Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Bu çalışma, tip I ve tip II perisitlerin iskelet kaslarından kolay ve aynı anda izolasyonuna olanak tanıyan bir FACS tabanlı protokolü açıklamaktadır.

Özet

Perisitler perivasküler multipotent hücreler olup, farklı organlarda hatta aynı dokuda heterojenlik gösterirler. İskelet kaslarında, farklı moleküler belirteçleri ifade eden ve ayırdedici özelliklere sahip en az iki perisit alt popülasyonu (tip I ve tip II olarak adlandırılır) bulunur. NG2-DsRed ve Nestin-GFP çift transgenik fareler kullanılarak, tip I (NG2-DsRed + Nestin-GFP - ) ve tip II (NG2-DsRed + Nestin-GFP + ) perisitler başarıyla izole edilmiştir. Bununla birlikte, bu çift transgenik farelerin mevcudiyeti bu saflaştırma yönteminin yaygın kullanılmasını engeller. Bu çalışma, tip I ve tip II perisitlerin iskelet kaslarından kolay ve aynı anda izolasyonuna izin veren alternatif bir protokolü açıklamaktadır. Bu protokol, floresanla aktive hücre ayırma (FACS) tekniğini kullanır ve Nestin-GFP sinyaliyle birlikte NG2 yerine PDGFRβ'yı hedef alır. İzolasyondan sonra, I ve ty yazınPe II pericyitler farklı morfolojilere sahiptir. Buna ek olarak, çift transgenik farelerden izole edilenler gibi bu yeni yöntemle izole edilen tip I ve tip II perisitler sırasıyla adipojenik ve miyojeniktir. Bu sonuçlar, bu protokolün perisit alt popülasyonlarını iskelet kaslarından ve muhtemelen diğer dokulardan izole etmek için kullanılabileceğini düşündürmektedir.

Giriş

Kas distrofisi şimdiye kadar etkili bir tedavisi olmayan bir kas dejeneratif bozukluğudur. Doku yenilenmesini teşvik eden terapilerin gelişimi daima büyük ilgi gördü. Hasar sonrası doku rejenerasyonu ve onarımı yerleşik kök hücrelere / progenitör hücrelere bağlıdır 1 . Uydu hücreleri, kas yenilenmesine 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 katkıda bulunan miyojenik prekürsör hücrelere adanmıştır. Bununla birlikte, bunların klinik kullanımı, sınırlı göç ve enjeksiyondan sonra düşük hayatta kalma oranlarının yanı sıra , in vitro amplifikasyon sonrasında azalmış farklılaşma yetenekleri nedeniyle engellenmektedir 8 , 9 , 10 , 11 . Satelli'ye ek olarakIskelet kasları, trombosit türevi büyüme faktörü reseptör-beta (PDGFRp) -pozitif interstisyel hücreler gibi miyojenik potansiyeli 12 , 13 , 14 , 15 , 16 olan birçok hücre popülasyonunu da içerir. Kas türevi PDGFRβ + hücrelerinin, miyojenik hücrelere farklılaşabildiklerini ve kas patolojisini geliştirdiklerini ve 14 , 17 , 18 , 19 , 20 nolu fonksiyonları yerine getirebildiklerini gösteren kanıtlar vardır. PDGFRβ çoğunlukla pluripotik 22 , 23 olan perivasküler hücreler olan perisitleri 21 işaret eder. PDGFRβ'ya ilaveten, Neuron-Glial 2 (NG2) ve CD146 da dahil olmak üzere birçok diğer belirteçler, iPerisitleri dentify 21 . Bununla birlikte, bu belirteçlerin hiçbirinin çevreye özgü olmadığına dikkat edilmelidir. Son çalışmalar, tip I ve tip II olarak adlandırılan, farklı moleküler belirteçleri ifade eden ve farklı fonksiyonlar 19 , 24 , 25 gösteren kas perisitlerinin iki alt türünü ortaya çıkarmıştır. Biyokimyasal olarak, tip I perisitler NG2 + Nestin - iken, tip II perisitler NG2 + Nestin + 19 , 24'tür. Fonksiyonel olarak, tip I perisitler adipogenik farklılaşmaya maruz kalabilirler, yağ birikimi ve / veya fibrozise katkıda bulunurlar, oysa tip II perisitler miyojenik yol boyunca ayırt ederek kas yenilenmesine katkıda bulunurlar 19 , 24 , 25 . Bu sonuçlar şunu göstermektedir: (1) tip I perisitler bYağlı dejeneratif bozuklukların / fibrozun tedavisinde hedeflenen ve (2) tip II perisitlerin, kas distrofisi için büyük terapötik potansiyele sahip olduklarını göstermiştir. Bu popülasyonların daha fazla araştırılması ve karakterizasyonu, tip I ve tip II perisitlerin yüksek saflıkta ayrılmasını sağlayan bir izolasyon protokolü gerektirir.

Şu anda, perisit alt popülasyonlarının izolasyonu NG2-DsRed ve Nestin-GFP çift transjenik fareler 19 , 24'e dayanmaktadır. NG2-DsRed farelerin mevcudiyeti ve çoğu NG2 antikorunun kalitesi, bu yöntemin yaygın kullanımını sınırlar. Tüm NG2 + perisitlerinin ayrıca 19 , 20 , 24 iskelet kaslarındaki PDGFRβ'yı eksprese ettiği göz önüne alındığında, percyit'lerin izolasyonu ve alt popülasyonları için NG2'nin PDGFRβ ile değiştirilebileceği hipotezi altındayız. Bu çalışma, FACS tabanlı bir protokolü tanımlamaktadır.PDGFRβ boyama ve Nestin-GFP sinyalini kullanır. Bu yöntem araştırmacılar için daha az talepkar, çünkü: (1) NG2-DsRed fonunu gerektirmez ve (2) iyi karakterize edilmiş ticari olarak temin edilebilir PDGFRβ antikorlarını kullanır. İlaveten, tip I ve tip II perisitlerin yüksek saflıkta eşzamanlı olarak izole edilmesini sağlar ve bu perisit alt popülasyonlarının biyolojik ve terapötik potansiyelleri hakkında daha fazla araştırma yapılmasına izin verir. Saflaştırmanın ardından, bu hücreler kültürde yetiştirilebilir ve morfolojileri görselleştirilebilir. Bu çalışma aynı zamanda, çift transgenik farelerden saflaştırılanlar gibi bu yöntemi kullanarak izole edilen tip I ve tip II perisitlerin sırasıyla adipojenik ve miyojenik olduğunu göstermektedir.

Protokol

Wildtype ve Nestin-GFP transgenik fareler, Minnesota Üniversitesi'ndeki hayvan tesislerinde barındırıldı. Tüm deneysel prosedürler, Minnesota Üniversitesi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanım Komitesi tarafından onaylandı ve NIH Laboratuar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na uygun olarak hazırlandı.

1. Kas Diseksiyonu ve Tek Hücreli İzolasyon

  1. Tribromoetanol (250 mg / kg, ip) ile erişkin fareler (6-10 hafta, hem erkek hem de kadın) euthanize edin ve karın cildini% 70 etanol ile sterilize edin.
    NOT: Anestezi / ötenazi için ketaminin yerine ketamin yerine tribromoetanol kullanıldı, çünkü ketamin NMDA reseptörleri ile etkileşime girdi ve bu da potansiyel olarak çalışma üzerinde etkili olabilir.
  2. Fareleri sırt üstü pozisyona getirin ve karın cildi üzerinde yatay bir kesi yapmak için bir neşter kullanın. Arka ayak bacak kaslarını ortaya çıkarmak için cildi elle ters yönde çekerek soyun.
  3. CollecForseps ve makas kullanarak her iki arka bacaktaki kaslar. Buz üzerinde% 1 penisilin-streptomisin (P / S) takviyeli steril fosfat tamponlu salin (PBS) içinde saklayın.
  4. Buzla soğutulmuş PBS'de iki kez% 1'lik P / S ile takviye edilmiş arka bacak kaslarını yıkayın ve steril 10 cm'lik bir tablaya aktarın.
  5. Sinirleri, kan damarlarını ve 2X büyütmede bir diseksiyon mikroskopu altında makas kullanarak bağ dokusunu dikkatle inceleyin.
  6. Steril makas ve bıçaklar kullanarak kasları ince parçalara kesin (1-2 mm3). Gerekirse, kasların kurumamış olmasını sağlamak için az miktarda Dulbecco Modifiye Kartal Ortamı (DMEM) ekleyin.
  7. Mekanik olarak, 10 mL'lik bir serolojik pipetle 10 kez yukarı ve aşağı pipetleme yaparak dokuyu parçalayın.
  8. Karışıma yeni yapılmış sindirim çözeltisi (% 0.2 Tip 2 kollajenaz ile takviye edilmiş DMEM) ilave edin. 37 ° C'de 2 saat gentl ile inkübe edinDakikada 35 devirde çalkalama.
  9. Karışımı homojenize etmek için 18 G'lik bir iğne kullanarak toz haline getirin. Daha sonra 500 xg'de 5 dakika santrifüjleyin. Süpernatantı atın ve sonra pelleti% 0.25 tripsin / EDTA içinde tekrar süspanse edin. 37 ° C'de 10 dakika inkübe edin. Santrifüj adımını iki kez daha tekrarlayın.
  10. Solüsyona% 20 sığır fetüsü serumu (FBS) takviye edilmiş 10 mL DMEM ekleyin ve 5 dakika boyunca 500 xg'de santrifüjleyin. Süpernatantı atın ve pelleti kırmızı kan hücresi liziz tamponunda (155 mM NH4CI, 10 mM KHCO3 ve 0.1 mM EDTA) tekrar süspansiyon haline getirin.
  11. 5 dakika boyunca 500 xg'de santrifüjleyin. Süpernatantı atın ve pelet ayırma tamponunda (20 mM HEPES, pH 7.0; 1 mM EDTA; Ca / Mg 2+ ücretsiz PBS, pH 7.0'da% 1 BSA) tekrar süspansiyon haline getirin. Karışımı, tek hücreli bir süspansiyon elde etmek için 40 mikron hücre süzgeçten geçirin.
  12. 5 dakika boyunca 500 xg'de santrifüjleyin. Süpernatantı atın ve pelet 1 mL sıralama tamponunda yeniden süspanse edin.
  13. SaymakHücre sayısının bir hemasitometre ile alınması ve tekli hücre süspansiyonunun sıralama tamponunda 5 x 106 / mL'ye kadar seyreltilmesi.

2. Hücre boyama ve sıralama

  1. Kontrolleri ve numuneyi Tablo 1'de açıklandığı gibi hazırlayın. Tek hücreli süspansiyonu, ilgili antikorlarla, buz üzerinde, Tablo 1'de açıklandığı üzere 30 dakika boyunca boyayın.
  2. 5 dakika süreyle 500 xg'de santrifüjleyin ve topakları ayırma tamponuyla iki kez yıkayın.
  3. Tablo 1'de belirtildiği gibi DAPI tek hücreli solüsyonlara ekleyin. PDGFRβ-PE-FMO kontrolü ve numune için DAPI tek renkli kontrol için 5 μg / mL DAPI (nihai konsantrasyon) ve 1 μg / mL DAPI kullanın. Deney boyunca tüm tüpleri buzda tutun.
  4. Sıralayıcıyı ve yazılımı açın. İstendiğinde 100 μm'lik bir ayırma yongasını tarayın ve takın.
  5. Otomatik kurulumu gerçekleştirin ( örneğin, talaş hizalaması, damlacık kalibrasyonu, yan akım kalibrasyonu ve sıralama gecikmesi kalibrasyonuOn) otomatik kurulum boncukları yükleyerek sorulduğunda.
  6. Otomatik kurulum tamamlandığında, "Deneme" sekmesine gidin, "Yeni" yi tıklayın ve "Genel Şablonlar" dan "Boş Şablon" u seçin.
  7. "Ölçüm Ayarları" altında, "FL1" için "DAPI", "FL2" için "Nestin-GFP" ve "FL3" için "PDGFRβ" girin. "FL4" - "FL6" kutularının işaretini kaldırın.
  8. 405, 488 ve 561 lazerleri etkinleştirmek için kutuları işaretleyin ve "Yeni Deneme Oluştur" u tıklayın.
  9. "Kompanzasyon Sihirbazını Başlat" seçeneğini seçin ve kompanzasyonu ayarlamak için "Kompanzasyon Sihirbazı" yazılım talimatlarını takip edin.
    1. Renksiz kontrolü yükleyin ve "Başlat" ı tıklayın. "Dedektör ve Eşik Ayarları" nı tıklayın ve nüfusu ölçeğe yerleştirmek için FSC ve BSC dedektörlerinin sensör kazancını ayarlayın.
    2. ilanSadece negatif popülasyonları histogramların sol tarafına yerleştirmek için FL1-FL3 floresans kanallarının kazanç seviyeleri. Verileri kaydetmek için "Kaydet" düğmesini tıklayın.
    3. İstendiğinde tek renkli kontrolleri teker teker yükleyin. Verileri kaydetmek için "Başla ve Kaydet" düğmesine tıklayın. Histogramlarda pozitif popülasyonlar için kapıları ayarlayın. "İleri" yi tıklayın.
    4. "Telafi" sekmesindeki "Matris Hesapla" bölümüne gidin ve telafiyi gerçekleştirmek için "Telafi Ayarlarını Hesaplayın" panelinde "Hesapla" yı tıklayın. "Telafi Sihirbazı" ndan çıkmak için "Bitir" i tıklayın.
  10. PDGFRβ-PE-FMO kontrolünü yükleyin ve "Başlat" ı tıklayın. "Tüm Olaylar" arsa altındaki ilgi hücreleri etrafında bir poligon kapı (A Kapısı) çizin.
  11. Alt çizgi oluşturmak için A Kapısının içinde çift tıklayın. Y eksenini DAPI olarak değiştirin ve canlı (DAPI düşük ) hücrelere çokgen kapıyı (Kapı B) çizin. I'yi çift tıklayınB kapı kenarında bir çocuk komplosu oluşturmak. X ekseni FSC-H'ye ve Y ekseni FSC-W'ye değiştirin ve çiftleri yok etmek için, tekli noktaların etrafına bir çokgen kapı (Kapı C) çizin.
  12. Alt çizgi oluşturmak için C Kapısının içinde çift tıklayın. X eksenini Nestin-GFP'ye ve Y ekseni PDGFRβ-PE'ye değiştirin. Verileri kaydetmek için "Kaydet" düğmesini tıklayın.
  13. Numuneyi yükleyin ve adım 2.11-2.12'yi tekrarlayın. Kaydettikten sonra, numuneyi korumak için "Duraklat" düğmesine tıklayın.
  14. PDGFRβ-PE-FMO kontrolü temelinde PDGFRβ + ve Nestin-GFP + hücreleri için geçiş sınırlarını tanımlayın. PDGFRβ + Nestin-GFP - ve PDGFRβ + Nestin-GFP + popülasyonları için kapıları çizin.
  15. "Sıralama Yöntemi" altında, "2 Yönlü Tüpler" i seçin ve "PDGFRβ + Nestin-GFP - " ve "PDGFRβ + Nestin-GFP + " hücrelerini sol ve sağ toplama tüplerine atayın.dönük olarak. Toplama aşamasında ayırma tamponuyla doldurulmuş 15 mL toplama tüplerini monte edin ve "Toplama Toplama" düğmesine tıklayın ".
  16. Örneği çalışmaya devam etmek için "Devam Et" düğmesini tıklayın. PDGFRβ + Nestin-GFP - (tip I perişitler) ve PDGFRβ + Nestin-GFP + (tip II perişitler) hücreleri toplamak için "Sırala Başlat" ı tıklayın.

3. Post-sıralama Analizleri

  1. 5 dakika boyunca 500 xg'de sıralanmış hücreleri santrifüjleyin, pelleti perisit ortamın 1 mL'sinde tekrar süspansiyon haline getirin ( Malzeme Tablosuna bakın) ve bir hemositometre kullanarak hücre yoğunluğunu sayın.
  2. ~ 1 x 104 hücre / cm2'de poli-D-lisin (PDL) ile kaplanmış lamelleri üzerinde Tohum tipi I ve tip II perisitler. Perisit ortamda 37 ° C'de% 5 CO2 ile 3 gün süreyle büyür.
  3. 3. günde, bir peroksit mikroskobu kullanılarak perisit morfolojisini (faz kontrastı altında) ve endojen Nestin-GFP ekspresyonunu inceleyin(Uyarma lazeri: 488 nm, uyarma filtresi: 470/40 nm ve emisyon filtresi: 515/30 nm). Görüntüleri 20X (0.45 NA) bir hedefin altında çekin.
  4. Daha önce tarif edildiği gibi sırasıyla adipojenik ve miyojenik farklılaşmayı başlatmak için perisit ortamını adipojenik (fare MSC bazal ortam + adipojenik stimülatör takviyesi) ve miyojenik (DMEM +% 2 at serumu) besiyeri ile değiştirin 20 . Ortamı her 2-3 günde değiştirin.
  5. Oda sıcaklığında 20 dakika boyunca% 4 paraformaldehid (PFA) içinde 17. günde (adipojenik / miyojenik farklılaşmadan 14 gün sonra) hücreleri düzeltin.
    NOT: Dikkat, PFA bir kanserojendir.
  6. Daha önceki yayınlarda 19 , 20'de açıklandığı gibi, perilipin (adiposit markörü) ve S-myozine (olgun miyotür / miyofiber markeri) karşı immünositokimya uygulayın.
    1. Sabit hücreleri oda sıcaklığında 10 dakika PBS içinde 3 kez yıkayın.
    2. Engelleme tamponu ekleyin (PBS% 5 eşek serumu,% 3 BSA ve% 0.3 Triton X-100 ile takviye edilmiştir) ve oda sıcaklığında 1 saat inkübe edin.
    3. Hücreleri anti-perilipin (2 μg / mL) ve / veya anti-S-myosin (2 μg / mL) antikorları ile gece boyunca 4 ° C'de inkübe edin.
    4. Hücreleri oda sıcaklığında 10 dakika PBS'de 3 kez yıkayın.
    5. Hücreleri 1 saat oda sıcaklığında Alexa 555 eşek anti-tavşan (4 ug / mL) ve / veya Alexa555 eşek anti-fare (4 ug / mL) antikorları ile inkübe edin.
    6. Hücreleri oda sıcaklığında 10 dakika PBS'de 3 kez yıkayın.
    7. İmmünostained hücreleri DAPI içeren montaj ortamı ile monte edin (materyal tablosuna bakın). Bir floresan mikroskop (uyarma lazeri: 543 nm; 540/45 nm uyarım ve 600/50 nm emisyon) kullanarak perilipin ve S-miyozin ekspresyonunu inceleyin ve 40X'lik bir hedef (0.60 NA) altında görüntü alın.

Sonuçlar

Lazer yoğunluğu ve kanal dengelemesi de dahil olmak üzere FACS parametreleri, lekesiz kontrol ve tek renkli kontrollerin sonuçlarına dayanarak düzeltilir. PDGFRβ-PE-FMO kontrolü, PDGFRβ-PE + popülasyonu için kapıyı ayarlamak için kullanılır ( Şekil 1A ). PDGFRβ-PE - hücreleri arasında, Nestin-GFP + ve Nestin-GFP'yi temsil eden iki popülasyon açıkça ayrılır ( Şekil 1A

Tartışmalar

Perisitler kılcal damarların 21 , 26 abluminal yüzeyinde bulunan çok-enerjili perivasküler hücreler 22 , 23'tür . İskelet kaslarında, perisitler adipogenik ve / veya miyojenik yolaklarda 19 , 20 , 24 arasında ayrım yapabilir. Son çalışmalar, farklı markör ekspresyonu ve belirgin farklılaşma...

Açıklamalar

Tüm yazarların ifşa ettikleri herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

Bu çalışma, kısmen Myotonic Distrofi Vakfı (MDF-FF-2014-0013) ve Amerikan Kalp Derneği'nden (16SDG29320001) Bilim İnsanı Geliştirme Hibesi'nden bir Fon A Üyesi Ödülüyle desteklendi.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Cell SorterSonySH800
Automatic Setup BeadsSonyLE-B3001
DMEMGibco11995
Avertin SigmaT48402
Pericyte Growth MediumScienCell1201
MSC Basal Medium (Mouse)Stemcell Technologies5501
Adipogenic Stimulatory Supplement (Mouse)Stemcell Technologies5503
Fetal Bovine SerumGibco16000
Horse SerumSigmaH1270
Collagenase Type 2WorthingtonLS004176
0.25% Trypsin/EDTA Gibco25200
Penicillin/StreptomycinGibco15140
PDLSigmaP6407
PDGFRβ-PE AntibodyeBioscience12-1402
Perilipin AntibodySigmaP1998
S-Myosin AntibodyDSHBMF-20
Alexa 555-anti-rabbit antibody ThermoFisher ScientificA-31572
Alexa 555-anti-mouse antibodyThermoFisher ScientificA-31570
Mounting Medium with DAPIVector LaboratoriesH-1200
DAPIThermoFisher ScientificD1306
HEPESGibco15630
EDTAFisherBP120
BSASigmaA2058
NH4ClFisher ScientificA661
KHCO3Fisher ScientificP184
PBSGibco14190
18G NeedlesBD305196
10ml Serological PipetteBD357551

Referanslar

  1. Rennert, R. C., Sorkin, M., Garg, R. K., Gurtner, G. C. Stem cell recruitment after injury: lessons for regenerative medicine. Regenerative medicine. 7 (6), 833-850 (2012).
  2. Sambasivan, R., et al. Pax7-expressing satellite cells are indispensable for adult skeletal muscle regeneration. Development. 138 (17), 3647-3656 (2011).
  3. Relaix, F., Zammit, P. S. Satellite cells are essential for skeletal muscle regeneration: the cell on the edge returns centre stage. Development. 139 (16), 2845-2856 (2012).
  4. von Maltzahn, J., Jones, A. E., Parks, R. J., Rudnicki, M. A. Pax7 is critical for the normal function of satellite cells in adult skeletal muscle. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (41), 16474-16479 (2013).
  5. Lepper, C., Partridge, T. A., Fan, C. M. An absolute requirement for Pax7-positive satellite cells in acute injury-induced skeletal muscle regeneration. Development. 138 (17), 3639-3646 (2011).
  6. Kuang, S., Charge, S. B., Seale, P., Huh, M., Rudnicki, M. A. Distinct roles for Pax7 and Pax3 in adult regenerative myogenesis. J Cell Biol. 172 (1), 103-113 (2006).
  7. Murphy, M. M., Lawson, J. A., Mathew, S. J., Hutcheson, D. A., Kardon, G. Satellite cells, connective tissue fibroblasts and their interactions are crucial for muscle regeneration. Development. 138 (17), 3625-3637 (2011).
  8. Morgan, J. E., Pagel, C. N., Sherratt, T., Partridge, T. A. Long-term persistence and migration of myogenic cells injected into pre-irradiated muscles of mdx mice. J Neurol Sci. 115 (2), 191-200 (1993).
  9. Beauchamp, J. R., Morgan, J. E., Pagel, C. N., Partridge, T. A. Dynamics of myoblast transplantation reveal a discrete minority of precursors with stem cell-like properties as the myogenic source. J Cell Biol. 144 (6), 1113-1122 (1999).
  10. Partridge, T. A. Invited review: myoblast transfer: a possible therapy for inherited myopathies. Muscle Nerve. 14 (3), 197-212 (1991).
  11. Montarras, D., et al. Direct isolation of satellite cells for skeletal muscle regeneration. Science. 309 (5743), 2064-2067 (2005).
  12. Asakura, A., Seale, P., Girgis-Gabardo, A., Rudnicki, M. A. Myogenic specification of side population cells in skeletal muscle. J Cell Biol. 159 (1), 123-134 (2002).
  13. Tamaki, T., et al. Skeletal muscle-derived CD34+/45- and CD34-/45- stem cells are situated hierarchically upstream of Pax7+ cells. Stem Cells Dev. 17 (4), 653-667 (2008).
  14. Dellavalle, A., et al. Pericytes resident in postnatal skeletal muscle differentiate into muscle fibres and generate satellite cells. Nat Commun. 2, 499 (2011).
  15. Mitchell, K. J., et al. Identification and characterization of a non-satellite cell muscle resident progenitor during postnatal development. Nat Cell Biol. 12 (3), 257-266 (2010).
  16. Pannerec, A., Formicola, L., Besson, V., Marazzi, G., Sassoon, D. A. Defining skeletal muscle resident progenitors and their cell fate potentials. Development. 140 (14), 2879-2891 (2013).
  17. Dellavalle, A., et al. Pericytes of human skeletal muscle are myogenic precursors distinct from satellite cells. Nat Cell Biol. 9 (3), 255-267 (2007).
  18. Kostallari, E., et al. Pericytes in the myovascular niche promote post-natal myofiber growth and satellite cell quiescence. Development. 142 (7), 1242-1253 (2015).
  19. Birbrair, A., et al. Role of pericytes in skeletal muscle regeneration and fat accumulation. Stem Cells Dev. 22 (16), 2298-2314 (2013).
  20. Yao, Y., Norris, E. H., Mason, C. E., Strickland, S. Laminin regulates PDGFRbeta(+) cell stemness and muscle development. Nat Commun. 7, 11415 (2016).
  21. Armulik, A., Genove, G., Betsholtz, C. Pericytes: developmental, physiological, and pathological perspectives, problems, and promises. Dev Cell. 21 (2), 193-215 (2011).
  22. Dore-Duffy, P. Pericytes: pluripotent cells of the blood brain barrier. Curr Pharm Des. 14 (16), 1581-1593 (2008).
  23. Dore-Duffy, P., Katychev, A., Wang, X., Van Buren, E. CNS microvascular pericytes exhibit multipotential stem cell activity. J Cereb Blood Flow Metab. 26 (5), 613-624 (2006).
  24. Birbrair, A., et al. Skeletal muscle pericyte subtypes differ in their differentiation potential. Stem Cell Res. 10 (1), 67-84 (2013).
  25. Gautam, J., Nirwane, A., Yao, Y. Laminin differentially regulates the stemness of type I and type II pericytes. Stem Cell Research & Therapy. 8 (1), 28 (2017).
  26. Birbrair, A., et al. Pericytes: multitasking cells in the regeneration of injured, diseased, and aged skeletal muscle. Front Aging Neurosci. 6, 245 (2014).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

Geli im BiyolojisiSay 123Tip I perisitTip II perisitFACSPDGFRNestin GFPMiyogenezisAdipogenezis

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır