אולטרסאונד Transabdominal לאבחון הריון באייל Muntjac של ריבס

Summary

אולטרסאונד Transabdominal מתואר כאמצעי יעיל, פולשני להערכת מצב הרבייה צבי muntjac של ריבס. שיטות אלה ניתן להשתמש כדי להשיג אבחון הריון מוקדם כדי להעריך את הכדאיות העוברית. יישומים עתידיים של טכניקה זו כוללים הערכה של גיל ההיריון ואת ההשפעות של מחלה אימהית על התפתחות העובר.

Abstract

צבי המונטג'אק של ריבס(Muntiacus reevesi)הוא מין קטן שמקורו בדרום מזרח אסיה, וכיום הוא נחקר כמודל פוטנציאלי להעברת מחלות פריון ופתוגנזה. שידור אנכי הוא תחום עניין בקרב חוקרים החוקרים מחלות זיהומיות, כולל מחלת פריון, וחקירות אלה דורשות שיטות יעילות להערכת ההשפעות של זיהום אימהי על ביצועי הרבייה. בדיקה אולטרה-סונוגרפית היא כלי מבוסס היטב לאבחון הריון ולהערכת בריאות העובר במינים רבים של בעלי^{חיים 1-7}, כולל מספר מינים של cervids חקלאי^8-19, אולם טכניקה זו לא תוארה צבי muntjac ריבס. כאן אנו מתארים את היישום של אולטרסאונד transabdominal כדי לזהות הריון muntjac עושה כדי להעריך את הצמיחה וההתפתחות העוברית לאורך כל תקופת ההיריון. באמצעות הליך זה, בעלי חיים בהריון זוהו כבר 35 ימים לאחר זיווג doe-buck וזה היה אמצעי יעיל כדי לפקח בבטחה על ההריון במרווחי זמן קבועים. מטרות עתידיות של עבודה זו יכללו קביעת התייחסויות מדידת עובר נורמלי להערכת גיל ההיריון, קביעת רגישות וספציפיות של הטכניקה לאבחון הריון בשלבים שונים של ההריון, וזיהוי וריאציות בצמיחה והתפתחות העובר בתנאים ניסיוניים שונים.

Introduction

בדיקה אולטרה-סונוגרפית היא שיטה מתוארת היטב לאבחון הריון בבקר¹, כבשים^2,3, עזים⁴, סוסים⁵, חיות^{לוויה 6,7}, ומינים אחרים של בעלי חיים מקומיים. שיטה זו הדמיה זוהתה גם ככלי רב ערך לגילוי הריון והערכת גיל העובר במספר מינים של cervids בשבי, כולל צבי fallow^8-11, צבי אדום^12-16, Hokkaido sika צבי¹⁷, ואיילים^18,19. במקרים רבים, אולטרה סאונד הפיק שיעורי דיוק גבוהים יותר מאשר מנגנונים אחרים של גילוי הריון, כגון פרוגסטרון בסרום או ניתוח גליקופרוטאין הקשורות להריון^9,18. יתר על כן, הדמיה אולטרה-דמוגרפית של מערכת הרבייה יכולה לספק מידע נוסף לגבי הכדאיות העוברית, גיל ההיריון וזיהוי מומים התפתחותיים שאחרת היה קשה להעריך. התועלת של אולטרה-סאונד להערכת מצב הרבייה מרמזת על כך שיש להתאים מתודולוגיה זו למינים אחרים שבהם נעשה שימוש בתוכניות רבייה פעילות.

צבי המונטג'אק של ריבס(Muntiacus reevesi)הוא מין קטן שמקורו בדרום מזרח אסיה²⁰. בעוד מחזור הרבייה של בעלי חיים אלה אינו מאופיין היטב בשטחים מולדתם, מחקרים של אוכלוסיות פראיות בחלקים של דרום אנגליה שיפרו את ההבנה של דפוסי הרבייה שלהם²⁰. שלא כמו רוב הסרווידים, נראה כי המונטג'אק של ריבס מתרבה כל השנה, ללא פסגות מתרפסות עונתיות לכאורה^20-22. נקבת muntjac בדרך כלל ללדת עופר יחיד לאחר תקופת הריון של 210 יום, ולהיכנס באופן אמין אסטרוס לאחר לידה בתוך 24 שעות^20-22. האם זה לא להרות במהלך תקופה זו לאחר הלידה יחזור estrus כ 24-25 ימים מאוחר יותר²⁰. במצבים שבויים, רבייה מושגת בדרך כלל על ידי דיור עושה עם זכר שלם אחד או יותר. מערכת זו מייצרת שיעורי תפיסה משביעי רצון ודורשת מיומנות טכנית מועטה עבור כוח אדם, אולם תאריכי רבייה מדויקים קשים, אם לא בלתי אפשריים, לקבוע.

Muntjac משמשים בדרך כלל במחקרים ציטוגנטיים בשל מגוון רחב של מספרי כרומוזום דיפלואיד ושיעור גבוה של גיוון karyotypic בקרב המינים השונים²³. בעלי חיים אלה נחקרים גם כיום כמודל של מחלת פריון פתוגנזה והעברת, עם עניין מיוחד להציב על המחקר של שידור אנכי של מחלת בזבוז כרונית (CWD) ב cervids. החשיבות של muntjac במספר יישומי מחקר שונים עולה כי טכנולוגיות הרבייה משופרת יש להקים כדי להשלים את הליכי החקירה הנוכחיים. באופן ספציפי, מנגנונים לא פולשניים להערכת תקופת ההיריון עלולים להבהיר שינויים קריטיים בביצועי הרבייה ובצמיחה והתפתחות העובר בתנאים ניסיוניים שונים. יתר על כן, הפיתוח של הפניות מדידה עוברית בזמן אמת יהיה בעל ערך פוטנציאלי בהערכת גיל ההיריון במצבים שבהם תאריכי הרבייה לא ניתן לקבוע. מחקרים קודמים תיארו מנגנונים לשימוש במדידות עובריות, כגון אורך כתר-עכוז (CRL), עומק חזה (CD) ואורך הראש (HL) כדי להעריך את השלב המשוער של ההריון במינים^{cervid 11-14, 16,17}. בנוסף, חלק ממחקרים אלה קבעו גם קווים מנחים המתארים מתי אבני דרך התפתחותיות ספציפיות, כגון מינרליזציה שלד או פעימות לב עובריות, ניתן לזהות^8-19. בעוד נתונים אלה עשויים להיות שימושיים כדי לעזור להנחות ניתוח אולטרסאונד הרבייה muntjac, רוב המינים cervid אחרים שנחקרו יש גודל גוף גדול בהרבה ותקופות הריון ארוכות יותר, הפחתת הערך התרגומי של מחקרים אלה עבור יישומי muntjac.

הפרוטוקול המתואר כאן מתאר אולטרה-סאונד טרנסבדומינלי של המונטג'אק הנשי לצורך אבחון וניטור הריון. ביצוע מוצלח של פרוטוקול זה יכול להקל על גילוי הריון מוקדם והערכה של צמיחה והתפתחות העובר. טכניקה זו יש יישומים בעלי ערך בניהול מחקרים לחקור רבייה, בפיתוח הרחם, או שידור אנכי של מחלות זיהומיות במודל cervid קטן עשוי גם להיות שימושי למטרות קליניות בפעולות רבייה בשבי.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

1. הכנה פרוצדורלית

כל ההליכים בבעלי חיים המתוארים נבדקו ואושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת קולורדו, האגודה להערכה והסמכה של טיפול בבעלי חיים במעבדה (AAALAC), Intl. מוסד מוכר.

1. לפני הבדיקה, לשתק בעלי חיים באמצעות פרוטוקולי הרדמה או הרדמה מתאימים כדי לספק רגיעה ולאפשר מיצוב מתאים. מטפל אחד מרסן את הצבי בזמן שאדם שני מנהל את ההרדם לבעל החיים.
   שים לב: המחברים מצאו את השילוב הבא כדי לספק הרדמה יעילה במין זה: butorphanol (0.45 מ"ג / קילוגרם), אזפרון (0.035 מ"ג / קילוגרם), ו medetomidine (0.04 מ"ג / קילוגרם), מנוהל תוך שרירי העכוז.
2. לאחר שהאלב הגיע למישור של הרדים המאפשר טיפול תואם, מקם אותה בנסיכה הגבית או הצדדית על שולחן בדיקה או בתוך שוקת V. הרימו מעט את הראש, הצוואר והת'ורן (כ-20-30 מעלות) כדי להפחית את הסיכון להתחדשות ושאיפה לתכולת רומן ולאפשר אוורור תקין במהלך ההליך.
   שים לב: ברוב cervids או מינים מהורהרים אחרים, אולטרסאונד בטן מבוצעת בבעלי חיים עומדים; עם זאת, הגודל הקטן והשיקולים ההתנהגותיים של מין זה דורשים הרדמה כבדה לבדיקה ומיצוב עצם החזה ולכן קשה יותר ועשוי למנוע טכניקת הדמיה יעילה. מיקום החיה באמצע הדרך בין עצם החזה לבין כבידה לרוחב עשוי להיות אידיאלי להפחתת הסיכון של regurgitation ו hypoventilation ויש לשקול במידת האפשר. בכל תנוחה שכיבה, חיוני לעקוב בזהירות אחר נשימות בעלי החיים ולהפסיק לאלתר את הבדיקה ולהציב את החיה בנסיכות קשה אם צוין regurgitation או hypoventilation.
3. במידת הצורך, קליפ שיער מאזור הבטן להיבדק על מנת להשיג מגע הולם בין טביעת הרגל של המתמר לבין העור.
   שים לב: בהריון מוקדם, ראיות של הריון ניתן לזהות בבטן caudal ליד בלוטות החלב. אזור זה של muntjac הוא בדרך כלל חסר שיער, ולכן גילוח לא ניתן לציין בשלב זה. ככל שהעובר גדל והרחם מתפזר כדי לתפוס תנוחה גולגולתית יותר בבטן, יהיה צורך בגזירת השיער לפני ההדמיה. יש להקפיד להימנע מגרימת טראומה מכנית כלשהי לעור, כולל חתכים מסכיני גילוח או פגיעה תרמית מקוצץ חשמלי.
4. מקם את יחידת האולטרסאונד במקום המאפשר לטכנאי לדמיין בקלות את הצג תוך ביצוע הבדיקה עם ידו הדומיננטית. הזן מידע זיהוי בעלי חיים (שם, מספר זיהוי וכו ')לתוך המערכת כדי לתייג באופן אוטומטי תמונות שמורות ולולאות וידאו.

2. בדיקת אולטרסאונד רבייה טרנסבדומינלית

1. יש למרוח כמות נדיבה של ג'ל צימוד אקוסטי על הבטן הקאודלית.
2. מניחים מתמר ליניארי מעוקל 5-10 MHz על העור של הבטן caudal, מיד גולגולת הערווה, ולהזיז אותו לאט בכיוון גולגולתי כדי להעריך את המבנים בתוך חלל האגן. סרוק את הרבעים השמאליים והימניים של הבטן הקאודלית כדי להעריך את שתי הקרניים של הרחם הדו-קרן של המונטיאק.
   שים לב: אולטרסאונד בטן מקיף כרוך בהערכה של כל הקרביים הבטן, כולל הכבד, הכליות, הטחול, מערכת העיכול, שלפוחית השתן, ודרכי הרבייה. לצורך פרוטוקול זה, רק בדיקה של הריון תידון בפירוט; עם זאת, המראה הרגיל של איברי בטן אחרים caudal צריך להיות מוכר כמו מבנים אלה צפויים להיתקל במהלך המחקר. האיברים הנפוצים ביותר במיקום זה כוללים קטעים של מערכת העיכול, שלפוחית השתן, ואת מערכת הרבייה. המעי הגס והמעי הדק מזוהים על ידי המראה השכבתי האופייני של דופן המעי. לומן עשוי או לא יכול להיות מבוטא בהתאם לסוג וכמות התוכן, אשר עשוי לכלול נוזלים, גז, רירי, או חלקיקי מזון. ייתכן שיהיה קשה לזהות את שלפוחית השתן אלא אם כן היא נפוחה בשתן, והשכבות של דופן שלפוחית השתן פחות ברורות באופן משמעותי מאלה של המעיים. מלבד הרחם, השחלות ניתן למצוא גם על אולטרסאונד של מערכת הרבייה של muntjac הנשי. השחלות יופיעו כמבני ביציות ליד מוט הקאודל של הכליות, ומראהן עשוי להשתנות במהלך מחזור האסטרוס. נוכחותם של זקיקים בוגרים ומלאי נוזלים מרובים בתוך קליפת המוח מרמזת על אסטרוס.
   שים לב: על ידי סיבוב ו/או "פנינג" ראש הסריקה של המתמר, ניתן להעריך מבנים במישורים רוחביים או קשתיים.
   1. במידת הצורך כדי להבדיל בין רחם גרוויד לבין שלפוחית השתן, רוקן את שלפוחית השתן באופן ידני על ידי הפעלת לחץ עדין על הבטן הקאודלית או על ידי הנחת קטטר שתן וחזרה על הסריקה.
      שים לב: ביטוי ידני של שלפוחית השתן יש לנסות רק כאשר החיה נמצאת במצב קשה או זקוף, אשר מקל על אוריינטציה טבעית יותר של הקרביים הבטן ומפחית את הסיכון לטראומה למבנים אחרים. הרחם עשוי גם להיות מובחן משלפוחית השתן על ידי הערכת עובי דופן האיבר. העובי האופייני של שלפוחית השתן נפוחה בינונית הוא כ 1.4 מ"מ²⁴, בעוד המחברים מצאו כי הקיר השרירי יותר של הרחם gravid ב muntjac בדרך כלל מודד בין 7-8 מ"מ.
      שים לב: הריון מוקדם קשה לאבחן באופן סופי בשל חוסר מבנים עובריים לזיהוי, ולמעשה האינדיקציה הראשונה להריון עשויה פשוט להיות כיס נוזלי קטן בבטן הקאודלית. אם יראו אותו בשלב זה, העובר המתפתח יופיע כהיפרכואי, אוב למבנה אמורפי בתוך הרחם (איור 1).
3. בצעו התאמות בעומק, בתדירות וברווח לפי הצורך כדי לשפר את הניגודיות ואת פרטי התמונה.
   הערה: תדרים גבוהים יותר משויכים לאורכי גל קצרים יותר, הנחוצים לשיפור רזולוציית התמונה. רוב המתמרים מסוגלים לפעול בטווח של תדרים (לדוגמה, 6-10 מגה-הרץ)²⁴. ניתן לכוונן את התדירות באמצעות פקדי הסורק ביחידת האולטרסאונד, והגדלת התדירות תגרום לתמונה ברורה יותר. הגדלת התדירות בו זמנית מקטין את עומק חדירת גל קול; לכן, הפחתת התדירות עשויה להיות נחוצה כדי לדמיין מבנים עמוקים יותר, אבל הרזולוציה עלולה להיות בסכנה²⁴. מסיבה זו חשוב לבחור את התדר הגבוה ביותר האפשרי כדי להגיע לעומק הרקמה הרצוי. התאמות לבקרות הרווח ישנו את ההגברה של גלי קול החוזרים אל המתמר מהרקמות וישפיעו על מידת הניגוד בתמונה²⁴. הרווח צריך להיות מוגדר לנקודה שבה ניגודיות אופטימלית בין רקמות hyperechoic ו hypoechoic מושגת, והגדרות אלה ייתכן שיהיה צורך להתאים בהתאם למבנים כי הם להיות בתמונה.

3. קבלת מדידות עובריות

הערה: גיל ההיריון במינים רבים של בעלי חיים מקומיים ניתן להעריך באמצעות טווחי התייחסות הוקמה למדידות עובריות המתקבלות מבדיקת אולטרסאונד. המדידות הנפוצות ביותר כוללות אורך ישר של כתר עכוז (SCRL), עומק חזה (CD) ואורך הראש (HL)¹⁷. בעוד נתונים מספיקים עדיין לא נאספו כדי לפתח הנחיות גיל הריון אמין צבי muntjac של ריבס, מדידות ניתן לאסוף על מנת להתחיל להקים הפניות אלה. קצב הלב העוברי (FHR) הוכח במינים אחרים של cervid ו מהורהר להגדיל באופן ליניארי כמו ההריון מתקדם לנקודה מסוימת (בדרך כלל סביב יום 60 של ההריון), שבו קצב הלב מתחיל לרדת¹⁷. FHR עשוי לשמש להערכת גיל ההיריון בשילוב עם תצפיות אולטרסאונד אחרות, אולם הוא נפוץ יותר כמדד של הכדאיות העוברית^17,24. FHR חושב במונטג'אק של ריבס כבר 35 ימים לאחר ההזדווגות שנצפתה.

1. כדי למדוד SCRL, לאתר את הרחם על הצג ולבצע התאמות עדינות למיקום של מתמר עד תצוגה קשתית של העובר כולו מתקבל (איורים 2 ו -3). להקפיא את התמונה ולמדוד את המרחק בין ההיבט הגבי ביותר של הגולגולת ואת הבסיס של הנביאה (איורים 2 ו -3).
2. כדי למדוד תקליטור, לקבל תצוגה קשתית של העובר (אותה תמונה עשויה לשמש למדידת SCRL) ולמדוד את המרחק בין ההיבטים הגביים הגחוניים של בית החזה (איורים 2 ו -3).
3. כדי למדוד HL, באמצעות אותה תצוגה קשתית של העובר כמתואר במדידות SCRL ותקליטורים, למדוד את המרחק מן הסמל העורפי לבסיס האף (איורים 2 ו -3).
4. כדי לחשב את קצב הלב העוברי, לזהות את הלב בתוך חלל בית החזה של העובר על ידי הדמיה התכווצויות קצביות שלה. לחשב את הדופק על ידי ספירת מספר הצירים (פעימות לב) המתרחשים בתוך 1 דקות של זמן.
   שים לב: אם יחידת אולטרסאונד בשימוש יש יכולות דופלר, תכונה זו עשויה להיות מועסקת כדי לסייע עוד יותר להבחין את הלב מתנועות עובריות לא ספציפיות אחרות.
5. ודא שכל התמונות השמורות ולולאות הווידאו כוללות את כל המידע המזהה הדרוש, כולל שם בעל חיים או מספר, תאריך, מדידות ותוויות מבנה מתאימות.

4. מסקנות פרוצדורליות והתאוששות

1. הסר את כל שאריות ג'ל מגע אולטרסאונד מהבטן של החיה באמצעות מטלית רכה או מגבות נייר. יש לנקות את הג'ל מהמתמר לפני האחסון.
2. אם משתמשים בפרוטוקול ההרדמה המתואר בשלב 1.1, יש לנהל את atipamezole תת עורית במינון של 0.25 מ"ג/ק"ג כדי להפוך את ההשפעות של מדטומידין. אם באמצעות פרוטוקול סם שונה שבו אנטגוניסט זמין, לנהל סוכן זה לבעל החיים על פי המינונים שפורסמו בסיום ההליך כדי להאיץ את ההתאוששות.
3. מניחים את muntjac על משטח מיטה רך ב recumbency עצם החזה, עם הראש מורם מעט כדי להפחית את הסיכון של regurgitation ושאיפה של תוכן rumenal. לפקח על החיה מקרוב עד התאושש באופן מלא ומסוגל להסתובב סביב המתחם ללא סיוע.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

תוצאות

באמצעות הפרוטוקול המתואר כאן, הריון יכול להיות מאובחנים ומנוטרים צבי muntjac של ריב עם טכניקות פולשניות מינימלית. נקודת הזמן המוקדמת ביותר כי ההריון יכול להיות מזוהה על ידי המחברים היה כ 35 ימים לאחר התנהגות הזדווגות שנצפו.

בשלבים המוקדמים של ההיריון, ההריון אובחן על ידי הדמיה ?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

פרוטוקול זה מתאר את היישום של אולטרה סאונד transabdominal לאבחון הריון בצבי muntjac של ריבס. עולה בקנה אחד עם מחקרי אולטרסאונד אחרים, ציוד מתאים ומיומנות טכנית הם הכרחיים לבדיקת הרבייה מוצלחת של האימונית muntjac. סקירה מדוקדקת של אנטומיה בסיסית של יונקים, העקרונות הפיזיים של אולטרסאונד אבחון, ואת המראה...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0.45 mg/kg)	Fort Dodge Animal Health, Fort Dodge, Iowa	NADA 135-780
Azaperone tartrate (0.035 mg/kg)	ZooPharm
Medetomidine HCl (0.04 mg/kg)	ZooPharm
Ultrasound contact gel	Medline, Mundelein, Illinois	MDS092005
Atipamezole hydrochloride (Antisedan) (0.25 mg/kg)	Orion Corporation, Espoo, Finland	NADA 141-033
V-trough (optional)	N/A	N/A	Animal may be supported in dorsal recumbency on a standard examination table or other surface without the use of a V-trough
Electrical clippers or razor blades for hair removal	Oster, McMinnville, Tennessee	78005-140
Ultrasound system: Ibex Pro portable ultrasound	E.I. Medical Imaging, Loveland, CO	Ibex Pro
5-10 MHz transducer: CL3.8 5-2.5 MHz 60 mm curved linear array	E.I. Medical Imaging, Loveland, CO	290420
3 ml syringes	Covidien	1.18E+09
22 G needles	Covidien	8.88E+09