Человеческого скелета Процедуры биопсии мышц с использованием модифицированного Бергстром Техника

Резюме

The purpose of this video is to present the modified Bergström skeletal muscle biopsy technique on human subjects.

Аннотация

Чрескожная техника биопсия позволяет исследователи и клиницисты, чтобы собрать образцы ткани скелетных мышц. Методика безопасна и высоко эффективна. Это видео описывает чрескожную технику биопсии, используя модифицированную Бергстром иглу для получения образцов ткани скелетных мышц от латеральной широкой человеческих субъектов. Бергстрём иглы состоит из наружной канюли с небольшим отверстием («окно») на стороне наконечника и внутренней троакара с режущим лезвием на дистальном конце. Под местной анестезией и асептических условиях, игла продвигается в скелетных мышцах через разрез в коже, подкожной клетчатки, и фасции. Далее, всасывающий применяется к внутренней троакара, внешний троакара отведена назад, ткани скелетных мышц втягивается в окне внешней канюли всасывания, а внутренний троакара быстро закрыт, таким образом, резки или отсечения образец ткани скелетных мышц . Игла поворачивается на 90 °60, а другой надрез. Этот процесс может быть повторен еще три раза. Этот метод множественного резки, как правило, производит выборку 100-200 мг или более в здоровых субъектов и может быть сделано непосредственно перед, во время и после приступа упражнения или другого вмешательства. После пост-биопсии декорирования месте разреза, предметы, как правило, возобновить свою деятельность в повседневной жизни сразу же, и может в полной мере участвовать в энергичной физической деятельности в течение 48-72 часов. Субъекты должны избегать тяжелые упражнения сопротивления в течение 48 часов, чтобы снизить риск грыжи мышцы через разрез в фасции.

Введение

Чрескожная или «полуоткрытый» методика биопсии используется для получения скелетных образцы мышечной ткани от больных людей и предметов исследования. Дюшенна (1806-1875) приписывают как первый построить иглу с троакар для получения скелетной мышцы от живых субъектов через чрескожной биопсии ^1. В 1960-х годах, Bergström представила чрескожной биопсии иглы подобный тому, который описан Дюшенна ^2-4. Двадцать лет спустя, Эванс и др. ⁵ модифицировали технику, применяя всасывание через режущей троакар иглы Bergström. Эта модификация может увеличить выход ткани от 3 ​​до 5-кратного ^6,7 и используется в клинических и медико-биологических исследований настроек. Этот метод имеет и будет продолжать укреплять диагноз миопатии и наше понимание структуры и функции скелетных мышц.

Техника биопсии чрескожная мышцы straightforward. Если все сделано правильно, при строгом соблюдении асептики, связанные с этим риски минимальны. Процедура биопсии мышц рассматривается как исследуемого инструмента для научно-исследовательских проектов. Некоторые учебные заведения позволяют подготовку преподавателей исследователей со степенью доктора наук, с прямым врача надзора, чтобы получить биопсию мышц и другие требуют сертифицированный врач выполнять технику. Биопсия команда АСУ успешно выступал более 1600 биопсию мышц в течение последних 13 лет ^8-15. Цель этого видео заключается в описании изменение Bergström иглы чрескожная мышц технику биопсии ⁵ получить образцы ткани скелетных мышц от латеральной широкой человеческих субъектов.

протокол

Скелетных мышц процедура, как описано соответствии с руководящими принципами Аппалачи государственный университет ведомственного комитета по вопросам.

ПРИМЕЧАНИЕ: Команда состоит из оператора (Ph.D. или MD подготовку в технике биопсия), и по крайней мере один, но в идеале, три или больше техники. Оператор несет ответственность за проведение и контроль всех аспектов скелетной процедуры биопсии мышц. Один техник (техник # 1) немедленно отвечает за оказание помощи оператора со всеми аспектами добычи мышц. Это включает в себя самые "нестерильные руки" и применяя всасывание со стерильным шприцем. Второй техник (техник # 2) участвует в беседе с субъектом и массажа противоположной ногу пациента во время процедуры, чтобы минимизировать беспокойство субъекта. Третий техник (техник # 3) отвечает за обработку и скелетную образец мышечной. Downstream аналитических мероприятий диктовать, как много AdditIONAL техники требуются для обработки / подготовки скелетных образец мышечной.

1 Тема Подготовка

1. Соберите, подготовить и организовать материалы, указанные для процедуры биопсии мышц (Таблица 1). Дезактивации и стерилизовать иглу Bergstrom (внешняя канюли троакара, и внутренняя) и плунжер соответствии со стандартной практикой ^16.
2. Просмотрите форму согласия с предметом. Скелетных мышц биопсия часть согласие на участие форма, используемая в Аппалачи государственного университета предоставляется в интернет-приложении 1.
   1. Поговорите к теме об общих аспектов процедуры биопсии мышц с акцентом на возможные риски процедуры, подготовка кожи, применения наркоза, типичных ощущений. Поручить тему внимательно прочитать согласие на участие форму и подписать его, чтобы подтвердить, что дизайн и процедуры исследования понимаются.
3. Убедитесь, что сubject нет аллергии на "___ Кейн" типа препараты (например, лидокаин).
4. Поручить тему лежать на спине на мягком столе с бедра подвергаются. Поместите два одноразовых впитывающих гкие с пластиковой подложке под ногу пациента. Расположите ноги в непринужденной манере с небольшим креном полотенце под пятку, так что колено полностью выдвинут (возведен ~ 1 см), таким образом, размещение латеральной широкой в ​​сокращенном положении.
5. Есть оператор попросите модель на мгновение контракт подвергается мышцу бедра так, чтобы биопсия сайт могут быть визуализированы. Примечание: широкой латеральной биопсии сайт просто впереди фасции лата (illiotibial Band), примерно на одну треть от расстояния между верхней части коленной чашечки и большого вертела ^7.
6. Есть оператор отметку чуть ниже (~ 0,5 см) разреза сайт с прекрасным точки маркером.
7. Были оператор определения приблизительного толщину кожной складки на Pincповесят на кожной складки.
8. У оператора и техников мыть руки с мылом и теплой водой и надеть одноразовые перчатки.
9. Есть оператор удалить волосы из области ~ 15 см х 15 см вокруг биопсии (через кусачки). Примечание: обрезание волос от биопсии предотвращает волосы от попадания в разрез во время процедуры и при закрытии, и эпиляция позволяет для лучшего контакта между закрытием ленточных и кожи (см 3.4).
10. У оператора стерилизации области с тампоны предварительно пропитанные актуальным антисептик, (например, повидон-йода или хлоргексидина глюконат для субъектов с аллергией на йод / моллюсков). Начало в центре и работать в концентрических кругов к внешнему краю обрезанной области. Как минимум, повторить еще два раза с новым предварительно пропитанные тампоном каждый раз.

2 Биопсия Порядок

1. Есть оператор удалить одноразовые перчатки, вымыть руки с мылом и теплой водой, и Дон стерильную хирургическую глОВЭС помощью асептической техники.
2. Есть техник # 1 настоящей стерильной Фенестрированные драп оператору. У оператора, с помощью асептической техники, разместить драпировка над биопсии поддерживать стерильное поле.
3. Есть техник # 1 настоящей оператор 5 мл шприц оснащен 21 G иглы при сохранении асептики. Очистите верхнюю часть лидокаина флаконе спиртовым тампоном.
   1. Есть оператор немедленно вывести 5 мл лидокаина. Снимите 21 G иглу от шприца и выбросить иглу в контейнер для острых предметов.
   2. Есть техник # 1 настоящей оператора с 1-½ дюйма 25 G иглы при сохранении асептики. Есть место оператора дюймового иглу 1-½ на шприц и эвакуировать пузырьки воздуха из шприца.
4. Есть техник # 1 спрей этилхлорид на сайте разреза (~ 0,5 см выше несмываемыми чернилами отметки на коже), пока кожа не появится в "бланшировать."
   1. Хаве оператор вставить иглу приблизительно горизонтально по отношению к коже в дерму, аспирации иглу, а затем пропитать с ~ 100 мкл лидокаина для получения "пузырь" 2-4 мм в диаметре.
      1. У оператора аспирации иглой (немного снять поршень шприца), чтобы подтвердить, что игла не была размещена в кровеносном сосуде. Если кровь в шприце, извлеките иглу, откинуть на контейнер для острых предметов, и начать снова в 2,3.
      2. У оператора заранее иглу в подкожной ткани, аспирация иглой, а затем проникнуть в ткани с ~ 1 мл лидокаина, чтобы сформировать волдырь. После того, как пузырь ослабла, вставьте 1-½ дюйма иглы на лидокаин загружены шприц вертикально в месте разреза, останавливаясь поверхностные фасции. Примечание: Субъект может почувствовать небольшое кратковременное ощущение жжения при первой инъекции лидокаина (похожее на укус пчелы).
   2. Убедитесь, что в OPERATили не проникнуть в мышцы с lidocoine, потому что это myotoxic ^17-19.
   3. У оператора аспирации иглой, а затем медленно вдохнуть оставшиеся 4 мл лидокаина при выводе иглы из бедра. Поместите стерильную марлю над инъекции и позволяют предметом для отдыха во время местный анестетик вступает в силу.
5. Через 2-3 мин, есть техник # 1 подарок оператор скальпель при сохранении асептики.
   1. У оператора слегка исследовать биопсии сайт с кончика скальпеля, чтобы подтвердить, что область находится под наркозом. При необходимости вводят еще 3-4 мл лидокаина в месте разреза, см 2.4.1.2.
6. Есть оператор сделать прямой 1 см разрез через кожу и подкожные ткани (~ 2-3 мм выше чернильной метки) параллельно бедренной кости.
   1. Есть оператор вставить скальпель глубже, чтобы сделать надрез через фасции в мышцу. Сделайте это один раз в каждом направлении . Примечание: Субъект может чувствовать укол или давление с глубокого разреза, если сокращений лезвие скальпеля в мышцу.
   2. Есть техник # 2 заниматься тему в разговоре и массировать противоположную ногу.
7. Есть место оператора либеральное количество стерильной марли над разреза и биопсии и применить прямое давление на разрез, чтобы уменьшить кровотечение.
   1. Есть техник № 1 подключить 3-ходовой металлический кран с одноразового шприца 60 мл и расширением трубки 30 см (рисунок 1).
   2. У техник № 1 одним концом конической разъемом пластиковых труб в свободный конец удлинительной трубки и плотно вставить другой конец конической разъемом пластиковых труб в большом конце пипетки 200 мкл с ~ 15-18 мм кончик отрезать.

.jpg "ширина =" 500 "/>
Рис.1 Bergström иглы. () Bergström иглы (5 мм) состоит из (а) внешней канюли и (б) внутренней троакар, связанные с ними компоненты включают (с) поршня, (г) 200 мкл пипетки с ~ 15-18 мм отрезать , (е) конические пластиковые разъем, (е) 3-металла кран, (г) 30 см расширение трубы, и (з) одноразовый шприц 60 мл. (В) Бергстрём иглы (5 мм) и соответствующие компоненты в сборе. ( с) внутренний троакара иглы Bergström (5 мм) выведены примерно 1 см открывает окно внешней канюли.

9. После того, как кровотечение утихла, есть техник № 1 открыть стерилизованный автоклаве мешочек и представить 5 мм иглу биопсии и внутренний троакар (Рисунок 1) для оператора при сохранении асептики.
   1. Были оператор собрать иглу (внешнюю канюли и внутренний троакар), проверить выравнивание и раздвижные действий.
   2. У оператора прочно удерживать узел иглы (внешняя канюли и внутренняя троакара) обеими руками, чтобы предотвратить внутреннюю троакар вращение. Были техник # 1 плотно вставить наконечник пипетки разрез в верхней части внутренней троакара части биопсии с небольшим вращательным движением вниз. Убедитесь, что техник № 1 не прикасайтесь к оператору или иглу биопсии, только пипетки.
   3. Есть оператор ввести иглу биопсии в ткани через разрез. Найдите разрез в фасции (приобрел «чувствовать») с кончика биопсии иглой. Advance иглу сразу за углом фасции и затем игла вниз по направлению к полу, как игла продвигается в мышце. Примечание: Субъекты могут возникнуть некоторые умеренный дискомфорт (например, "глубокое давление", или мягкий ощущение судороги), как разрез через фасции находится с кончика биопсии иглы, а игла продвигается в мышцу.
      <литий> Есть техник # 2 попросите модель, чтобы остаться "расслабленным", а не сокращаться свои мышцы бедра, а оператор продвигает иглу в мышцы.
   4. После биопсии игла находится в положении, имеют сигнала оператор техник # 1, чтобы открыть одноразовый шприц 60 мл.
      1. Есть техник # 1 быстро вытащить одноразовый 60 мл шприц, открытый для 40-50 вв отметки создать всасывание в биопсии иглой.
      2. У оператора вытащить внутреннюю троакар из примерно 1 см, чтобы открыть окно внешней канюли при сохранении положения наружной троакара в мышце. Есть оператор быстро закрыть внутренний троакар сократить (клип) и собрать пробы мышц. Имейте сигнала оператор техник # 1, чтобы освободить всасывание.
      3. Есть техник № 1 откройте кран в комнату, чтобы освободить всасывание.
      4. У оператора повернуть иглу биопсии 90 ° и повторить процесс. При необходимости, есть оператор repeaт процедуру вращения до 3x (в общей сложности 4 зажимами).
   5. Есть оператор применять прямые противодавление в месте разреза стерильной марлей, удаляя иглу биопсии от бедра, стараясь не поймать фасции или кожи. Если значительное сопротивление чувствуется, повторно сократить, применяя вращательным движением к внутреннему троакар.
   6. После удаления биопсии от бедра, имеют оператор вытащить внутреннюю троакар обратно в 1 см визуально осмотреть просвет внешней канюли, чтобы оценить, если достаточное количество ткани была собрана.
      1. У оператора руку иглу биопсии, чтобы техник № 1. Для поддержания асептики гарантировать, что техник № 1 только коснется иглу, а не оператор. Есть техник # 1 стороны иглу биопсии, чтобы техник # 3.
   7. Есть техник # 3 Снимите ткань от биопсии иглой.
      1. Есть техник # 3 использовать поршень (рисунок 1) и пару тонких наконечников щипцовчтобы гарантировать, что все мышечная ткань удаляется из внутренней троакара и внешней канюли.
      2. У техник # 3 быстро взвешивают образец, чтобы подтвердить, что достаточное количество мышечной ткани собирали и поместить образцы на вскрытии блока ледяной.
   8. Есть техник # 3 тщательно анализировать видимый соединительной ткани и жира из образцов мышечных. Были техник # 3 приготовления образцов мышечных для хранения в соответствии с ниже по течению анализов. Например, сразу же поместить образцы в криопробирку и оснастки замораживание жидким азотом, смонтировать и заморозить для гистологии, или место в криопробирку с ингибитором РНКазы и т.д.
   9. При необходимости повторите процедуру со второй стерилизованной биопсии иглы при сохранении асептики.

   3 Закрытие

   1. Есть оператор оказать непосредственное давление на биопсии с стерильную марлю и пакетом льда в течение 10-15 минут.
   2. После гемостаза достигается, есть оператор использование алкоголя прEP колодки для удаления засохшей крови из области вокруг разреза.
   3. Есть техник # 1 настоящей тюбик местного хирургического клея и аппликатора к оператору. У оператора собрать трубу хирургического клея и аппликатора, не касаясь наконечника аппликатора или в верхней части трубки.
   4. У оператора тянуть разрез закрывают с одной стороны, применяя один слой клея хирургического поверх сухой разрез с другой стороны. После адгезива поверхности (~ 90 сек), применять ленты closuresperpendicular в разрез. Кроме того, закрыть разрез с двумя стерильными 4-0 швами.
   5. Есть оператор применять прямое давление путем размещения 3-4 2 "х 2" нестерильные марлевые компрессы на месте разреза и закрепите самоадгезивного клейкой пленкой.
   6. Есть оператор предоставить субъекту устные и письменные инструкции о правильном уходе раны, нормальных и ненормальных реакций, и руководящие принципы деятельности для следующих 1 до 4 дней (через онлайн-суpplement 2).

Результаты

Процедура биопсии мышц, как описано выше, позволяет исследователю быстро и последовательно собрать образцы ткани скелетных мышц. Типичный выход в здоровых, спортивных субъектов составляет 200 мг или больше в один проход с 3-4 клипов. Процедура занимает 15-20 минут, большинство из которых пр...

Обсуждение

Это видео обеспечивает шаг за шагом резюме скелетной процедуры биопсии мышц, используемой в АСУ лаборатории Performance человека. Эта процедура, с небольшими модификациями, был использован для сбора около 1600 мышечные биопсии в течение последних 13 лет. Образцы мышечной биопсии предоставили ...

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Bergström biopsy needle, 5 x 100 mm	Stille Surgical Inc.	119-29187-50	1 ea
Durasorb blue pad	Fisher	22-031-340	case of 300
Prep razor disposable	Moore Medical	89760	1 ea
Shave cream	Moore Medical	92869	1 can
Alcohol swab	Moore Medical	98721	box/200
Povidone-iodine swabsticks (3 pack)	Moore Medical	90691	pack of 50
Face masks	Fisher	19-039-690	case of 50
Sterile gloves; sz 6.5	Moore Medical	68128	box of 50 pairs
Sterile gloves; sz 7.0	Moore Medical	68129	box of 50 pairs
Sterile gloves; sz 8.5	Moore Medical	68132	box of 50 pairs
Fenestrated towel drape	Moore Medical	92712	case of 50
Lidocaine (1% HCl, w/o Epi)	Dealmed	427902	30 cc vial
Ethyl chloride spray	Dealmed	386020	3.5 fl. Oz. bottle
5 ml syringe w/ 21 G needle	Fisher	14-827-48	case of 100
25 G 5/8" needle	Fisher	14-826AA	case of 100
25 G 1 1/2" needle	Fisher	14-826-49	case of 100
Single-use scalpels w/ #11 blade	Fisher	0-8927-5B	box of 20
60 ml Syringe	Fisher	13-689-8	case of 40
~30 inch extension tubing	Fisher	14-169-7A	roll of 50 ft
Metal stopcock	Fisher	01-290-38	each
Polypropylene tubing connector w/ tapered ends, 3.2 to 5.5 mm	Fisher	15-315-28A	case of 100
Yellow pipette tips (1-200 µl)	Fisher	02-681-2	cut off ~15-18 mm of the tip
Topical surgical adhesive	Medline	MSC091076	case of 36 tubes
Topical surgical adhesive	Medline	MSC091076Z	box of 6 tubes
Butterfly stitches (adhesive strips) 1/2" x 4" (6 per pack)	Moore Medical	93050	box/300
Bandadge, Strip, 3/4 x 3 in.	Fisher	19-027-202	pack of 100
Adhesive bandage (5 m rolls)	Fisher	19-027-768	case of 36
1" paper surgical tape	Fisher	19-027-761	case of 12
Sutures (4-0 reverse cutting, FS2)	Moore Medical	82926	box of 36
4 x 4 Sterile gauze pads	Moore Medical	66949	pkg/50
2 x 2 Non-sterile gauze pads	Moore Medical	37336	pkg/200
3 x 4 Non-adherent pads	Moore Medical	74389	bx/100
Autoclave bags 3.5 x 9	Moore Medical	40390	box of 200
Autoclave bags 5.25 x 10	Moore Medical	40391	box of 200
Autoclave indicator tape	Moore Medical	31608	box of 250
Lab coats—small	Fisher	23-900-520A	10/pk
Lab coats—medium	Fisher	23-900-520B	10/pk
Lab coats—large	Fisher	23-900-520C	10/pk
Germicidal Disposable Cloth Wipes	Moore Medical	62879	Can/160