Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

עבודה זו מתארת ​​פרוטוקול מבוסס FACS המאפשר בידוד קל בו זמנית של סוג I ו pericytes סוג II של שרירי השלד.

Abstract

Pericytes הם תאים multipotent perivascular המציגים הטרוגניות באיברים שונים או אפילו בתוך הרקמה זהה. בשרירי השלד, יש לפחות שתי תת-אוכלוסיות (הנקראות סוג I וסוג II), המבטאות סמנים מולקולריים שונים ויש להן יכולות הבחנה שונות. באמצעות NG2-DsRed ו Nestin-GFP עכברים פעמיים מהונדס, סוג אני (NG2-DsRed + Nestin-GFP - ) וסוג II (NG2-DsRed + Nestin-GFP + ) פריסיטים היו מבודדים בהצלחה. עם זאת, הזמינות של עכברים אלה פעמיים מהונדס מונע את השימוש הנרחב של שיטה זו טיהור. עבודה זו מתארת ​​פרוטוקול חלופי המאפשר בידוד קל בו זמנית של סוג I ו pericytes סוג II של שרירי השלד. פרוטוקול זה מנצל את הקרינה המופעל תא מיון (FACS) טכניקה מטרות PDGFRβ, ולא NG2, יחד עם האות Nestin-GFP. לאחר בידוד, הקלד אני ו tyPe II pericytes להראות מורפולוגיות שונות. בנוסף, סוג I ו percytes סוג II מבודדים בשיטה חדשה זו, כמו אלה מבודד מן העכברים מהונדס פעמיים, הם אדיפוגניים ו myogenic, בהתאמה. תוצאות אלו מראות כי פרוטוקול זה ניתן להשתמש כדי לבודד subpopulations pericyte של שרירי השלד ואולי מתוך רקמות אחרות.

Introduction

ניוון שרירים הוא הפרעה ניוונית שרירית כי אין טיפולים יעילים עד כה. פיתוח טיפולים המקדמים התחדשות רקמות תמיד היה עניין רב. התחדשות רקמות ותיקון לאחר נזק תלוי בתאי גזע תושב / תאים אב 1 . תאי לוויין מחויבים תאים מבשר myogenic התורמים התחדשות שרירים 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 . השימוש הקליני שלהם, לעומת זאת, הוא הקשו על ידי הגירה מוגבלת שלהם שיעור הישרדות נמוך לאחר ההזרקה, כמו גם על ידי יכולת ירידה שלהם בידול לאחר הגברה במבחנה 8 , 9 , 10 , 11 . בנוסף satelliתאי T, שרירי השלד מכילים גם אוכלוסיות תאים רבים אחרים עם פוטנציאל myogenic 12 , 13 , 14 , 15 , 16 , כגון טסיות הנגזרות גורם גדילה ביתא (PDGFRβ) תאים interstitial אינטראקטיביים. ישנן ראיות מראה כי שריר הנגזרות PDGFRβ תאים + מסוגלים להבדיל לתאי myogenic ולשפר פתולוגיה שריר לתפקד 14 , 17 , 18 , 19 , 20 . PDGFRβ בעיקר תוויות pericytes 21 , אשר תאים perivascular עם pluripotency 22 , 23 . בנוסף PDGFRβ, סמנים רבים אחרים, כולל Neuron-Glial 2 (NG2) ו CD146, משמשים גם אניDentify pericytes 21 . עם זאת, יש לציין כי אף אחד מהסימנים הללו אינו ספציפי ל- pericyte 21 . מחקרים שנערכו לאחרונה חשפו שני תת-סוגים של פריסיטים בשרירים, הנקראים סוג I וסוג II, המבטאים סמנים מולקולריים שונים ומבצעים פונקציות שונות 19 , 24 , 25 . ביוכימית, סוג אני pericytes הם NG2 + Nestin - , ואילו סוג II pericytes הם NG2 + Nestin + 19 , 24 . באופן פונקציונלי, סוג אני pericytes יכול לעבור בידול אדיפוגני, תורם הצטברות שומן ו / או פיברוזיס, ואילו סוג II pericytes יכול להבדיל לאורך מסלול myogenic, תורם התחדשות שרירים 19 , 24 , 25 . תוצאות אלה מראות כי: (1) סוג אני pericytes עשוי bE ממוקד לטיפול בהפרעות ניווניות שומן / פיברוזיס, ו (2) סוג II pericytes יש פוטנציאל טיפולי רב עבור ניוון שרירים. חקירה נוספת ואפיון של אוכלוסיות אלה דורשות פרוטוקול בידוד המאפשר הפרדה מסוג I ו percytes סוג II ברמה גבוהה של טוהר.

נכון לעכשיו, בידוד subpopulations pericyte מסתמך על NG2-DsRed ו Nestin-GFP עכברים מהונדסים פעמיים 19 , 24 . הזמינות של עכברים NG2-DsRed ואת האיכות של רוב הנוגדנים NG2 להגביל את השימוש הנרחב של שיטה זו. בהתחשב בכך שכל NG2 + pericytes גם להביע PDGFRβ בשרירי השלד 19 , 20 , 24 , אנו משער כי NG2 ניתן להחליף PDGFRβ לבידוד pericytes ו subpopulations שלהם. עבודה זו מתארת ​​פרוטוקול מבוסס FACSמשתמש מכתים PDGFRβ ואת האות Nestin-GFP. שיטה זו היא פחות תובענית עבור החוקרים כי: (1) זה אינו דורש את הרקע NG2-DsRed ו (2) הוא משתמש נוגדנים PDGFRβ זמינים מסחרית, אשר מאופיינים היטב. בנוסף, הוא מאפשר בידוד סימולטני של סוג I ו- II pericytes בטוהר גבוה, ומאפשר חקירה נוספת של ביולוגיה ופוטנציאל טיפולי של subpopulations אלה pericyte. בעקבות טיהור, תאים אלה יכולים להיות גדלים בתרבות, המורפולוגיות שלהם יכול להיות דמיינו. עבודה זו גם מראה כי סוג I ו percytes סוג II מבודד באמצעות שיטה זו, כמו אלה מטוהרים מן העכברים מהונדס פעמיים, הם אדיפוגניים ו myogenic, בהתאמה.

Protocol

Wildtype ו Nestin-GFP מהונדס עכברים היו שוכנו במתקן החיות באוניברסיטת מינסוטה. כל הניסויים הניסויים אושרו על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים ועדת שימוש באוניברסיטת מינסוטה היו בהתאם NIH מדריך לטיפול ושימוש של חיות מעבדה.

1. ניוון שרירים בודד בידוד התא

  1. להרדים עכברים בוגרים (6-10 שבועות, הן זכר והן נקבה) עם tribromoethanol (250 מ"ג / ק"ג, IP) ו לעקר את עור הבטן שלהם עם אתנול 70%.
    הערה: Tribromoethanol שימש כאן במקום קטמין עבור הרדמה / המתת חסד, כמו ketamine ידוע אינטראקציה עם קולטני NMDA, אשר עלולה להשפיע על המחקר.
  2. מניחים את העכברים במצב שכיבה להשתמש איזמל לבצע חתך אופקית על עור הבטן. לקלף את העור ביד, מושך בכיוונים מנוגדים לחשוף את השרירים hindlimb.
  3. קולקלא את השרירים משני hindlimbs באמצעות מלקחיים ומספריים. אחסן אותם ב סטרילי פוספט שנאגרו מלוחים (PBS) בתוספת 1% פניצילין סטרפטומיצין (P / S) על הקרח.
  4. לשטוף את השרירים hindlimb גזור ב- PBS קר כקרח בתוספת 1% P / S פעמיים ולהעביר אותם צלחת סטרילית 10 ס"מ.
  5. בזהירות לנתח את העצבים, כלי הדם, ורקמות החיבור מן השרירים באמצעות מלקחיים ומספריים תחת מיקרוסקופ לנתיחה בהגדלה 2X.
  6. דק קוצצים את השרירים לחתיכות קטנות (1-2 מ"מ 3 ) באמצעות מספריים סטריליים להבים. אם יש צורך, להוסיף כמות קטנה של Dulbecco השתנה נשר בינוני (DMEM) כדי להבטיח כי השרירים לא יבשים.
  7. מכני לשבור את הרקמה על ידי pipetting למעלה ולמטה דרך פיפטה 10 מ"ל סרולוגי 10 פעמים.
  8. הוסף טריים פתרון העיכול (DMEM בתוספת 0.2% סוג 2 collagenase) לתערובת. לדגור על 37 מעלות צלזיוס למשך 2 שעות עם עדיןE-agitation ב 35 סיבובים / דקות.
  9. Triturate באמצעות מחט 18 G כדי homogenize את התערובת. ואז, צנטריפוגה ב XG 500 במשך 5 דקות. מחק supernatant ולאחר מכן resuspend גלולה 0.25% טריפסין / EDTA. לדגור על 37 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות. חזור על צעד צנטריפוגה פעמיים נוספות.
  10. הוסף 10 מ"ל של DMEM בתוספת 20% בסרום שור עוברית (FBS) לפתרון צנטריפוגה ב XG 500 במשך 5 דקות. מחק supernatant ו resuspend גלולה במאגר תמוגה תא דם אדום (155 מ"מ NH 4 Cl, 10 מ"מ KHCO 3 , ו 0.1 מ"מ EDTA).
  11. צנטריפוגה ב XG 500 במשך 5 דקות. מחק supernatant ו resuspend גלולה במיון מיון (20 מ"מ HEPES, pH 7.0, 1 מ"מ EDTA, ו 1% BSA ב Ca / Mg 2 + חינם PBS, pH 7.0). סנן את התערובת באמצעות מסננת תא 40 מיקרומטר להשיג ההשעיה תא בודד.
  12. צנטריפוגה ב XG 500 במשך 5 דקות. מחק supernatant ו resuspend גלולה ב 1 מ"ל של מיון המאגר.
  13. לספור אתמספר תא עם hemocytometer ו לדלל את ההשעיה תא בודד ל 5 x 10 6 / mL במאגר מיון.

2. תא מכתים ומיון

  1. הכן את הפקדים ואת המדגם כמתואר בטבלה 1 . כתם ההשעיה תא בודד עם נוגדנים בהתאמה על קרח במשך 30 דקות, כמתואר בטבלה 1 .
  2. צנטריפוגה ב XG 500 במשך 5 דקות ולשטוף את הכדורים פעמיים עם מיון המאגר.
  3. הוסף DAPI לפתרונות תא בודד, כפי שצוין בטבלה 1. השתמש DAPI 5 מיקרוגרם / מ"ל ​​DAPI (ריכוז סופי) עבור DAPI צבע אחד שליטה ו 1 מיקרוגרם / מ"ל ​​DAPI עבור PDGFRβ-PE-FMO שליטה המדגם. שמור את כל הצינורות על הקרח לאורך הניסוי.
  4. הפעל את סדרן ואת התוכנה. סרוק והכניס שבב מיון 100 מיקרומטר כאשר תתבקש.
  5. בצע את ההגדרה האוטומטית ( כלומר, יישור שבב, כיול אגל, כיול זרם צד, ועיכוב מיון calibratiב) על ידי טעינת חרוזי ההתקנה אוטומטית כאשר תתבקש לעשות זאת.
  6. כאשר ההגדרה האוטומטית הושלמה, עבור לכרטיסייה "ניסוי", לחץ על "חדש" ובחר את "תבנית ריקה" מתוך "תבניות ציבוריות".
  7. תחת "הגדרות מדידה", הזן "DAPI" עבור "FL1", "Nestin-GFP" עבור "FL2" ו "PDGFRβ" עבור "FL3." בטל את הסימון של תיבות עבור "FL4" - "FL6".
  8. סמן את התיבות כדי להפעיל את הלייזרים 405, 488 ו- 561 ולחץ על "צור ניסוי חדש".
  9. בחר את "התחל פיצוי אשף" ולאחר מכן פעל לפי "אשף פיצוי" התוכנה מבקשת להגדיר את הפיצוי.
    1. טען את השליטה unstained ולחץ על "התחל". לחץ על "גלאי & הגדרות סף" ולהתאים את הרווח חיישן של FSC ו BSC גלאי למקום האוכלוסייה על הסולם.
    2. מוֹדָעָהרק את רמות הרווח של FL1-FL3 ערוצי הקרינה למקום אוכלוסיות שליליות בצד שמאל של היסטוגרמות. לחץ על כפתור "הקלטה" כדי להקליט את הנתונים.
    3. טען בודדים בצבע אחד אחד כאשר תתבקש. לחץ על "התחל והקלט" כדי להקליט את הנתונים. להתאים את השערים לאוכלוסיות חיוביות על היסטוגרמות. לחץ על "הבא".
    4. עבור אל "חישוב מטריקס" על הכרטיסייה "פיצוי" ולחץ על "חישוב" בלוח "חישוב פיצוי הגדרות" לבצע את הפיצוי. לחץ על "סיום" כדי לצאת מהאשף "פיצוי".
  10. טען את PDGFRβ-PE-FMO שליטה ולחץ על "התחל". צייר שער מצולע (שער A) סביב התאים של עניין תחת העלילה "כל האירועים".
  11. לחץ פעמיים בתוך שער A כדי ליצור מגרש ילדים. שנה את ציר Y ל- DAPI וצייר שער מצולע (שער B) סביב תאים חיים (DAPI) נמוכים . לחץ פעמיים על iNside שער B כדי ליצור מגרש הילד. לשנות את ציר ה- X כדי FSC-H ואת ציר Y ל- FSC-W ו לצייר שער מצולע (שער C) סביב singlets לחסל הכפולות.
  12. לחץ פעמיים בתוך שער C כדי ליצור מגרש ילדים. שנה את ציר ה- X ל- Nestin-GFP ואת ציר ה- Y ל- PDGFRβ-PE. לחץ על כפתור "הקלטה" כדי להקליט את הנתונים.
  13. טען את המדגם וחזור על הצעדים 2.11-2.12. לאחר ההקלטה, לחץ על "השהה" כדי לשמור על המדגם.
  14. הגדר את גבולות gating עבור PDGFRβ + ו Nestin-GFP + תאים המבוססים על PDGFRβ-PE-FMO שליטה. צייר השערים עבור האוכלוסייה PDGFRβ + Nestin-GFP - ו PDGFRβ + Nestin-GFP + אוכלוסיות.
  15. תחת "שיטת מיון", בחר "2-way צינורות" ולהקצות "PDGFRβ + Nestin-GFP - " ו "PDGFRβ + Nestin-GFP + " לתאי צינורות שמאל וימין, מחדשבצורה מדהימה. הרכבה מיון המיון מלא 15 מ"ל צינורות איסוף על הבמה אוסף ולחץ על "טען אוסף" כפתור ".
  16. לחץ על הלחצן "המשך" כדי לשמור על הדגימה פועלת. לחץ על "התחל מיון" כדי לאסוף PDGFRβ + Nestin-GFP - (סוג אני pericytes) ו PDGFRβ + Nestin-GFP + (סוג II pericytes) תאים.

3. לאחר מיון המיון

  1. צנטריפוגה תאים מיון ב 500 xg במשך 5 דקות, resuspend גלולה ב 1 מ"ל של מדיום pericyte (ראה טבלה חומרים ), ולספור את צפיפות התא באמצעות hemocytometer.
  2. סוג זרע אני ואת סוג II pericytes על פולי- D- ליזין (PDL) מצופה coverslips ב ~ 1 x 10 4 תאים / ס"מ 2 . לגדול במדיום pericyte במשך 3 ימים על 37 מעלות צלזיוס עם 5% CO 2 .
  3. ביום 3, לבחון את המורפולוגיה pericyte (תחת בניגוד לעומת) אנדוגני Nestin-GFP ביטוי באמצעות מיקרו פלואורסצנטיהיקף (לייזר עירור: 488 ננומטר, מסנן עירור: 470/40 ננומטר, מסנן פליטה: 515/30 ננומטר). קחו תמונות תחת מטרה 20X (0.45 NA).
  4. החלף את המדיום pericyte עם בינוני adipogenic (MSC העכבר הבסיס + בינוני adipogenic תוספת גירוי) ו myogenic (DMEM + 2% בסרום סוס) בינוני ליזום adipogenic ו myogenic בידול, בהתאמה, כפי שתואר לעיל 20 . שנה את המדיום כל 2-3 ימים.
  5. תקן את התאים ביום 17 (14 ימים לאחר בידול אדיפוגני / myogenic) ב paraformaldehyde 4% (PFA) במשך 20 דקות בטמפרטורת החדר.
    הערה: זהירות, PFA הוא מסרטן.
  6. ביצוע immunocytocochemistry נגד perilipin (סמן adipocyte) ו- S- myosin (בוגר myotube / myofiber בוגרת), כפי שתואר בפרסומים קודמים 19 , 20 .
    1. לשטוף את התאים קבוע 3 פעמים PBS במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר.
    2. הוספת חיץ חסימה (PBSבתוספת 5% סרום חמור, 3% BSA, ו 0.3% Triton X-100) ו דגירה בטמפרטורת החדר למשך 1 שעות.
    3. דגירה התאים עם antilodies perilipin (2 מיקרוגרם / מ"ל) ו / או אנטי- S- מיוזין (2 מיקרוגרם / מ"ל) נוגדנים ב 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
    4. לשטוף את התאים 3 פעמים PBS במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר.
    5. דגירה התאים עם Alexa 555 חמור נגד ארנבת (4 מיקרוגרם / מ"ל) ו / או Alexa555 חמור אנטי עכבר (4 ​​מיקרוגרם / מ"ל) נוגדנים בטמפרטורת החדר למשך 1 שעות.
    6. לשטוף את התאים 3 פעמים PBS במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר.
    7. הר תאים immunostained עם המדידה הרכבה המכיל DAPI (ראה את טבלת החומרים). בחן perilipin ו- S- ביטוי myosin באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי (עירור לייזר: 543 ננומטר, עירור 540/45 ננומטר ו 600/50 ננומטר פליטת) ולקחת תמונות תחת מטרה 40X (0.60 NA).

תוצאות

הפרמטרים של FACS, כולל עוצמת הלייזר ותגמול הערוץ, מתוקנים על סמך תוצאות הבקרה הבלתי מבוקרת ובקרות בצבע יחיד. PDGFRβ-PE-FMO שליטה משמש לקבוע את gating עבור האוכלוסייה PDGFRβ-PE + ( איור 1 א ). בין PDGFRβ-PE תאים, שתי אוכלוסיות המייצג Nestin-GFP + ו Nest...

Discussion

Pericytes הם תאים multivotent perivascular 22 , 23 הממוקם על פני השטח abluminal של נימי 21 , 26 . בשרירי השלד, pericytes מסוגלים להבדיל לאורך נתיבים adipogenic ו / או myogenic 19 , 20 , 24 . מחקרים שנ?...

Disclosures

לכל המחברים אין ניגוד אינטרסים לחשוף.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה באופן חלקי על ידי מענק קרן-A-FO של קרן Dystrophy Myotonic (MDF-FF-2014-0013) ומענק פיתוח המדען של איגוד הלב האמריקני (16SDG29320001).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Cell SorterSonySH800
Automatic Setup BeadsSonyLE-B3001
DMEMGibco11995
Avertin SigmaT48402
Pericyte Growth MediumScienCell1201
MSC Basal Medium (Mouse)Stemcell Technologies5501
Adipogenic Stimulatory Supplement (Mouse)Stemcell Technologies5503
Fetal Bovine SerumGibco16000
Horse SerumSigmaH1270
Collagenase Type 2WorthingtonLS004176
0.25% Trypsin/EDTA Gibco25200
Penicillin/StreptomycinGibco15140
PDLSigmaP6407
PDGFRβ-PE AntibodyeBioscience12-1402
Perilipin AntibodySigmaP1998
S-Myosin AntibodyDSHBMF-20
Alexa 555-anti-rabbit antibody ThermoFisher ScientificA-31572
Alexa 555-anti-mouse antibodyThermoFisher ScientificA-31570
Mounting Medium with DAPIVector LaboratoriesH-1200
DAPIThermoFisher ScientificD1306
HEPESGibco15630
EDTAFisherBP120
BSASigmaA2058
NH4ClFisher ScientificA661
KHCO3Fisher ScientificP184
PBSGibco14190
18G NeedlesBD305196
10ml Serological PipetteBD357551

References

  1. Rennert, R. C., Sorkin, M., Garg, R. K., Gurtner, G. C. Stem cell recruitment after injury: lessons for regenerative medicine. Regenerative medicine. 7 (6), 833-850 (2012).
  2. Sambasivan, R., et al. Pax7-expressing satellite cells are indispensable for adult skeletal muscle regeneration. Development. 138 (17), 3647-3656 (2011).
  3. Relaix, F., Zammit, P. S. Satellite cells are essential for skeletal muscle regeneration: the cell on the edge returns centre stage. Development. 139 (16), 2845-2856 (2012).
  4. von Maltzahn, J., Jones, A. E., Parks, R. J., Rudnicki, M. A. Pax7 is critical for the normal function of satellite cells in adult skeletal muscle. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (41), 16474-16479 (2013).
  5. Lepper, C., Partridge, T. A., Fan, C. M. An absolute requirement for Pax7-positive satellite cells in acute injury-induced skeletal muscle regeneration. Development. 138 (17), 3639-3646 (2011).
  6. Kuang, S., Charge, S. B., Seale, P., Huh, M., Rudnicki, M. A. Distinct roles for Pax7 and Pax3 in adult regenerative myogenesis. J Cell Biol. 172 (1), 103-113 (2006).
  7. Murphy, M. M., Lawson, J. A., Mathew, S. J., Hutcheson, D. A., Kardon, G. Satellite cells, connective tissue fibroblasts and their interactions are crucial for muscle regeneration. Development. 138 (17), 3625-3637 (2011).
  8. Morgan, J. E., Pagel, C. N., Sherratt, T., Partridge, T. A. Long-term persistence and migration of myogenic cells injected into pre-irradiated muscles of mdx mice. J Neurol Sci. 115 (2), 191-200 (1993).
  9. Beauchamp, J. R., Morgan, J. E., Pagel, C. N., Partridge, T. A. Dynamics of myoblast transplantation reveal a discrete minority of precursors with stem cell-like properties as the myogenic source. J Cell Biol. 144 (6), 1113-1122 (1999).
  10. Partridge, T. A. Invited review: myoblast transfer: a possible therapy for inherited myopathies. Muscle Nerve. 14 (3), 197-212 (1991).
  11. Montarras, D., et al. Direct isolation of satellite cells for skeletal muscle regeneration. Science. 309 (5743), 2064-2067 (2005).
  12. Asakura, A., Seale, P., Girgis-Gabardo, A., Rudnicki, M. A. Myogenic specification of side population cells in skeletal muscle. J Cell Biol. 159 (1), 123-134 (2002).
  13. Tamaki, T., et al. Skeletal muscle-derived CD34+/45- and CD34-/45- stem cells are situated hierarchically upstream of Pax7+ cells. Stem Cells Dev. 17 (4), 653-667 (2008).
  14. Dellavalle, A., et al. Pericytes resident in postnatal skeletal muscle differentiate into muscle fibres and generate satellite cells. Nat Commun. 2, 499 (2011).
  15. Mitchell, K. J., et al. Identification and characterization of a non-satellite cell muscle resident progenitor during postnatal development. Nat Cell Biol. 12 (3), 257-266 (2010).
  16. Pannerec, A., Formicola, L., Besson, V., Marazzi, G., Sassoon, D. A. Defining skeletal muscle resident progenitors and their cell fate potentials. Development. 140 (14), 2879-2891 (2013).
  17. Dellavalle, A., et al. Pericytes of human skeletal muscle are myogenic precursors distinct from satellite cells. Nat Cell Biol. 9 (3), 255-267 (2007).
  18. Kostallari, E., et al. Pericytes in the myovascular niche promote post-natal myofiber growth and satellite cell quiescence. Development. 142 (7), 1242-1253 (2015).
  19. Birbrair, A., et al. Role of pericytes in skeletal muscle regeneration and fat accumulation. Stem Cells Dev. 22 (16), 2298-2314 (2013).
  20. Yao, Y., Norris, E. H., Mason, C. E., Strickland, S. Laminin regulates PDGFRbeta(+) cell stemness and muscle development. Nat Commun. 7, 11415 (2016).
  21. Armulik, A., Genove, G., Betsholtz, C. Pericytes: developmental, physiological, and pathological perspectives, problems, and promises. Dev Cell. 21 (2), 193-215 (2011).
  22. Dore-Duffy, P. Pericytes: pluripotent cells of the blood brain barrier. Curr Pharm Des. 14 (16), 1581-1593 (2008).
  23. Dore-Duffy, P., Katychev, A., Wang, X., Van Buren, E. CNS microvascular pericytes exhibit multipotential stem cell activity. J Cereb Blood Flow Metab. 26 (5), 613-624 (2006).
  24. Birbrair, A., et al. Skeletal muscle pericyte subtypes differ in their differentiation potential. Stem Cell Res. 10 (1), 67-84 (2013).
  25. Gautam, J., Nirwane, A., Yao, Y. Laminin differentially regulates the stemness of type I and type II pericytes. Stem Cell Research & Therapy. 8 (1), 28 (2017).
  26. Birbrair, A., et al. Pericytes: multitasking cells in the regeneration of injured, diseased, and aged skeletal muscle. Front Aging Neurosci. 6, 245 (2014).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

123pericyteII pericyteFACSPDGFRNestin GFPMyogenesis

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved