באמצעות השלט ההדרכה והתבוננות חברתית ללמד חולדות בהתנדבות לשנות את הכלובים

Summary

פרוטוקול זה מציג שיטה של הכלוב שינוי חולדות באמצעות השלט הדרכה. חולדות למד את ההתנהגות הרצויה, לא רק על ידי הדרכה ישירה, אלא גם על ידי למידה תצפיתית. היישום של פרוטוקול זה מהיר וקל עשויה לסייע לשיפור רווחתו והיגיינה במתקני מכרסמים.

Abstract

ניקוי הכלוב הוא הליך גידול שבוצעו באופן שגרתי ומוכר כדי לגרום מתח בחולדות מעבדה. מתח יכולה להיות השפעה שלילית על רווחה, יכול להשפיע על comparability ועל הפארמצבטית של תוצאות המחקר, כמות הלחץ שחווים חיות מעבדה צריך להיות ממוזער, להימנע במידת האפשר. עוד יותר, קשר ישיר בין המשגיח עכברוש של בעלי חיים במהלך השינוי כלוב נושאת סיכונים היגיינה, ולכן יכול להיות פוגע לרווחתם של החולדות והאיכות של המחקר.

פרוטוקול שלנו שואפת לשפר את הכלוב באופן שגרתי בביצוע שינוי נוהל. מסיבה זו, אנו מציגים ריאלי פרוטוקול המאפשר חולדות ללמוד דרך השלט הדרכה והתבוננות לשינוי בהתנדבות כלוב נקי. הכשרה זו מסייעת להפחתת מתח נגרמת על ידי הפרעה גופנית, טיפול המשויכים הכלוב משנה ומאפשרת במקביל לירידה מגע ישיר בין המטפל בבעלי חיים, בעלי חיים לאחר השלמת שלב ההכשרה.

היישום של השלט הדרכה חולדות היא קלה ומהירה. חולדות מעוניינים בדרך כלל ההכשרה ולמד ביעילות את ההתנהגות הרצויה, אשר מצריכה שינוי הכלובים דרך צינור. אפילו בלי הכשרה, החולדות ללמוד לבצע את ההתנהגות הרצויה על-ידי התבוננות, כמו 80% בקבוצת למידה תצפיתית שונה בהצלחה הכלובים כאשר נבדק. האימון מסייע נוספת כדי ליצור מערכת יחסים של אמון בין מאמן בעלי חיים. כמו היגיינה ורווחה הם שניהם מאוד חשוב בניסויים על בעלי חיים, פרוטוקול זה עשוי גם לסייע לשיפור מחקר באיכות גבוהה.

Introduction

פרוצדורות שגרתיות יכולה לגרום ללחץ מעבדה חיות^1,2,3,4. הוכח כי הכלוב שינוי להגביר פרמטרים וכלי דם ופעילות כללית חולדות-^4,-^5,-⁶. תגובות לחץ כזה ניתן לפחות חלקית עקב הפרעה פיזית טיפול המשויכים כלוב שינוי נהלים ולא חדש בסביבה לא מוכרת^2,4. חשיבות מיוחדת היא ההשפעה השלילית של מתח על מצבם של בעלי חיים נחשב⁷. עוד יותר, הלחץ גורם שינויים בהתנהגות, פרמטרים אחרים בגוף, כולל מערכת העצבים האוטונומית, מערכת נוירואנדוקריניים ואת המערכת החיסונית. לכן, הלחץ הוא המכונה לעתים קרובות מקור אפשרי של סטיות לא צפוי מעבר לניסויים בבעלי חיים, יש להימנע ככל האפשר מחקר בבעלי חיים באיכות גבוהה^7,8. דרך אחת כדי להפחית את הלחץ בחיות מעבדה היא על ידי אימון. אילוף בעלי החיים בדרך כלל יכול להיות כלי שימושי מאוד עבור ניהול חיות מעבדה ודרש, למעשה, על ידי להנחיית האיחוד האירופי 2010/63/האיחוד האירופי⁹. אימון יכול לשמש כסוג של העשרה ומסייע להכין חיות לניסויים; לפיכך, ההכשרה תורמת הסדירה ושיפור רווחתם מעבדה הגדרות^10,11,12. שיטת אימון אפשרי הוא אימון חיזוק חיובי (PRT). PRT היא צורה של התניה אופרנטית איפה פרס (למשל, פרס מזון), מקושר עם ההתנהגות הרצויה¹³. צורה זו של האימון הוא כבר נפוץ מעבדה הגדרות עבור יונקים במוסר כדי להפחית את הלחץ וכדי לשפר את רווחתו, צברה פופולריות שונים אחרים מיני בעלי חיים^{10,13, 14,15,16}. הכשרה של התנועה הרצונית משמש לעתים קרובות גם לזיכוך גידול בעלי חיים ניהול^17,18,19. PRT הוא לא רק כלי שימושי לשיתוף פעולה בעת עבודה עם בעלי חיים; כמו כן זה בדרך כלל מועיל עבור החיות רווחה, ללא קשר ההתנהגות מיומן בשימוש ישירות²⁰. פרוטוקול אימונים חיזוקים חיוביים המתוארים כאן שואף למנוע כל צורה של מתח במהלך שינויים שבוצעו באופן שגרתי את הכלוב על ידי מתן העכברוש ההזדמנות להשתתף בהתנדבות במסגרת ההליך.

בנוסף הלחץ אפשרי לבעלי החיים, בתהליכי העבודה השונים במתקנים בעלי חיים תמיד מספקים החסרונות לשם שמירה על היגיינה מצב, במיוחד כאשר הקשר הישיר בין חיות מעבדה ומפקחים בעלי חיים נושא הסיכון של היגיינה זיהום. במתקנים בעלי חיים המתמחה מכרסמים, העברת החיות מן מלוכלך לתוך כלוב נקי מספק עומס עבודה רגיל וגבוה. הליך זה בדרך כלל כולל מגע ישיר בין בעלי החיים ובני האדם ומייצג ובכך גורם סיכון היגייני עקב ההעברה אפשרי של פתוגנים התיישבו על העור האנושי²¹. מלבד העברת מווקטורים בעלי חיים אחרים, אורגניזמים פתוגניים, nonpathogenic להפריע מתקנים בעלי חיים בתדירות הגבוהה ביותר באמצעות בני אדם^22,23. כמו בריאות מופחת הוא משויך מופחתת רווחה, אפילו תת-קליני זיהומים יכול להיות גורם לתוצאות הניסוי nonreproducible, זה צריך להיות ברור להימנע^24,25. על חשבון זה, הכשרת חיות בכלובים מרצון שינוי נוסף מאפשרת הולכה של השינוי הכלוב לאחר האימונים עם בקושי יש קשר ישיר בין המטפל בבעלי חיים, בעלי חיים, ובכך הפחתת סיכון פוטנציאלי היגייני בעת ביצוע . בצרות.

פרוטוקול שלנו עבור הכשרה חולדות בהתנדבות לשנות את הכלובים יכול להיות כלי שימושי עבור ניהול עכבר מעבדה, כפי הוא מקשר את האימונים כסוג של העשרה קוגניטיבית עם ביצועים של עבודה שגרתית. בהתאם לכך, פרוטוקול שלנו היא הליך חיה ידידותית המסייעת להגברת לרווחתם של חולדות מעבדה במתקנים בעלי חיים. כמו השינוי הכלוב לאחר שלב האימון יכול להתבצע עם בקושי יש קשר ישיר בין המטפל בבעלי חיים, בעלי חיים, זה בנוסף יעזור לשמור על היגיינה ברמה גבוהה, ולכן לשפר עוד יותר מחקר בבעלי חיים.

Protocol

הטיפול של החולדות, ההליכים ניסיוני נערכו בהתאם האירופית, לאומי, המוסדיים הנחיות טיפול בבעלי חיים.

1. הסתגלות, Habituation

הערה: אם לא הועברו חולדות, הסתגלות וזמן habituation יכול להיות מופחת. עבור זיהוי לא פולשנית, צבע הזנב עם סמן ידידותית לעור.

1. שבוע 1: הסתגלות
   הערה: שני מפגשים צריכה להתבצע במהלך השבוע הראשון, אחד ביום ההגעה, מנה שנייה 2 ימים לאחר הגעתו.
   1. ביום ההגעה של החולדות:
      1. העברת החולדות בזוגות של שני לכלוב בבית החדש שלהם. העברת חלק הקינון הישן ומצעים בחומר, כמו גם חלק שלהם מוכר באוכל שלהן כדי להקל את habituation לסביבה חדשה.
      2. הימנע הרמת העכברוש מאת זנבו. במידת האפשר, לשים יד אחת מתחת לבטן או סביב החזה מצד התומכים הרגליים האחוריות של החולדות להרים אותן (איור 1)²⁶.
   2. יומיים לאחר יום ההגעה:
   3. לפתוח את הכלוב הביתה של החולדות ולשים יד הכלוב. תן את החולדות לרחרח ולחקור את היד. אם העכברים מנסים להשיג הכלוב, לעכב אותם בעדינות אותם בלחיצה חזרה לכלוב. המשך הליך זה למשך ארבע הדקות.
   4. אם החולדות חוששים אל תתחיל לחקור את סביבתם, חזור על הפעולות פעם ביום עד העכברושים יתחילו לחקור. במקרה זה, habituation אל השלט ייתכן שיהיה צורך.
      הערה: חולדות לחקור דברים חדשים עם כל החושים שלהם, אז אחרי כמה זמן, הם יזהו אותו הנסיין ככתוב המוכר. זה עשוי לקרות כי החולדה עושה אוראלי סיורום הידיים, אבל זה לא אמור להיות בצורה פולשנית. אם מצב זה מתרחש, היד להתייחס לאט כדי להבטיח כי הכפפות לא נהרסו.
   5. להוסיף חתיכות קטנות של הפרס מזון המיועד הכלוב הביתה.
      הערה: הפרס מזון חייב להיות בהתאם לדרישות עבור תזונה חיות מעבדה. פרוטוקול זה, שוקולד לבן משמש (נערכת בסוף מזרק), אך מזון אחרים, כגון פירות יבשים, פירות טריים או דגנים, אפשרי. אם הדרישות היגיינה מתקן בעלי חיים דורשים תנאים מיוחדים, ישנם ספקים שונים עבור פינוקים עבור חיות מעבדה. האפשרות הבריא עדיפה, אך שילוב של סוכר גבוה ונטייה גבוהה ייתן החיות מניע גדול להשתתף.
2. שבוע 2: Habituation המדען, הפרס מזון
   1. המשך חיים היד ואת הפרס מזון התחיל בשבוע שעבר. מגבלת הזמן אינטראקציה עם שתי דקות ליום.
   2. במקרים שבהם העכברוש הוא חרד מאוד, habituation אל השלט ייתכן שיהיה צורך.
      1. כדי להעריך את אופן פעולה זה, לחץ פעם אחת כל חמש שניות לאחר הפגישה ביום 1. אם העכבר מגיב עם התנהגות הקשורות פחד, חייב להיות בלתי את השלט.
      2. Habituation על השלט, לחצו חמש פעמים בזמן העכברוש צורכת את הפרס הממוקמים בתוך הכלוב לאחר ההפעלה. Habituation אל השלט הושלמה ברגע העכברוש כבר לא מראה כל התנהגות הקשורות פחד.
3. שבוע 3: Habituation לטיפול אינטנסיבי
   1. יום אחד עד שלושה, להתחיל עם הרמת או ללטף את החולדה למשך מספר שניות ולהרחיב לאט את הזמן (מקסימום שתי דקות לכל עכברוש). תפסיק אם החולדה מראה סימנים aversive כגון קפוא, השתמטות או מסתיר.
   2. בימים 4 ו-5, לסיים את הטיפול במדגדג, כמתואר ב. Cloutier et al. (2012). ²⁷
      הערה: מחוונים עבור habituation מוצלחת הם, לדוגמה, העכברוש לוקחים את הפרס מזון אם הוא מוצע בעבודת יד או העכברושים מתקרבים היד, חקר, או לגעת בו.

2. השלט הכשרה

הערה: אימון לוקח 4 דקות והיא מורכבת במרווחי זמן של 30 שניות של אימון ולאחריו 15 שניות של הפסקה. הסר כל חומר נוסף במהלך ההשהיה. העכברוש הצופה הוא חופשי לעשות מה שהוא רוצה, מותר להשתתף, לצרוך את הפרס, אך המיקוד הוא אך ורק על החולדה אחרים. כל העכברושים היו דגדג ביום הראשון וביום חמש. אימון להצלחה, זה הכרחי כי הנסיין שם לב להתנהגות החיה, מתנהג באופן רגוע. האימונים תלויה בחום היכולות של הנסיין של תזמון, כוח של התבוננות. אין משוב מילולי מתרחש באימון, תקשורת מילולית עם החיות עלולה להתרחש רק מחוץ למושב. מחוון למידה של ההתנהגות הרצויה היא החזרה על הפעולה.

1. הכנה
   1. להכין את החומר הנדרש, כגון הפרס, השילוב מקל clicker/יעד, שעון עצר, כלוב נקי, את צינורית המתכת חומר אחר הכשרה ספציפית.
   2. העברת לכלוב הביתה למקום שקט.
   3. להסיר את כל הפריטים מן הכלוב. רק שני העכברושים (מיומן וגם הצופה), החומר מצעים צריכים להישאר בכלוב.
2. יום 1: יצירת חיבור בין reinforcer ראשיים ומשניים
   1. מקום מנהרה קצרה בכלוב בבית, רצוי אחד העכברוש הוא מוכר.
   2. המתן עד החולדה יושבת בתוך המנהרה, ואז להאכיל את העכברוש עם הפרס.
      הערה: אם החולדה לא מאכיל בנסיבות של המצב הכשרה, השלב habituation חייב להיות מורחב או מותאם.
   3. ברגע החולדה מראה עניין הפרס, והוא מתחיל לכרסם לפרס, לחץ על ולאחר מכן שיחרר את החולדה לזון את הפרס. כדי להבטיח כי הזיווג של השני מחזקת הוא מוצלח, חזור על לחיצה ולאחר מכן מתגמל למשך 15 שניות. . לעשות את זה לפחות פעמיים במהלך האימון הראשון הזה
   4. אם החולדה השתתפו, בדוק סימנים של הקמת חיבור בין העיקרית של reinforcer משנית. הקריטריון המרכזי סיווג זה הוא ההערכה של הפרס מזון, אשר מוצג על ידי העכברוש על ידי רחרוח, מסתכל על היד המציג את הפרס מזון או הרמת את הגפיים האחוריות שלה על מנת לחפש את הפרס (איור 2). במקרה זה, להמשיך הלאה עם החלק הבא; אחרת, אני חוזר "יום אימונים 1"
3. אימון 2-5 ימים: עובר דרך מנהרה קצרה
   הערה: אימון כוללת שלבים לסירוגין של 30 שניות של אימון ו 15 שניות של ההפסקה של ארבע דקות.
   1. במקום מנהרה קצרה מאותו חומר כמו זה של המנהרה הראשונה בשימוש/מקור שיקשרו את הכלובים שני בכלוב בבית.
   2. להתחיל את הטיימר ולהתחיל מיד עם 30 השניות הראשונות של אימון.
      1. בפעם הראשונה שהחולדה נכנס למנהרה, מציגים את הפרס בסוף המנהרה. ברגע העכברוש נכנסת למנהרה, לחץ, שיחרר את החולדה לאכול את הפרס.
      2. לקחת את הפרס מזון והמתן עד החולדה מראה עניין עבור ה-tunnel פעם נוספת. לחץ בהקדם החולדה נכנס למנהרה ולהציג את הפרס בסוף המנהרה (איור 3).
      3. לאחר 30 שניות של אימון, להוסיף הפסקה השנייה 15 (להסיר המנהרה).
   3. אני חוזר 30 השניות של אימונים עם אצבע שניה 15 הבאים לשבור במשך ארבע דקות.
   4. אם החולדה מראה ההתנהגות הרצויה יותר מארבע פעמים דקה, לחיצה על עצירה, שמגיע עם reinforcer הראשית.
   5. להפסיק לאחר ארבע דקות.
4. שבוע ההכשרה 2: לגעת מקל היעד
   1. להתחיל את הטיימר ולהתחיל מיד עם 30 השניות הראשונות של אימון. להוסיף הפסקה כל 15 שניות, ואז להמשיך האימון.
   2. מקום העולם של הסטיק היעד ליד החולדה.
   3. ברגע החולדה מראה עניין הגלובוס, לחץ, לתגמל את החולדה. חזור על זה כמה פעמים.
   4. אם החולדה מראה עניין העולם יותר מארבע פעמים דקה, אופן הפעולה הבא כדי לחזק "נוגעת ללב העולם עם האף".
   5. אם החולדה חוזר על התנהגות זו במשך יותר מארבע פעמים דקה, לעצור את הפרס לחיצה ולא רק עם reinforcer הראשית.
   6. להפסיק לאחר ארבע דקות.
5. אימונים בשבוע 3 (חמישה ימים) ובשבוע 4 (שלושה ימים): שינוי הכלוב דרך מנהרה
   הערה: כאן, רק עוברים דרך המנהרה לעבר הכלוב נקי הוא מחוזק. האימונים בשבוע 4 קוצר לשלושה ימים אימונים. הפעם די והותר אימון להצלחה ונותן ההזדמנות ליום אחד נוסף עבור הערכה או נתונים הקלטה לניסויים נוספים.
   1. לבנות קשר בין הכלוב הביתה כלוב נקי חדש באמצעות מנהרה על-ידי הוספת גירסה ארוך יותר של המנהרה כבר מוכר החולדה.
   2. ביום הראשון לבצע שום הכשרה, ותני את החולדות לבחון את המנהרה. יש סיכוי טוב כי הם אפילו תעביר אליו בכוחות עצמם.
   3. ביום שני, תן את החולדה שתי דקות כדי להעביר דרך המנהרה בכוחות עצמו, לא הצד נקי. אם החולדה מעבירה באופן חופשי דרך המנהרה, דלג לשלב 2.5.8.
   4. אחרת, הפעל השני 30 הראשון הדרכה בנושא (חלופי בין 30 שניות של אימון הפסקה השנייה 15) במשך ארבע דקות.
   5. לחץ על, לתגמל את החולדה ברגע זה מראה עניין במנהרה.
   6. . קדימה כדי ללחוץ ו לתגמל את הכניסה למנהרה
   7. ללכת לחץ ותגמול אם החולדה עמוק בתוך המנהרה.
   8. המשך באופן דומה עד העכברוש רץ דרך המנהרה שלם. ברגע העכברוש מתחיל להציץ בסוף המנהרה לתוך הכלוב נקי, להציג את העולם של מקל היעד, לחץ, פרס לגעת הגלובוס.
   9. סוף סוף, מדריך העכברוש לעזוב את המנהרה. עבור תהליך זה, השתמש העולם של הסטיק היעד. להציג את העולם לפני המנהרה ולחץ לתגמל את החולדה ברגע זה צעדים לכלוב החדש נוגעת ללב כדור הארץ.
   10. להעביר את החולדה בחזרה לכלוב הביתה "מלוכלך". לשים יד אחת מתחת לבטן או סביב החזה מצד התומכים הרגליים האחוריות של החולדות להרים אותן (איור 1). להציג את העולם של הסטיק היעד במרכז הכלוב נקי. לחץ על הפרס כמו החולדה עובר דרך ה-tunnel, נוגעת המקל היעד (איור 4).
   11. אם החולדה חוזרת על הפעולה במשך יותר מארבע פעמים דקה, לעצור את הפרס לחיצה ולא רק עם reinforcer הראשית.
   12. להפסיק לאחר ארבע דקות.

תוצאות

האימון נערך על קבוצה של 10 חולדות נקבות ליסטר עם ברדס (LD). עשר מיומנת אבל בעדינות שטופלה LD חולדות נקבות שימש כקבוצת בקרה. טיפול עדין אומר כי העכברים היו רק הרים על ידי הגוף שלהם ואת לא הרים בבסיס הזנב. כדי להעריך את הלמידה באמצעות התבוננות, הוספנו קבוצה נוספת אחת של 10 חולדות LD...

Discussion

פרוטוקול המתואר לעיל הוא שימושי מורחב היישום של פרוטוקול אימונים שלנו השלט שתואר לעיל מעבדה עכברים¹⁰. היישום דורש רק דקות ליום מעל סך של שבעה שבועות, כולל הסתגלות, habituation השלט הדרכה. כדאיות, פרוטוקול זה היה מוגבל עד שבוע ימים עם הפעלות כעשר דקות לכל זוג של חולדות. הפרוטוקול יכול ...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Target Stick with Clicker	Trixie	2282
Metal Pipe (Alu Flexrohr nw 100)	Rotheigner		available in construction marktes
White Chocolate/ white chocolate cream			Company doesn't matter, preferable organic quality
Prism Version 6.0 for Mac	GraphPad Software