נהלי ביופסיה של שריר שלד אנושי באמצעות טכניקת Bergstrom השתנה

Summary

The purpose of this video is to present the modified Bergström skeletal muscle biopsy technique on human subjects.

Abstract

טכניקת הביופסיה מלעורית מאפשרת לחוקרים ולרופאים כדי לאסוף דגימות רקמת שריר שלד. הטכניקה היא בטוחה ויעילה ביותר. וידאו זה מתאר את טכניקת הביופסיה מלעורית באמצעות מחט Bergstrom שונה כדי להשיג דגימות רקמת שריר שלד מlateralis vastus של בני אדם. מחט Bergstrom מורכבת מצינורית חיצונית עם פתח קטן ('חלון') בצד של הקצה ונקז פנימי עם להב חיתוך בקצה הדיסטלי. בתנאי הרדמה וספטית מקומיים, המחט התקדמה לתוך שריר השלד באמצעות חתך בעור, הרקמה התת עורית, וfascia. בשלב הבא, היניקה מוחלת על הנקז הפנימי, הנקז החיצוני משוך לאחור, רקמת שריר שלד הוא נשאבה לתוך החלון של הצינורית החיצונית על ידי היניקה, והנקז הפנימי סגור במהירות, ובכך חיתוך או גזיר דגימת רקמת שריר השלד . המחט מסובבת 90 °60; וקיצוץ נוסף הוא עשה. תהליך זה ניתן לחזור עוד שלוש פעמים. טכניקת חיתוך מרובה זה בדרך כלל מייצרת מדגם של 100-200 מ"ג או יותר בנבדקים בריאים ויכולה להיעשות באופן מיידי לפני, במהלך, ואחרי התקף של פעילות גופנית או התערבות אחרת. בעקבות הלבשה לאחר ביופסיה של אתר החתך, נושאים בדרך כלל לחדש את פעילותם של חיים היום יום באופן מיידי ויכולים להשתתף באופן מלא בפעילות גופנית נמרצת בתוך 48-72 שעה. נושאים צריכים להימנע מפעילות גופני התנגדות כבדה ל48 שעות כדי להפחית את הסיכון של פריצת של השריר דרך החתך בfascia.

Introduction

טכניקת הביופסיה מלעורית או 'פתוחה למחצה "משמשת כדי להשיג דגימות רקמת שריר שלד מחולים אנושיים ונושאי מחקר. דושן (1806-1875) הוא זוכה כראשון לבניית מחט עם נקז כדי להשיג שרירי שלד מנושאים המתגוררים דרך הביופסיה מלעורית ^1. בשנתי ה -1960, Bergstrom הציג מחט ביופסיה מלעורית דומה לזה שתואר על ידי דושן ^2-4. עשרים שנה מאוחר יותר, אוונס et al. ⁵ הותאם על ידי יישום טכניקת יניקה דרך נקז החיתוך של מחט Bergstrom. שינוי זה יכול לשפר את התשואה של רקמה 3 עד 5 פי ^6,7, והוא מועסק בהגדרות מחקר קליניות וביו. טכניקה זו יש ותמשיך לטפח את האבחנה של myopathies וההבנה של המבנה והתפקוד של שרירי שלד שלנו.

טכניקת הביופסיה של שריר מלעורית היא straightforward. כאשר נעשו בצורה נכונה, עם הקפדה על טכניקת ספטית, הסיכונים הכרוכים בכך הם מינימאליים. הליך הביופסיה של השריר נחשב ככלי מחקרי לפרויקטי מחקר. חלק מהמוסדות האקדמיים מאפשרים מאומנים חוקרי פקולטה עם תואר דוקטור, עם פיקוח רופא ישיר, כדי להשיג ביופסיות שריר ואחרים דורשים רופא מוסמך לוח כדי לבצע את הטכניקה. צוות הביופסיה ASU ביצע בהצלחה מעל 1,600 ביופסיות שריר במהלך 13 השנים האחרונות ^8-15. המטרה של הווידאו הזה היא לתאר את טכניקת הביופסיה של שריר מלעורית מחט Bergstrom הותאם ⁵ להשיג דגימות רקמת שריר שלד מlateralis vastus של בני אדם.

Protocol

הליך שרירי השלד כמתואר להלן ההנחיות של אוניברסיטת מדינת Appalachian מוסדי המועצה לביקורת.

הערה: צוות מורכב ממפעיל (Ph.D. או MD שהוכשר בטכניקת הביופסיה), ולפחות אחד, אבל באופן אידיאלי, שלושה או יותר טכנאים. המפעיל אחראי לניהול ופיקוח על כל ההיבטים של הליך ביופסיה של שריר השלד. טכנאי אחד (טכנאי מס '1) הוא מייד אחראי על סיוע למפעיל עם כל ההיבטים של הפקת שריר. זה כולל להיות "הידיים שאינן סטרילי" והחלת שאיבה עם מזרק סטרילי. טכנאי שני (# טכנאי 2) עוסק בשיחה עם נושא ועיסויי הרגל הנגדית של הנבדק במהלך הליך כדי למזער את חרדתו של הנושא. הטכנאי השלישי (# 3 טכנאי) הוא אחראי לטיפול ועיבוד מדגם שרירי השלד. אמצעים אנליטיים במורד הזרם להכתיב כמה additטכנאי ional נדרשים לעיבוד / הכנת מדגם שרירי השלד.

.1 בכפוף הכנה

1. לאסוף, להכין, ולארגן את החומרים שצוינו עבור הליך הביופסיה של שריר (טבלת 1). לטהר ולחטא את מחט Bergstrom (צינורית חיצונית ונקז פנימי) ואת הבוכנה על פי נוהג סטנדרטי ^16.
2. סקור את טופס ההסכמה בנושא. חלק הביופסיה של שריר השלד של ההסכמה להשתתפות טופס משמש באוניברסיטת מדינת Appalachian מסופק במוסף מקוון 1.
   1. לדבר לנושא על ההיבטים הכלליים של הליך הביופסיה של שריר עם דגש על סיכונים אפשריים של ההליך, הכנת עור, יישום של חומר ההרדמה, תחושות אופייניות. הדריכו את הנושא כדי לקרוא את ההסכמה להשתתף טופס ולחתום עליו כדי לוודא שעיצוב המחקר והנהלים הם הבינו היטב.
3. ודא שהיםubject הוא לא אלרגי ל" ___ קיין "תרופות מסוג (למשל, לידוקאין).
4. הדריכו את הנושא לשכב פרקדן על שולחן מרופד עם הירך החשופה. מניחים שני underpads סופג חד פעמי עם כיסוי פלסטי תחת רגלו של הנושא. מקם את הרגל בצורה רגועה עם לחמנייה קטנה מגבת מתחת לעקב, כגון (~ סנטימטר גבוה 1) שהברך פתוחה לגמרי, ובכך הצבת lateralis vastus במצב מקוצר.
5. יש לי המפעיל להורות כפוף לחוזה לרגע את שריר הירך החשוף, כך שיכול להיות דמיין אתר הביופסיה. הערה: vastus lateralis אתר ביופסיה רק קדמי לאטה fascia (להקת illiotibial), כשליש מהמרחק בין החלק העליון של הפיקה וtrochanter הגדול יותר ^7.
6. יש לי סימן המפעיל ממש מתחת (~ 0.5 סנטימטר) אתר החתך עם סמן קבע נקודה עדינה.
7. האם למפעיל לקבוע את עובי skinfold המשוער ידי Pincהינג skinfold.
8. יש לי המפעיל וטכנאים לרחוץ את ידיהם בסבון ובמים חמים ודון כפפות חד פעמיות.
9. יש לי המפעיל להסיר את השיער מאזור ~ 15 סנטימטר x 15 סנטימטר מסביב לאתר הביופסיה (באמצעות קוצץ). הערה: גזיר השיער מאתר הביופסיה מונעת שיער מלקבל לתוך החתך במהלך ההליך ובמהלך סגירה, והסרת שיער מאפשרת למגע טוב יותר בין הסגרים הקלטת והעור (ראה 3.4).
10. יש לי המפעיל לחטא את האזור עם צמר מראש ספוגה אקטואלית חיטוי, (כגון povidone- יוד או gluconate chlorhexidine לנושאים אלרגיים ליוד / צדפות). תתחיל במרכז ולעבוד במעגלים קונצנטריים לכיוון הקצה החיצוני של האזור הגזום. לכל הפחות, לחזור פעמיים נוספות עם ספוגית מראש ספוגה חדשה בכל פעם.

.2 ביופסיה נוהל

1. יש לי המפעיל להסיר כפפות חד פעמיות, לשטוף את הידיים עם סבון ומים חמים, ודון GL ניתוח סטריליoves באמצעות טכניקת ספטית.
2. יש לי טכנאי הווה # 1 הווילון fenestrated סטרילי למפעיל. יש לי המפעיל, באמצעות טכניקת ספטית, למקם את הווילון מעל אתר הביופסיה כדי לשמור על שדה סטרילי.
3. יש לי טכנאי הווה # 1 המפעיל מצויד במחט G 21 תוך שמירה על טכניקת ספטית מזרק 5 מ"ל. נקה את החלק העליון של הבקבוקון לידוקאין עם ספוגית אלכוהול.
   1. יש לי המפעיל לסגת באופן מיידי 5 מ"ל של לידוקאין. הסר 21 מחט G מהמזרק וזורקים את המחט לתוך מיכל חד.
   2. יש לי טכנאי הווה # 1 המפעיל עם 1 אינץ-½ 25 מחט G תוך שמירה על טכניקת ספטית. יש לי מקום מפעיל מחט 1 אינץ-½ על המזרק ולפנות את בועות האוויר מהמזרק.
4. יש לי # 1 כלוריד טכנאי תרסיס אתיל באתר החתך (~ 0.5 סנטימטר מעל סימן דיו בלתי מחיק על העור) עד שהעור נראה "להלבין".
   1. חהve המפעיל להכניס את המחט כ אופקית לעור לתוך הדרמיס, לשאוב את המחט, ולאחר מכן לחדור עם ~ 100 μl של לידוקאין לייצר 2-4 מ"מ "בועה" בקוטר.
      1. יש לי לשאוב מפעיל המחט (מעט למשוך את הבוכנה של המזרק) כדי לוודא שהמחט לא הוצבה בכלי דם. אם דם מופיע במזרק, למשוך את המחט, להשליך במכל חד, ולהתחיל שוב ב2.3.
      2. יש לי מראש מפעיל המחט לתוך הרקמה התת עורית, לשאוב את המחט, ולאחר מכן לחדור את הרקמה עם ~ 1 מ"ל של לידוקאין ליצירת בועה. ברגע שהבועה שככה, להכניס את מחט 1-½ סנטימטר על המזרק טעון ידוקאין אנכי לתוך אתר החתך, לעצור שטחי לfascia. הערה: הנושא עלול להרגיש עקצוץ רגעי קל על ההזרקה הראשונית של לידוקאין (בדומה לעקיצת דבורה).
   2. ודא שoperatאו לא לחדור את השריר עם lidocoine כי זה myotoxic ^17-19.
   3. יש לי לשאוב מפעיל המחט ולאחר מכן להזריק 4 מ"ל שנותר באיטיות של לידוקאין תוך הוצאת המחט מהירך. מניחים גזה סטרילית על אתר הזרקה ולאפשר את הנושא להירגע תוך ההרדמה המקומית תיכנס לתוקף.
5. אחרי 2-3 דק ', יש לי טכנאי הווה # 1 מפעיל אזמל תוך שמירה על טכניקת ספטית.
   1. יש לי המפעיל קל לחקור את אתר הביופסיה עם הקצה של סכין המנתחים כדי לאשר שבאזור הוא הרדים. במידת צורך, להזריק עוד 3-4 מ"ל של לידוקאין לאתר החתך, לראות 2.4.1.2.
6. יש לי המפעיל לעשות חתך 1 סנטימטר ישר דרך העור ורקמות תת עורי (~ 2-3 מ"מ מעל סימן הדיו) במקביל לעצם הירך.
   1. יש לי המפעיל להכניס את האזמל עמוק יותר לעשות חתך דרך fascia לתוך השריר. האם פעם זה לכל כיוון . הערה: הנושא עלול להרגיש צביטה או לחץ עם החתך העמוק יותר, אם קיצוץ להב אזמל לתוך השריר.
   2. יש לי טכנאי 2 # לעסוק בנושא בשיחה ולעסות את הרגל הנגדית.
7. יש לי מקום מפעיל כמות ליברלית של גזה סטרילית על אתר החתך וביופסיה והפעיל לחץ ישיר לחתך כדי להפחית את הדימום.
   1. יש לי טכנאי המס '1 לחבר את ברזלים מתכת 3 כיוונים למזרק 60 מ"ל חד פעמי וצינורות 30 סנטימטר הארכה (איור 1).
   2. יש לי טכנאי # 1 חבר קצה אחד של connecter צינורות פלסטיק המחודד לקצה החופשי של צינור ההארכה ותקיפות להכניס את הקצה השני של connecter צינורות פלסטיק המחודד לסוף הגדול של פיפטה קצה 200 μl עם ~ 15-18 מ"מ של טיפ מנותק.

"Width =" .jpg 500 "/>
איור 1 מחט Bergstrom. מחט Bergstrom (5 מ"מ) (א) מורכב מ( א) הצינורית החיצונית ו( ב) הנקז פנימי, הרכיבים הנלווים כוללים בוכנה (ג), קצה פיפטה 200 μl עם ~ 15-18 מ"מ מנותק (ד) , מחבר פלסטיק (ה) מחודד, ברזלים מתכת 3 כיווני מחט Bergstrom (5 מ"מ) (ו), צינורות הארכת 30 סנטימטר (ז), ומזרק 60 מ"ל חד פעמי (h). (B) ורכיבים נלווים שנאסף. ( C) הנקז הפנימי של מחט Bergstrom (5 מ"מ) נסוגה כ 1 סנטימטר פותח את החלון של הצינורית החיצונית.

9. לאחר הדימום שכך, יש לי טכנאי המס '1 לפתוח את כיס החיטוי העיקור ולהציג את מחט 5 מ"מ הביופסיה ונקז פנימי (איור 1) למפעיל תוך שמירה על טכניקת ספטית.
   1. האם המפעיל להרכיב את המחט (צינורית חיצונית ונקז פנימי), לבדוק יישור ופעולת הזזה.
   2. בתוקף יש לי המפעיל להחזיק את ההרכבה המחט (צינורית חיצונית ונקז פנימי) בשתי הידיים כדי למנוע את הנקז הפנימי מהסיבוב. האם טכנאי המס '1 בתוקף להכניס את קצה פיפטה לחתוך לתוך החלק העליון של חלק הנקז הפנימי של מחט הביופסיה עם תנועת פיתול קלה כלפי מטה. ודא שטכנאי 1 # לא נוגע במפעיל או מחט הביופסיה, רק קצה פיפטה.
   3. יש לי המפעיל להציג את מחט הביופסיה לרקמה דרך החתך. אתר את החתך בfascia ("תחושה" שנרכשה) עם קצה מחט הביופסיה. לקדם את המחט בעבר רק את זווית fascia ולאחר מכן את המחט כלפי מטה לכיוון הרצפה כמו המחט התקדמה לתוך השריר. הערה: נושאים אשר חווים חוסר נוחות קלה (למשל "לחץ עמוק,", או תחושת התכווצויות קלה) כחתך דרך fascia ממוקם בקצה מחט הביופסיה והמחט התקדמה לתוך השריר.
      1. יש לי # 2 שמנחה טכנאי הנושא להישאר "רגוע" ולא להתכווץ שרירי הירך שלהם בזמן שמפעיל קידום המחט לתוך השריר.
   4. ברגע שמחט הביופסיה היא בעמדה, יש לי הטכנאי # אות מפעיל 1 כדי לפתוח את מזרק 60 מ"ל חד פעמי.
      1. יש לי טכנאי המס '1 במהירות למשוך את מזרק 60 מ"ל חד פעמי פתוח לסימן 40-50 סמ"ק כדי ליצור יניקה בתוך מחט הביופסיה.
      2. יש לי המפעיל למשוך את הנקז הפנימי מתוך כ 1 סנטימטר כדי לפתוח את החלון של הצינורית החיצונית תוך שמירה על העמדה של הנקז החיצוני בתוך השריר. יש לי מפעיל מהירות לסגור את הנקז הפנימי לחתוך (קליפ) ולאסוף את דגימת השריר. יש לי הטכנאי # אות מפעיל 1 לשחרר יניקה.
      3. יש לי טכנאי המס '1 לפתוח את השסתום לחדר כדי לשחרר את היניקה.
      4. יש לי המפעיל לסובב את מחט הביופסיה 90 ° ולחזור על התהליך. במידת הצורך, יש לי repea המפעילt הליך הרוטציה עד פי 3 (עבור הסכום כולל של 4 סרטונים).
   5. יש לי המפעיל להחיל לחץ נגדי ישיר לאתר החתך עם גזה סטרילית תוך הסרת מחט הביופסיה מהירך, נזהר שלא יתפסו את fascia או עור. לחתוך מחדש אם התנגדות משמעותית מורגשת, תוך יישום תנועת פיתול לנקז הפנימי.
   6. לאחר ההסרה של מחט הביופסיה מהירך, יש לי המפעיל למשוך את הנקז הפנימי אחורי 1 סנטימטר כדי לבדוק חזותי לומן של הצינורית החיצונית כדי להעריך אם כמות מספקת של רקמה נאספה.
      1. יש לי מפעיל יד מחט הביופסיה לטכנאי מס '1. כדי לשמור על טכניקת ספטית להבטיח שטכנאי 1 # רק נוגע במחט, לא למפעיל. יש לי טכנאי יד # 1 מחט הביופסיה לטכנאי 3 #.
   7. יש לי # 3 הסר טכנאי הרקמה מביופסית המחט.
      1. יש לי שימוש טכנאי 3 # הבוכנה (איור 1) וזוג מלקחיים קצה קנסכדי להבטיח שכל רקמת השריר היא להסיר את הנקז הפנימי וצינורית חיצונית.
      2. יש לי טכנאי # 3 לשקול במהירות את הדגימה כדי לוודא שכמות מספקת של רקמת שריר נאספה ולמקם את הדגימות בבלוק נתיחה קרה כקרח.
   8. יש לי טכנאי # 3 לנתח בזהירות רקמת חיבור גלויה ושומן מדגימות השריר. האם טכנאי # 3 להכין את דגימות שריר לאחסון על פי ניתוחים במורד הזרם. לדוגמא, תניח מייד דגימות בcryovial ולהצמיד הקפאה בחנקן נוזלי, הר ולהקפיא להיסטולוגיה, או מקום בcryovial עם מעכב RNase, וכו '
   9. אם יש צורך, חזור על התהליך עם מחט ביופסיה מעוקרת שנייה תוך שמירה על טכניקת ספטית.

   .3 סגירה

   1. יש לי המפעיל להפעיל לחץ ישיר לאתר של ביופסיה עם גזה סטרילית ושקית קרח ל10-15 דקות.
   2. ברגע עצירת דימום מושגת, יש יחסי ציבור אלכוהול שימוש מפעילרפידות ep כדי להסיר דם מיובש מסביב חתך האזור.
   3. יש לי טכנאי הווה # 1 שפופרת של דבק אקטואלי כירורגית ומוליך למפעיל. יש לי המפעיל להרכיב את השפופרת של דבק ומוליך כירורגים בלי לגעת בקצה המוליך או החלק העליון של הצינור.
   4. יש לי המפעיל למשוך את החתך נסגר ביד אחת תוך יישום שכבה אחת של דבק כירורגים מעל החתך היבש ביד השנייה. לאחר המרפא דבק (~ 90 שניות), תחול closuresperpendicular קלטת לחתך. לחלופין, לסגור את החתך עם שני 4-0 תפרים סטריליים.
   5. יש לי המפעיל להפעיל לחץ ישיר על ידי הצבת 03-04 פבואר "x 2" פדה גזה לא סטרילי באתר החתך ובטוח עם לעטוף דבק דבקות עצמית.
   6. יש לי המפעיל לספק את הנושא מילולי והוראות בכתב על טיפול בפצע נכון, תגובות נורמליות ולא נורמליות, והנחיות פעילות ל1 עד 4 הימים הבאים (ראה su המקווןpplement 2).

תוצאות

הליך הביופסיה של השריר כפי שתואר לעיל מאפשר לחוקר לאסוף במהירות ובאופן עקבי דגימות רקמת שריר שלד. התשואה האופיינית בנבדקים בריאים, אתלטי היא 200 מ"ג או יותר במעבר אחד עם 3-4 סרטונים. ההליך אורך 15-20 דקות, שרובו בילו בהכנה לחתך. במחקרים מבוססי תרגיל, דגימות שריר לעתים קרו...

Discussion

וידאו זה מספק סיכום צעד אחר צעד של הליך ביופסיה של שריר השלד המשמש במעבדה ביצועי אדם ASU. הליך זה, עם שינויים קטנים, נעשה שימוש כדי לאסוף כ 1,600 ביופסיות שריר במהלך 13 השנים האחרונות. דגימות הביופסיה של השריר סיפקו נתונים חשובים בחקירות מבוססות תזונת ספורט, שהובילו לתגליו?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Bergström biopsy needle, 5 x 100 mm	Stille Surgical Inc.	119-29187-50	1 ea
Durasorb blue pad	Fisher	22-031-340	case of 300
Prep razor disposable	Moore Medical	89760	1 ea
Shave cream	Moore Medical	92869	1 can
Alcohol swab	Moore Medical	98721	box/200
Povidone-iodine swabsticks (3 pack)	Moore Medical	90691	pack of 50
Face masks	Fisher	19-039-690	case of 50
Sterile gloves; sz 6.5	Moore Medical	68128	box of 50 pairs
Sterile gloves; sz 7.0	Moore Medical	68129	box of 50 pairs
Sterile gloves; sz 8.5	Moore Medical	68132	box of 50 pairs
Fenestrated towel drape	Moore Medical	92712	case of 50
Lidocaine (1% HCl, w/o Epi)	Dealmed	427902	30 cc vial
Ethyl chloride spray	Dealmed	386020	3.5 fl. Oz. bottle
5 ml syringe w/ 21 G needle	Fisher	14-827-48	case of 100
25 G 5/8" needle	Fisher	14-826AA	case of 100
25 G 1 1/2" needle	Fisher	14-826-49	case of 100
Single-use scalpels w/ #11 blade	Fisher	0-8927-5B	box of 20
60 ml Syringe	Fisher	13-689-8	case of 40
~30 inch extension tubing	Fisher	14-169-7A	roll of 50 ft
Metal stopcock	Fisher	01-290-38	each
Polypropylene tubing connector w/ tapered ends, 3.2 to 5.5 mm	Fisher	15-315-28A	case of 100
Yellow pipette tips (1-200 µl)	Fisher	02-681-2	cut off ~15-18 mm of the tip
Topical surgical adhesive	Medline	MSC091076	case of 36 tubes
Topical surgical adhesive	Medline	MSC091076Z	box of 6 tubes
Butterfly stitches (adhesive strips) 1/2" x 4" (6 per pack)	Moore Medical	93050	box/300
Bandadge, Strip, 3/4 x 3 in.	Fisher	19-027-202	pack of 100
Adhesive bandage (5 m rolls)	Fisher	19-027-768	case of 36
1" paper surgical tape	Fisher	19-027-761	case of 12
Sutures (4-0 reverse cutting, FS2)	Moore Medical	82926	box of 36
4 x 4 Sterile gauze pads	Moore Medical	66949	pkg/50
2 x 2 Non-sterile gauze pads	Moore Medical	37336	pkg/200
3 x 4 Non-adherent pads	Moore Medical	74389	bx/100
Autoclave bags 3.5 x 9	Moore Medical	40390	box of 200
Autoclave bags 5.25 x 10	Moore Medical	40391	box of 200
Autoclave indicator tape	Moore Medical	31608	box of 250
Lab coats—small	Fisher	23-900-520A	10/pk
Lab coats—medium	Fisher	23-900-520B	10/pk
Lab coats—large	Fisher	23-900-520C	10/pk
Germicidal Disposable Cloth Wipes	Moore Medical	62879	Can/160