A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
כאן אנו מדגימים כיצד במעבדה שלנו קופא גוונים האדם עובריים קווי גזע.
כאן אנו מדגימים כיצד במעבדה שלנו קופא גוונים האדם עובריים קווי גזע. תרבות בריאה, אקספוננציאלית הרחבת נשטף עם PBS להסיר התקשורת שיורי שיכול אחרת להרוות את התגובה טריפסין. חימם 0.05% טריפסין-EDTA הוא הוסיף אז כדי לכסות את תאים, הצלחת מותר דגירה של עד 5 דקות בטמפרטורת החדר. במהלך הזמן הזה התאים ניתן לראות עיגול, ומושבות מרימים את פני הצלחת. Pipetting חזר עדין יסיר מושבות תאים מפני השטח צלחת. תאים Trypsinized ממוקמים צינור חרוטי סטנדרטי המכיל מראש חימם התקשורת הס תא להרוות טריפסין הנותרים, וסובב אז. תאים הם resuspended התקשורת צמיחה בריכוז של כמיליון תאים למ"ל אחד בתקשורת, ריכוז כזה שאף אחד aliquot קפוא מספיקה כדי להחיות תרבות על צלחת 10 ס"מ. אחרי התאים resuspended כראוי, קרים כקרח התקשורת מקפיא נוסף בהיקף זהה. המתלים Cell מעורבבים היטב, aliquoted לתוך צלוחיות מקפיא, ואיפשר לאט לקפוא-80C מעל 24 שעות. תאים קפואים יכול מכן מועבר בשלב אדים של חנקן נוזלי לצורך אחסון לטווח ארוך, או להישאר כ -80 שישה חודשים.
הערה: כזה aliquot קפוא בריכוז של 106 תאים / מ"ל מספיקה כדי להחיות תרבות על צלחת 10 ס"מ.
הטכניקה אנו מתארים עבור קווי גוונים תא הקפאה עובד היטב עבור אחסון יעיל להחיות גוונים שורות תאים וכן כל תא יונקים של עניין. הקפאת חלק קטן של תאים במעבר זה הוא שיקול חשוב בעת עבודה עם שורות הס התא, כמו הפרעות קריוטיפ יכול להתעורר תאים חריגים יכולים במהירות להשתלט על הקו. לפיכך, לאחר...
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Name | Company | Catalog Number | Comments | |
HuES Medium | medium | For aq total of 651.5 ml, add: 500 ml KO-DMEM + 6.5 ml PenStrep + 6.5 ml L- Glut + 6.5 ml NEAA 6.5 ml + beta-mercaptoethanol 0.6ul (14.3 M stock) + 65 ml Serum Replacement + 65 ml Plasmanate + 0.65 ml bFGF2 (~10 ng/mL final) | ||
Freezing Medium | medium | 80% FCS (fetal calf serum) + 20% DMSO (dimethyl sulphoxide). Stored at 4C. |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved