#39;insertion ne cause pas de douleur ou d&#39;inconfort, car la sonde est court-circuitant les tissus cutanés, les muscles et méningé travers l&#39;arbre de guidage. Par conséquent, insertion de la sonde se fait sans anesthésie et les effets induits par l&#39;anesthésie sur la neurochimie ou de comportement sont évités. Nous laissons les sondes se stabiliser pendant 12 heures, puis on commence l&#39;échantillonnage toutes les 30 minutes pour un autre 8-12 heures en fonction de l&#39;expérience. Nous surveillons le comportement locomoteur de l&#39;animal grâce à des cellules photoélectriques ou l&#39;enregistrement manuel du mouvement par l&#39;expérimentateur. Échantillons microdialysat sont injectés dans une chromatographie liquide haute performance avec détection électrochimique (HPLC-EC) pour la détection de l&#39;instrument neurochimiques et d&#39;analyse. Nous recherchons des effets sur la neurochimie basale et le comportement locomoteur. A la fin de l&#39;expérience de l&#39;animal est euthanasié par une surdose de kétamine systémique (200 mg / kg ip) et de xylazine (20 mg / kg, ip). Alors le coeur est perfusé avec une solution saline à 0,9% suivie par 4% de paraformaldéhyde. Les cerveaux sont prélevés, congelés et couper le long des voies de sonde de microdialyse pour vérifier le placement de sonde précis. Procédure <ol><li> Mettre en place l&#39;instrument stéréotaxique et tout le matériel nécessaire. Assurez-vous que la zone et les instruments sont nettoyés et stérilisés. </li><li> Raser la fourrure avec un rasoir électrique. Aller de l&#39;oreille à juste-entre les yeux, se déplacer de rasoir dans différentes directions pour nettoyer efficacement domaine de la fourrure. Appliquer povidine / iode zone rasée, mais de protéger les yeux contre elle. </li><li> Mont de l&#39;animal sur l&#39;appareil de stéréotaxie en plaçant les barres d&#39;oreille dans le canal auditif et le resserrement en place. Premier montage barre une oreille dans le canal auditif, puis le maintenir en place et faire glisser dans la barre de l&#39;autre oreille. Vous savez que vous êtes au bon endroit quand la tête ne peut plus être déplacé latéralement. Fixez la bouche avec la monture antérieure de la stéréotaxie et assurez-vous que la tête est de niveau avec une règle. Mettez le souverain dans une position verticale par rapport à la plate-forme instrument stéréotaxique et vérifier pour un angle de 90 ° entre le souverain et le milieu du cuir chevelu de l&#39;animal). Confirmez ce à travers l&#39;instrument stéréotaxique si elle offre une telle capacité. </li><li> Faire une incision antérieure / postérieure sur le cuir chevelu avec un scalpel stérile s&#39;étend de la lambda à juste entre les yeux de l&#39;animal. Utilisez hémostatiques stérilisés pour pincer la peau et de garder l&#39;incision ouverte. Utilisation de plusieurs tampons de coton stérile, sécher la surface du crâne exposé. <li> Mettez la canule guider sur sa monture, trouver bregma sur le crâne, et la position de la droite guider la canule plus cet endroit. Notez les coordonnées antérieur / postérieur et latéral. Du bregma, trouver les coordonnées nécessaires pour corriger le placement de votre sonde à l&#39;aide de l&#39;atlas stéréotaxique. Position de la canule guide des coordonnées correctes en ajoutant ou en soustrayant de bregma. Apportez votre canule guider jusqu&#39;à ce qu&#39;il touche le crâne, puis enregistrer cette coordonnée ventrale. Faites une marque au crayon avec un crayon stériles à cet endroit sur le crâne, c&#39;est là que vous serez de forage. </li><li> Retirer la canule guide et stériliser votre foret. Soigneusement percer un trou à la marque de crayon jusqu&#39;à ce que vous passer à travers la largeur du crâne. Vérifiez auprès de la canule guide pour voir si elle serait effacer le trou sans toucher les côtés. Gardez le forage et la vérification jusqu&#39;à ce que la canule peut claire dans le droit chemin. Une fois le trou est fait, l&#39;utilisation d&#39;une aiguille stérile pour doucement coup les méninges afin de permettre l&#39;insertion sans obstruction de la canule. </li><li> Ensuite, en utilisant une perceuse à main, de faire six trous pour les vis du crâne: deux en avant de l&#39;orifice une canule, deux latéraux du trou canule, et deux postérieures vers les côtés. Stériliser six vis et les placer sur le crâne jusqu&#39;à ce qu&#39;ils soient solidement ancrés sur. </li><li> Nettoyer la canule guide avec l&#39;éthanol et la solution saline, monter, et abaissez lentement à la bonne coordination ventrale. Assurez-vous que les côtés ne se touchent pas et qu&#39;il va dans parfaitement vertical. </li><li> Placez la vis d&#39;ancrage en dedans et derrière le crâne vis postérieure et le maintenir en place avec des pincettes. Mélanger un lot mince de ciment dentaire liquide et couvrent la canule guide, vis, et le reste du crâne avec une spatule stérile. Faire un autre lot, plus épais cette fois, et couvrir complètement la zone et la vis de la canule et d&#39;ancrage suffisant pour le sécuriser. </li><li> Comme le ciment devient plus épaisse et avant qu&#39;il ne se solidifie, séparer la peau de la Coupe du ciment et du moule de la Coupe du ciment avec la spatule pour s&#39;assurer que le bouchon de ciment est lisse tout autour et n&#39;irrite pas la peau plus tard. </li><li> Laisser le ciment dentaire sécher complètement avant d&#39;enlever l&#39;animal de l&#39;appareil. Retirez les pinces hémostatiques. Appliquer la bacitracine tout autour du bouchon de ciment. </li><li> Une fois l&#39;animal hors de l&#39;instrument stéréotaxique, y injecter 0,25 ml de pénicilline IM (intra-musculaire), suivi par 1 ml de solution saline SC (sous-cutanée). </li><li> Placez l&#39;animal dans sa cage et de le surveiller jusqu&#39;à ce qu&#39;elle devienne consciente avant de le retourner à sa salle de récupérer. </li><li> Surveiller les animaux jusqu&#39;à ce qu&#39;ils se remettre de l&#39;anesthésie, le jour de la chirurgie et post-op quotidienne, jusqu&#39;à la fin de l&#39;expérience, des signes d&#39;infection et de l&#39;évaluation de la douleur / détresse. Cela inclut les week-ends et jours fériés. Faible mouvement spontané, la vocalisation de détresse lors de la manipulation, une posture voûtée, la diarrhée, de l&#39;enflure et la décharge dans le domaine de l&#39;headmount, et le manque d&#39;alimentation / boisson sont tous des signes de douleur et de détresse. La buprénorphine (0.1-0.5mg/kg SC) est administré deux fois par jour, puis, sur une base comme-nécessaire, si l&#39;animal semble être dans la douleur. Traitement antibiotique local (pommade de bacitracine) et un traitement systémique par antibiotiques (pénicilline 100 000 UI / kg IM toutes les 12 heures pendant les 48 premières heures post-opératoires) sont administrés si infections post-opératoires se produisent. Si aucun de ces symptômes persistent après l&#39;administration de la buprénorphine, le fluide supplémentaire, et un traitement antibiotique dans les 12 heures de la chirurgie, l&#39;animal est euthanasié. </li></ol>

<ol>
	<li>Bungay, P. M., Newton-Vinson, P., Isele, W., Garris, P. A., Justice, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microdialysis+of+dopamine+interpreted+with+quantitative+model+incorporating+probe+implantation+trauma.">Microdialysis of dopamine interpreted with quantitative model incorporating probe implantation trauma.</a> J. Neurochem. 86, 932-946 (2003).</li><li>Chen, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+tissue+trauma+on+the+characteristics+of+microdialysis+zero-net-flux+method+sampling+neurotransmitters.">Effects of tissue trauma on the characteristics of microdialysis zero-net-flux method sampling neurotransmitters.</a> Journal of Theor. Biology. 238, 863-881 (2006).</li><li>Geiger, B. M., Behr, G. G., Frank, L., Caldera-Siu, A. D., Beinfeld, M. C., Kokkotou, E. G., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+defective+mesolimbic+dopamine+exocytosis+in+obesity-prone+rats.">Evidence for defective mesolimbic dopamine exocytosis in obesity-prone rats.</a> FASEB Journal. 8, 2740-2746 (2008).</li><li>Pothos, E. N., Creese, I., Hoebel, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restricted+eating+with+weight+loss+selectively+decreases+extracellular+dopamine+in+the+nucleus+accumbens+and+alters+dopamine+response+to+amphetamine,+morphine+and+food+intake.">Restricted eating with weight loss selectively decreases extracellular dopamine in the nucleus accumbens and alters dopamine response to amphetamine, morphine and food intake.</a> The Journal of Neuroscience. 15, 6640-6650 (1995).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

En microdialyse in vivo est l&#39;outil de choix pour mesurer les neurotransmetteurs multiples et de ses métabolites dans des sites distincts du cerveau d&#39;un animal vivant. Cependant, il ne contrôle que les niveaux extracellulaires de neurotransmetteurs et il n&#39;offre pas la résolution de temps pour surveiller l&#39;exocytose des neurotransmetteurs en temps réel. Grâce à une version de la technique appelée «net-flux», la concentration des neurotransmetteurs réelles sur un site donné peut être calculé, ce qui peut donner ...

Les matériaux sont décrits dans le document de protocole

survivable stereotaxic surgery in rodents 

La capacité de mesurer extracellulaire niveaux de base de neurotransmetteurs dans le cerveau d&#39;animaux éveillés permet la détermination des effets des différents défis systémiques (pharmacologiques ou physiologiques) dans le SNC. Par exemple, on peut mesurer directement la manière dont les projections de l&#39;animal dopamine du mésencéphale répondre à la dopamine libérant des médicaments comme des stimuli d-amphétamine ou naturels, comme la nourriture. Dans cette vidéo, nous vous montrons comment implanter canules Guide cibler des sites spécifiques du cerveau de rat, comment insérer et implanter une sonde de microdialyse et comment utiliser la chromatographie liquide haute performance couplée à une détection électrochimique (HPLC-EC) pour mesurer les niveaux extracellulaires de neurotransmetteurs oxydables et des métabolites. Local précise l&#39;introduction de la drogue à travers la sonde de microdialyse permet un travail affiné sur la spécificité du site dans le mécanisme un composé s de l&#39;action. Cette technique a anatomiques et une résolution excellentes chimiques, mais seulement une résolution temporelle modestes que des échantillons de microdialyse sont habituellement traitées toutes les 20-30 minutes pour assurer des niveaux de neurotransmetteurs détectable. Complémentaire des outils ex vivo (c&#39;est à dire, trancher et de culture de cellules électrophysiologie) peut aider à la surveillance en temps réel la neurotransmission.

Watch this Scientific Journal Video about Survivable Stereotaxic Surgery in Rodents at JoVE.com

Survivable Stereotaxic Surgery in Rodents

La surveillance des niveaux de neurotransmetteurs extracellulaire dans les régions cérébrales distinctes d&#39;animaux se déplaçant librement offre un aperçu sur le lien entre la libération des neurotransmetteurs et des comportements. En microdialyse in vivo couplée à une détection électrochimique fournit anatomiques et une résolution excellentes chimiques et des informations sur la façon dont la neurotransmission basale est altérée par des manipulations pharmacologiques ou physiologiques.

Survivable chirurgie stéréotaxique chez les rongeurs

The ability to measure extracellular basal levels of neurotransmitters in the brain of awake animals allows for the determination of effects of different ...

survivable-stereotaxic-surgery-in-rodents

Research

JoVE Journal

Biology

Survivable Stereotaxic Surgery in Rodents 

68.1K vues.  Tufts University. La surveillance des niveaux de neurotransmetteurs extracellulaire dans les régions cérébrales distinctes d'animaux se déplaçant librement offre un aperçu sur le lien entre la libération des neurotransmetteurs et des comportements. En microdialyse in vivo couplée à une détection électrochimique fournit anatomiques et une résolution excellentes chimiques et des informations sur la façon dont la neurotransmission basale est altérée par des manipulations ph...

Vidéo: Survivable Stereotaxic Surgery in Rodents

A Craniotomy Surgery Procedure for Chronic Brain Imaging

Imaging techniques are becoming increasingly important in the study brain function. Among them, two-photon laser scanning microscopy has emerged as an extremely useful method, because it allows the study of the live intact brain. With appropriate preparations, this technique allows the observation of the same cortical area chronically, from minutes to months. In this video, we show a preparation for chronic in vivo imaging of the brain using two-photon microscopy. This technique was initially pioneered by Dr. Karel Svoboda, who is now a Howard Hughes Medical Institute Investigator at Janelia Farm. Preparations like the one shown here can be used for imaging of neocortical structure (e.g., dendritic and axonal dynamics),  to record neuronal activity using calcium-sensitive dyes, to image cortical blood flow dynamics, or for intrinsic optical imaging studies. Deep imaging of the neocortex is possible with optimal cranial window surgeries. Operating under the most sterile conditions possible to avoid infections, together with using extreme care to do not damage the dura mater during the surgery, will result in successful and long-lasting glass-covered cranial windows.


This video and protocol demonstrate how to implant a glass-covered cranial window in rodents. These preparations can be used for chronic in vivo two-photon imaging of the neocortex over time scales of months. It may also be used for other types of imaging, including optical intrinsic signal imaging.

Une procédure de chirurgie Craniotomie pour l&#39;imagerie cérébrale chronique

Imaging techniques are becoming increasingly important in the study brain function. Among them, two-photon laser scanning microscopy has emerged as an ...

Recherche

Biologie

Dissecting the Non-human Primate Brain in Stereotaxic Space

The use of non-human primates provides an excellent translational model for our understanding of developmental and aging processes in humans1-6. In addition, the use of non-human primates has recently afforded the opportunity to naturally model complex psychiatric disorders such as alcohol abuse7. Here we describe a technique for blocking the brain in the coronal plane of the vervet monkey (Chlorocebus aethiops sabeus) in the intact skull in stereotaxic space. The method described here provides a standard plane of section between blocks and subjects and minimizes partial sections between blocks. Sectioning a block of tissue in the coronal plane also facilitates the delineation of an area of interest. This method provides manageable sized blocks since a single hemisphere of the vervet monkey yields more than 1200 sections when slicing at 50&mu;m. Furthermore by blocking the brain into 1cm blocks, it facilitates penetration of sucrose for cyroprotection and allows the block to be sliced on a standard cryostat.

The non-human primate is an important translational species for our understanding of the normal processing of the brain. The anatomical organization of the primate brain can provide important insights into normal and pathological conditions in humans.

Disséquer le cerveau des primates non humains dans l&#39;espace stéréotaxique

The use of non-human primates provides an excellent translational model for our understanding of developmental and aging processes in humans1-6. In ...

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized. Primary cells are preferred in studies of cell cycle control, apoptosis, and DNA repair, as cancer cells carry mutations in genes involved in these processes. Primary cells cannot be cultured indefinitely due to the onset of replicative senescence or aneuploidization. Hence, new cultures need to be established regularly. The procedure for isolation of rodent embryonic fibroblasts is well established, but isolating adult fibroblast cultures often presents a challenge. Adult rodent fibroblasts isolated from mouse models of human disease may be a preferred control when comparing them to fibroblasts from human patients. Furthermore, adult fibroblasts are the only available material when working with wild rodents where pregnant females cannot be easily obtained. Here we provide a protocol for isolation and culture of adult fibroblasts from rodent skin and lungs. We used this procedure successfully to isolate fibroblasts from over twenty rodent species from laboratory mice and rats to wild rodents such as beaver, porcupine, and squirrel.

This article describes a protocol for isolation and maintenance of primary fibroblast cultures from skin and lung tissue of wild rodents.

Établir des cultures primaires de fibroblastes adultes à partir de rongeurs

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

Principles of Rodent Surgery for the New Surgeon

For both scientific and animal welfare reasons, training in basic surgical concepts and techniques should be undertaken before ever seeking to perform surgery on a rodent. Students, post-doctoral scholars, and others interested in performing surgery on rodents as part of a research protocol may not have had formal surgical training as part of their required coursework. Surgery itself is a technical skill, and one that will improve with practice. The principles of aseptic technique, however, often remain unexplained or untaught. For most new surgeons, this vital information is presented in piecemeal fashion or learned on the job, neither of which is ideal. It may also make learning how to perform a particular surgery difficult, as the new surgeon is learning both a surgical technique and the principles of asepsis at the same time. This article summarizes and makes recommendations for basic surgical skills and techniques necessary for successful rodent surgery. This article is designed to supplement hands-on training by the user's institution.

Before attempting surgery, a new surgeon should have training in basic surgical techniques and concepts. This article will present basic surgical considerations with an emphasis on rodents.

Principes de la chirurgie des rongeurs pour le nouveau chirurgien

For both scientific and animal welfare reasons, training in basic surgical concepts and techniques should be undertaken before ever seeking to perform ...

Intracavernosal Pressure Recording to Evaluate Erectile Function in Rodents

Erectile dysfunction (ED) is defined as the inability to attain or keep an erection of the penis, and this has become a prevalent male sexual disorder. Rodents are employed by many studies to research the physiology/pathology of erectile function. Erectile function in rodents can be evaluated by measuring the intracavernosal pressure (ICP). In practice, ICP can be monitored following electrical stimulation of the cavernous nerves (CNs). The arterial pressure of the carotid artery (the mean arterial pressure) is used as the reference for ICP. Using ICP recording protocols, many key parameters of erectile function can be measured from the ICP response curve. The ICP measurement provides more information than the apomorphine-induced penile erection test, and is cheaper than telemetric monitoring of the corpus spongiosum penis, making this method the most popular one to evaluate erectile function. However, compared to the easily-performed APO-induced erectile function test, successful ICP recordings require attention to detail, practice, and adherence to the operation method. In this work, an introduction to ICP recording in rats is provided to complement the procedure efficiently.

Intracavernosal pressure recording (ICP) is an important method to evaluate the erectile function of experimental animals. Here, a detailed protocol is demonstrated for the recording procedure of ICP by catheterizing the crura penis and then electrically stimulating the cavernous nerves in rats.

Enregistrement de la pression intracaverneuse afin d’évaluer la fonction érectile chez les rongeurs

Erectile dysfunction (ED) is defined as the inability to attain or keep an erection of the penis, and this has become a prevalent male sexual disorder. ...

Performing In Vivo and Ex Vivo Electrical Impedance Myography in Rodents

Electrical impedance myography (EIM) is a convenient technique that can be used in preclinical and clinical studies to assess muscle tissue health and disease. EIM is obtained by applying a low-intensity, directionally focused, electrical current to a muscle of interest across a range of frequencies (i.e., from 1 kHz to 10 MHz) and recording the resulting voltages. From these, several standard impedance components, including the reactance, resistance, and phase, are obtained. When performing ex vivo measurements on excised muscle, the inherent passive electrical properties of the tissue, namely the conductivity and relative permittivity, can also be calculated. EIM has been used extensively in animals and humans to diagnose and track muscle alterations in a variety of diseases, in relation to simple disuse atrophy, or as a measure of therapeutic intervention. Clinically, EIM offers the potential to track disease progression over time and to assess the impact of therapeutic interventions, thus offering the opportunity to shorten the clinical trial duration and reduce sample size requirements. Because it can be performed noninvasively or minimally invasively in living animal models as well as humans, EIM offers the potential to serve as a novel translational tool enabling both preclinical and clinical development. This article provides step-by-step instructions on how to perform in vivo and ex vivo EIM measurements in mice and rats, including approaches to adapt the techniques to specific conditions, such as for use in pups or obese animals.

Performing In Vivo and Ex Vivo Electrical Impedance Myography in Rodents

This article details how to perform in vivo (using surface and needle electrode arrays) and ex vivo (using a dielectric cell) electrical impedance myography on the rodent gastrocnemius muscle. It will demonstrate the technique in both mice and rats and detail the modifications available, (i.e., obese animals, pups).

Réalisation de myographie d’impédance électrique in vivo et ex vivo chez les rongeurs

Electrical impedance myography (EIM) is a convenient technique that can be used in preclinical and clinical studies to assess muscle tissue health and ...

Quantification de l’infiltration graisseuse des muscles squelettiques par décellularisation

Decellularization-Based Quantification of Skeletal Muscle Fatty Infiltration

Fatty infiltration is the accumulation of adipocytes between myofibers in skeletal muscle and is a prominent feature of many myopathies, metabolic disorders, and dystrophies. Clinically in human populations, fatty infiltration is assessed using noninvasive methods, including computed tomography (CT), magnetic resonance imaging (MRI), and ultrasound (US). Although some studies have used CT or MRI to quantify fatty infiltration in mouse muscle, costs and insufficient spatial resolution remain challenging. Other small animal methods utilize histology to visualize individual adipocytes; however, this methodology suffers from sampling bias in heterogeneous pathology. This protocol describes the methodology to qualitatively view and quantitatively measure fatty infiltration comprehensively throughout intact mouse muscle and at the level of individual adipocytes using decellularization. The protocol is not limited to specific muscles or specific species and can be extended to human biopsy. Additionally, gross qualitative and quantitative assessments can be made with standard laboratory equipment for little cost, making this procedure more accessible across research laboratories.

Pleins feux sur l’auteur : Quantification de l’infiltration graisseuse des muscles squelettiques basée sur la décellularisation  

The present study describes decellularization-based methodologies for visualizing and quantifying intramuscular adipose tissue (IMAT) deposition through intact muscle volume, as well as quantifying metrics of individual adipocytes that comprise IMAT.

Quantification basée sur la décellularisation de l’infiltration graisseuse des muscles squelettiques

Fatty infiltration is the accumulation of adipocytes between myofibers in skeletal muscle and is a prominent feature of many myopathies, metabolic ...

Élevage de guêpes Nasonia exemptes de germes

Optimizing the Rearing Procedure of Germ-Free Wasps

Aseptic rearing technology is a method of culturing insects under sterile or almost sterile conditions, which can effectively eliminate the influence of external microorganisms on insect microbiota and thus promote the rapid development of insect microbiota research. Nasonia (wasp genus) is a parasitic wasp insect that has many advantages, such as a short lifespan, high genetic variation, easy operation, etc., and is widely used as an insect model system. Unlike antibiotic treatment, which can only reduce the number of microorganisms in animals, aseptic rearing techniques can control both the composition and quantity of microorganisms in animals, further facilitating the study of host-microbe interactions. However, previous versions of Nasonia rearing medium (NRM) have some defects and problems, such as a complex and time-consuming preparation process, easy contamination by bacteria or fungi, and short storage time. Therefore, this study solves these problems by optimizing the tools used in the NRM preparation process, storage conditions, and component ratios. The optimized medium could allow storage at -20 &#176;C for at least 3 months and eliminate the possibility of NRM contamination during feeding sterile wasps. This further improves the survival rate and health level of aseptic Nasonia, which is important for using Nasonia as a model for microbial research.

Pleins feux sur l’auteur : Optimisation de la procédure d’élevage des guêpes exemptes de germes  

Nasonia wasp embryos were dissected from Lucillia sericata pupae after parasitization for 12-24 h and washed with alcohol and 10% sodium hypochlorite solution to obtain germ-free embryos. After rearing the germ-free embryos&#160;and supplying them with Nasonia rearing medium to grow and develop in vitro, germ-free Nasonia adults were obtained.

Optimiser la procédure d’élevage des guêpes exemptes de germes

Aseptic rearing technology is a method of culturing insects under sterile or almost sterile conditions, which can effectively eliminate the influence of ...