JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

פיגום DOX-CL המוכן סיפק את התנאים הקדים של רוטב DW אידיאלי בחוזק מכני, נקבוביות, ספיגת מים, שיעור השפלה, שחרור מתמשך, אנטי בקטריאלי, תאימות ביולוגית, תכונות אנטי דלקתיות, אשר נחשבים חיוניים להתאוששות של רקמה פגומה ב- DWs.

Abstract

סיבוך מרכזי אחד של סוכרת הוא פצעים סוכרתיים (DW). השלב הממושך של דלקת בסוכרת חוסם את השלבים הנוספים של פציעה המובילה לריפוי פצעים מאוחר. בחרנו דוקסיציקלין (DOX), כסם פוטנציאלי של בחירה, בשל תכונות אנטי בקטריאלי שלה יחד עם תכונות אנטי דלקתיות דיווח שלה. המחקר הנוכחי נועד לנסח פיגומים שאינם מקושרים קולגן-צ'יטוסן (NCL) וקישורים מקושרים (CL) של DOX ולהעריך את יכולת הריפוי שלהם בתנאי סוכרת. תוצאת האפיון של פיגומים מגלה כי פיגום DOX-CL מחזיק נקבוביות אידיאלית, שיעור נפיחות נמוך השפלה, ושחרור מתמשך של DOX לעומת פיגום DOX-NCL. מחקרי ההפריה החוץ גופית מגלים כי פיגום DOX-CL היה תואם ביולוגית וצמיחת תאים משופרת בהשוואה לפיגומי CL שטופלו וקבוצות בקרה. המחקרים האנטי-בקטריאליים הראו כי פיגום DOX-CL היה יעיל יותר מפיגומי CL נגד החיידקים הנפוצים ביותר שנמצאו ב- DW. באמצעות מודל DW סטרפטוזוטוצין ושומן גבוה דיאטה המושרה, שיעור מהיר יותר באופן משמעותי (p≤0.05) של התכווצות הפצע בקבוצת פיגומים DOX-CL נצפתה בהשוואה לאלה בפיגומים CL שטופלו וקבוצות בקרה. השימוש בפיגומים DOX-CL יכול להתברר כגישה מבטיחה לטיפול מקומי עבור DWs.

Introduction

סוכרת (DM) היא מצב שבו הכישלון של הגוף לספק אינסולין או להגיב לתוצאותיו בעיכול חריג של סוכרים פשוטים מביא לעלייה של גלוקוז בדם 1. ההסתבכות הרצונית והמרסקת ביותר של DM היא הפצע הסוכרתי (DW). בערך 25% מהחולים עם DM יש את ההזדמנות לבנות DW בחיים שלהם 1. הריפוי המופרע של DW מוכר לשלישייה של DM: אימונופתיה, ואסקולופתיה ונוירופתיה. בכל פעם DW נשאר מטופל, זה עלול לגרום להתפתחות נמק, ולכן מבקש את הסרת האיבר המודאג 2.

טיפולים רבים, כגון הנחיית המטופלים (לבדוק את הפצע מדי יום, לנקות את הפצע, להימנע מפעילויות שיוצרות לחץ על הפצע, ניטור גלוקוז תקופתי וכו '), שליטה על רמת הגלוקוז בדם שלהם, פירוק פצעים, העברת לחץ, הליך רפואי, טיפול בחמצן היפרברי וטיפולים מתקדמים הם בפועל 3,4. רוב התרופות הללו אינן מתייחסות לכל התנאים הקדם החיוניים לטיפול DW לאור התנאים הפתופיזיולוגיים הרב-גורמיים והוצאות בלתי צפויות הקשורות לתרופות אלה 5. למרות פתוגנזה DW הוא רב-גורמי, דלקת מתמשכת עם ניהול רקמות בלתי הולם הוא הצהיר להיות הסיבה בפועל לריפוי מאוחר DWs 5,6.

רמות מוגברות של מתווכים דלקתיים ופרו דלקתיים ב- DW גורמות לגורמי גדילה מופחתים האחראים לריפוי פצעים מאוחר 2,6. היווצרות מטריצה חוץ-תאית לא נכונה (ECM) ב- DWs מוסמכת לרמות גבוהות יותר של מטריצה metalloproteinases (MMPs) אחראי על השפלה מהירה של ECM שנוצר. ב MMPs, MMP-9 מדווח כמתווך גדול אחראי על דלקת ממושכת השפלה ECM מהירה 7. הואציין כי טיפול מקומי עם תרופה אנטי דלקתית שמפחית את רמות גבוהות של MMP-9 מחדש מקים הומאוסטזיס עורי, סידור מסגרת ומבקש ריפוי טוב יותר של DWs 8,9.

Doxycycline (DOX), מעכב MMP-9, נבחר לדכא את הרמות הגבוהות של MMP-9, מתווך דלקתי גדול אחראי על דלקת מתמשכת ב- DWs 10,11,12. בנוסף, DOX מחזיק נוגד חמצון (לייצר הידרוקסי חינם פנוקסי רדיקלים מסוגל לקשור עם מינים חמצן תגובתי) 13 ואנטי אפופטוטי (לעכב ביטוי קפס וייצוב מיטוכונדריאלי) 14 פעילויות החיוניות לטיפול DW. נבחר הסדר המסגרות המכילות DOX, קולגן (COL) וצ'יטוסן (CS). הבחירה של COL תלויה באופן שבו הוא מסייע במתן המסגרת הדרושה האחראית על כוח מכני והתחדשות רקמות 15. מצד שני, CS הוא הומולוגי מבחינה מבנית כדי glycosaminoglycan, הקשורים עם מספר שלבים ריפוי פצע. כמו כן, הוא דיווח כי CS מחזיק נכס אנטי בקטריאל משמעותי 15. לפיכך, פיגום COL / CS של DOX מנוסח כדי לדכא את הדלקת הממושכת, ואחריו תמיכה היווצרות המטריצה לריפוי פצע מוצלח בתנאי DM.

Protocol

כל ההליכים בבעלי חיים שבוצעו אושרו על ידי הוועדה האתית של בעלי החיים המוסדיים של מכללת JSS לרוקחות, אוטי, הודו.

1. הכנת פיגומים נקבוביים טעונים של DOX בשיטת ייבוש בהקפאה

  1. מוסיפים 1.2 גרם COL ל-100 מ"ל מים (למשל, מלפיגור) ושומרים בצד לנפיחות.
  2. מערבבים את פיזור COL הנפוח ב 2000 סל"ד לילה כדי להבטיח פירוק מלא של COL.
  3. הכן פתרון CS על ידי המסת כ 0.8 גרם של CS ב 100 מ"ל של 1% חומצה אצטית.
  4. מערבבים את פתרון ה-CS למשך הלילה במהירות של 2,000 סל"ד כדי להבטיח פיזור אחיד.
  5. מערבבים את DOX (1% w/v), ואחריו פתרון למדים, לפתרון COL, ומערבבים במשך 30 דקות.
  6. מסננים את התערובת הפיזית המתקבלת באמצעות מטלית מוסלין כדי להסיר את החומר החלקיקים.
  7. להקפיא עמוק את הסינון המתקבל ב -85 °C (55 °F) ± 4 °C (50 °F) במשך כ 24 שעות.
  8. ליופיליזציה תערובת הקפאה עמוקה ב -85 °C (55 °F) ± 4 °C (72 °F) במשך 72 שעות.
  9. לאחסן את הפיגומים המתקבלים בחיטוי לניתוח נוסף 16,17.

2. הצלבת פיגומים

  1. להמיס MES (0.488 גרם) ב 50 מ"ל של מים.
  2. השרו 50 מ"ג של פיגום טעון DOX ב 20 מ"ל של מאגר MES במשך 30 דקות.
  3. ערבבו 19.5 מ"ל של מאגר MES עם 0.1264 גרם של EDC ו-0.014 גרם של NHS במכה נפרדת.
  4. לטבול את הפיגומים בתערובת חיץ במשך 4 שעות כדי להשיג crosslinking 16.
  5. אחסן את הפיגומים הטעונים (CL) והפיגומים הלא מקושרים (NCL) של DOX להערכה נוספת.

3. אפיון פיגומים

  1. בדיקה מורפולוגית באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סורק (SEM)
    1. אפיון הפיגומים לניתוח מורפולוגי באמצעות SEM (1 ס"מ × 1 ס"מ × 0.5 ס"מ).
    2. מכתימים את החתך ואת המשטח החיצוני של הפיגומים בשכבה העדינה של הזהב (כ-150 Å).
    3. לכוד את התמונה המצולמת במתח העירור של 5 kV ו- 10 kV.
    4. מניחים את הדגימות בספחי אלומיניום ומכניסים אותן לזהב בערך 9 V.
    5. מדוד את הפיגומים באמצעות SEM ברזולוציה מוגברת של 10 kV.
  2. קביעת נקבוביות
    1. למדוד את נקבוביות הפיגומים באמצעות שיטת תזוזת הנוזל (אתנול) 18.
    2. חשב את נקבוביות הפיגומים באמצעות הנוסחה שלהלן.
      figure-protocol-2175
      Ww = משקל רטוב של הפיגומים
      Wd = משקל יבש של הפיגומים
      Wv = נפח הפיגומים
  3. קביעת יכולת ספיגת המים
    1. למדוד את המשקל היבש של הפיגומים.
    2. לדגור את הפיגומים במשקל 37 °C (55 °F) עבור 24 שעות מלוחים פוספט (PBS) pH 7.4.
    3. הסר את ה-PBS העודף מעל הפיגומים באמצעות נייר סינון.
    4. מדוד את קיבולת ספיגת המים באמצעות הנוסחה שלהלן 17.
      figure-protocol-2683
      WS = אחוז ספיגת המים
      W1=משקל רטוב של הפיגומים
      W0= משקל יבש של הפיגומים
  4. פגיעה בפיגומים
    1. לדגור את הפיגומים (1 ס"מ x 1 ס"מ) ב 37 °C (7 ימים ב PBS של pH 7.4 המכיל ליזוזים.
    2. לשטוף את הפיגומים כדי להסיר כל יונים דבקים על פני השטח.
    3. להקפיא יבש את הפיגומים השטופים 17.
    4. חשב את קצב ההשפלה באמצעות formulae.
      figure-protocol-3177
      Ww = המשקל הראשוני של הפיגומים
      Wd = משקל הפיגומים לאחר ייבוש בהקפאה
  5. מחקרי שחרור במבחנה
    1. קבע את אופן הפעולה של שחרור DOX מהפיגומים בשיטת שק הדיאליזה.
    2. מפזרים את הפיגומים בכמה מיליליטרים של נוזל פצע מדומה (pH 7.4) ומעבירים אותו לשקית דיאליזה.
    3. סגור בחוזקה את קצות שקית הממברנה ולטבול את 500 מ"ל של תמיסת נוזל פצע מדומה.
    4. מערבבים את תמיסת נוזל הפצע המכילה את שקית הדיאליזה ב 200-250 סל"ד.
    5. לאסוף את הפתרון supernatant ולהחליף אותו עם כמות שווה של פתרון חוצץ טרי במרווחי זמן מוגדרים.
    6. קבע את אחוז שחרור DOX מהפיגומים בתמיסה העל-טבעית באמצעות ספקטרומטר הנראה UV ב-240 ננומטר.

4. אין ויטרו מחקרים אנטי בקטריאלית

  1. לקבוע את הריכוז המעכב המינימלי (MIC) של פיגומי CL ו- DOX-CL נגד S. aureus, S. epidermis, E. coli, P. aeruginosa באמצעות שיטת דילול המיקרו-מרק.
  2. הכן את תרביות החיידקים באמצעות מרק מולר-הינטון ביחס של 1:1000 כדי להשיג עכוז מקפרלנד 0.5.
  3. הוסף D-גלוקוז (800 מ"ג / ד"ל) לתרבויות החיידקים עבור היפרגליקציה 19,20.
  4. טחון ו solubilize CL ו- DOX-CL ב- DMSO (שליטה שלילית).
  5. לדלל באופן סדרתי את ההשעיה החיידקית hyperglycated (100 μL) ודגימות בדיקה (100 μL של פתרון פיגומים) ב 96 צלחת היטב.
  6. לדגור על הצלחת ב 37 °C (55 °F) במשך 20-24 שעות.
  7. תיעדו את הספיגה בסוף גל של 600 ננומטר 21.

5. מחקרי תאימות ביולוגית במבחנה

  1. להעריך את תאימות ביולוגית של הפיגומים מוכנים באמצעות MTT [(3-(4, 5 דימתיל תיאזול-2 yl) -2, 5-דיפניל טטרזוליום ברומיד)]
  2. מחטאים את הפיגומים של הממד הסטנדרטי ומניחים אותם ב-24 צלחות היטב.
  3. הוסף תאי 3T3-L1 לצלחת 24 הבאר ודגר במשך 72 שעות.

6. במחקרים בבעלי חיים ב-vivo

  1. אינדוקציה של פצע DM ו excision
    1. להאכיל את החיה עם דיאטה עתירת שומן במשך שבועיים ולנהל מנה אחת של סטרפטוזוטוצין (STZ) (50 מ"ג / קילוגרם משקל גוף) בתמיסת חיץ ציטראט תוך-פריטון לחולדות לבקן Wistar (180-200 גרם) עבור אינדוקציה של סוכרת מסוג 2.
    2. בחר את בעלי החיים עם גלוקוז בדם קבוע של 250 מ"ג / ד"ל למחקר.
    3. אקראי את החיות שנבחרו עבור אינדוקציה של פצעי כריתה.
    4. להנשים את החולדות הסוכרתיות באמצעות אתר diethyl (5 מ"ל נוספה לתא ההרדמה הרווי מראש) ולאשר באמצעות שיטת צביטת בוהן וצבע קרום רירי.
    5. גילחו את אזור הגבעול (בית החזה של דורסל, אזור המותני) באמצעות גוזם אספטי ולהבים (A40).
    6. לחטא את האזור המגולח עם ספוגית אלכוהולית.
    7. Excise את העור (2 x 2 ס"מ2 ועומק של 1 מ"מ) עם להב A40 כירורגי אספטי על האזור המגולח כדי ליצור פצע פתוח.
    8. חלקו את בעלי החיים לשלוש קבוצות (קבוצה 1 - בקרת מחלות (בקרה), פיגום CL קבוצה 2 -CL (פלצבו), פיגום CL קבוצה 3- DOX), כל קבוצה המורכבת מ -6 חולדות.
    9. הדביקו את פיגומי CL ו- DOX CL באמצעות סרט דבק כירורגי וכסו את קבוצת הביקורת בגאזה סטרילית למשך 21 יום.
    10. עקוב אחר אזור הפצע בגיליון OHP סטרילי ומדוד את הפחתת האחוזים של הפצע באמצעות שיטת הרשת בימים 0, 7, 14 ו -21 עבור כל הקבוצות.
    11. חשב את הפחתת פצע האחוזים באמצעות הנוסחה שלהלן.
      figure-protocol-6445

7. מחקרים היסטופתולוגיים

  1. לבודד את אזור הפצע נרפא בימים 7, 14, ו 21, לאחסן פתרון פורמלין (10%).
  2. חלק את הרקמות באמצעות microtome כדי להשיג עובי של 6 מיקרומטר.
  3. הר את המקטעים על שקופית זכוכית וכתם באמצעות המטוקסילין ואוסין 17.
  4. לכוד את התמונות תחת הגדלה של פי 40 באמצעות מיקרוסקופ דיגיטלי.

8. הערכת הידרוקסיפרולין

  1. לבודד את אזור הפצע נרפא בימים 0, 7, 14, ו 21 להערכה.
  2. הערכת התוכן hydroxyproline באמצעות ההליך המתואר על ידי Reddy G ואח ', 1996 22.

9. מבחן אליסה

  1. הערכת רמות ה- MMP-9 באמצעות ערכת אליסה בהתאם להוראות היצרן.
  2. לבודד את דגימות הרקמה מאזור הפצע נרפא ביום 21 טחון באמצעות homogenizer רקמות.
  3. צנטריפוגה הומוגנית המתקבלת ולאסוף את supernatant.
  4. לדלל את supernatant ב 100 פי 100 באמצעות חוצץ assay.
  5. סרוק את הצלחת באמצעות קורא לוחות מרובים.

10. ניתוח סטטיסטי

  1. לייצג את התוצאות שהושגו כמו ממוצע ± SD.
  2. בצע את הניתוח הסטטיסטי באמצעות מנסרה משטח גרף v5.01.
  3. השג את המשמעות הסטטיסטית באמצעות ניתוח חד כיווני של שונות (ANOVA) ומבחן פוסט הוק של דאנט.
  4. שקול את הערכים עם p≤0.05 כמשמעותיים.

תוצאות

אפיון פיגום NCL ו- CL טעון של DOX
בבדיקה חזותית, פיגום NCL ו- CL נמצא קרם בצבע. חוץ מזה, שני הפיגומים נראים כמו ספוג, נוקשה ולא אלסטי כאשר נבדקים פיזית. תמונות SEM של פיגומי NCL ו- CL מוצגות באיור 1. מהאיור, היה ברור כי חלה ירידה בגודל הנקבבוביות לאחר הצלבה על ידי יצירת קשרים בין-?...

Discussion

המטרה העיקרית של מחקר זה הייתה לקבוע את ההשפעה של פיגום COL-CS טעון DOX על ריפוי DW בחולדות. CL ו- NCL הוכנו והוערכה במונחים של מורפולוגיה, מדד נפיחות, קינטיקה שחרור במבחנה, תאימות ביולוגית.

אפיון פיגום NCL ו- CL טעון של DOX
הפיגומים המוכנים נמצאו נקבוביים עם נקבוביות מחוברות. נ...

Disclosures

המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

Acknowledgements

המחברים מודים לד"ר אשיש ד וודהואני. (עוזר פרופסור וראש המחלקה לביוטכנולוגיה פרמצבטית, המכללה לרוקחות JSS, אוטי, הודו) לסיוע במחקרי כדאיות תאי במבחנה.

המחברים רוצים להודות למחלקה למדע וטכנולוגיה - קרן לשיפור תשתיות המדע והטכנולוגיה באוניברסיטאות ובמוסדות להשכלה גבוהה (DST-FIST), ניו דלהי, על תמיכתם במחלקה שלנו.

המחברים גם אוהבים להודות למר סנג'ו. ס' ומר סרירם. תלמידי נרוקולה מ. פארם על תמיכתם בצילומי הווידאו.

מחקר זה נתמך על ידי האקדמיה להשכלה גבוהה JSS (JSSAHER).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
1-ethyl-(3-3-dimethyl aminopropyl) carbodiimide hydrochloride (EDC)Merck Millipore, Mumbai, IndiaE7750
2-(N-morpholino) ethane sulfonic acid (MES)Merck Millipore, Mumbai, India137074
3-(4, 5 dimethyl thiazole-2 yl) -2, 5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT)Thermo Fisher, Mumbai, IndiaM6494
Deep freezer verticleLabline Instruments, Kochi, India
Dialysis sackMerck Millipore, Mumbai, IndiaD6191-Avg. flat width 25 mm (1.0 in.), MWCO 12,000 Da
DoxycyclineSigma chemicals Co. Ltd, Mumbai, IndiaD9891
Elisa kitR&D SystemsRMP900
Escherichia coli (E. coli)National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, IndiaNCIM 2567
EthanolMerck Millipore, Mumbai, India100983
Lyophilizer-SZ042Sub-Zero lab instruments, Chennai, India
Mechanical Stirrer-RQ-122/DRemi laboratory instruments, Mumbai, India
Medium molecular weight ChitosanSisco Research Laboratories Pvt. Ltd., Mumbai, India18824
Microtome-RM2135Leica, U.K
Mouse embryonic fibroblast cells (3T3-L1)National Centre for Cell Sciences, Pune, India
Multiple plate reader -Inifinte M200 ProTecan Instruments, Switzerland
N-hydroxy succinimide (NHS)Sigma chemicals Co. Ltd, Mumbai, India130672
Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa)National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, IndiaNCIM 2036
Scanning Electron Microscopy (SEM)-S-4800Hitachi, India
Sodium hydroxide (NaOH) pelletsQualigen fine chemicals, Mumbai, IndiaQ27815
Staphylococcus aureus (S. aureus)National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, IndiaNCIM 5022
Staphylococcus epidermis (S. epidermis)National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, IndiaNCIM 5270
Streptozotocin (STZ)Sisco Research Laboratories Pvt. Ltd., Mumbai, India14653
Type-1 rat CollagenSigma chemicals Co. Ltd, Mumbai, IndiaC7661
Ultraviolet–visible spectroscopy-1700Shimadzu

References

  1. . IDF Diabetes Atlas, 9th edn Available from: https://www.diabetesatlas.org (2019)
  2. Falanga, V. Wound healing and its impairment in the diabetic foot. The Lancet. 366 (9498), 1736-1743 (2005).
  3. Frykberg, R. G., Banks, J. Challenges in the treatment of chronic wounds. Advances in Wound Care. 4 (9), 560-582 (2015).
  4. Alexiadou, K., Doupis, J. Management of diabetic foot ulcers. Diabetes Therapy. 3 (1), 1-15 (2012).
  5. Karri, V. V. S. R., et al. Current and emerging therapies in the management of diabetic foot ulcers. Current Medical Research and Opinion. 32 (3), 519-542 (2016).
  6. Sanapalli, B. K., et al. Human beta defensins may be a multifactorial modulator in the management of diabetic wound. Wound Repair and Regeneration. 28 (3), 416-421 (2020).
  7. Caley, M. P., Martins, V. L., O'Toole, E. A. Metalloproteinases and wound healing. Advances in Wound Care. 4 (4), 225-234 (2015).
  8. Reiss, M. J., et al. Matrix metalloproteinase-9 delays wound healing in a murine wound model. Surgery. 147 (2), 295-302 (2010).
  9. Gill, S. E., Parks, W. C. Metalloproteinases and their inhibitors: regulators of wound healing. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 40 (6-7), 1334-1347 (2008).
  10. Stechmiller, J., Cowan, L., Schultz, G. The role of doxycycline as a matrix metalloproteinase inhibitor for the treatment of chronic wounds. Biological Research for Nursing. 11 (4), 336-344 (2010).
  11. Griffin, M. O., Fricovsky, E., Ceballos, G., Villarreal, F. Tetracyclines: a pleitropic family of compounds with promising therapeutic properties. Review of the literature. American Journal of Physiology-Cell Physiology. 299 (3), 539-548 (2010).
  12. Burns, F., Stack, M., Gray, R., Paterson, C. Inhibition of purified collagenase from alkali-burned rabbit corneas. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 30 (7), 1569-1575 (1989).
  13. Kraus, R. L., et al. Antioxidant properties of minocycline: neuroprotection in an oxidative stress assay and direct radical-scavenging activity. Journal of Neurochemistry. 94 (3), 819-827 (2005).
  14. Yrjänheikki, J., Keinänen, R., Pellikka, M., Hökfelt, T., Koistinaho, J. Tetracyclines inhibit microglial activation and are neuroprotective in global brain ischemia. Proceedings of the National Academy of Sciences. 95 (26), 15769-15774 (1998).
  15. Moura, L. I., Dias, A. M., Carvalho, E., de Sousa, H. C. Recent advances on the development of wound dressings for diabetic foot ulcer treatment-a review. Acta Biomaterialia. 9 (7), 7093-7114 (2013).
  16. Natarajan, J., et al. Nanostructured Lipid Carriers of Pioglitazone Loaded Collagen/Chitosan Composite Scaffold for Diabetic Wound Healing. Advances in Wound Care. 8 (10), 499-513 (2019).
  17. Karri, V. V. S. R., et al. Curcumin loaded chitosan nanoparticles impregnated into collagen-alginate scaffolds for diabetic wound healing. International Journal Of Biological Macromolecules. 93, 1519-1529 (2016).
  18. Hsieh, W. -. C., Chang, C. -. P., Lin, S. -. M. Morphology and characterization of 3D micro-porous structured chitosan scaffolds for tissue engineering. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 57 (2), 250-255 (2007).
  19. Xie, Y., Chen, J., Xiao, A., Liu, L. Antibacterial activity of polyphenols: structure-activity relationship and influence of hyperglycemic condition. Molecules. 22 (1913), 1-11 (2017).
  20. Geerlings, S. E., Brouwer, E. C., Gaastra, W., Verhoef, J., Hoepelman, A. I. Effect of glucose and pH on uropathogenic and non-uropathogenic Escherichia coli: studies with urine from diabetic and non-diabetic individuals. Journal of Medical Microbiology. 48 (6), 535-539 (1999).
  21. Eloff, J. N. A sensitive and quick microplate method to determine the minimal inhibitory concentration of plant extracts for bacteria. Planta Medica. 64 (8), 711-713 (1998).
  22. Reddy, G. K., Enwemeka, C. S. A simplified method for the analysis of hydroxyproline in biological tissues. Clinical Biochemistry. 29 (3), 225-229 (1996).
  23. Charulatha, V., Rajaram, A. Influence of different crosslinking treatments on the physical properties of collagen membranes. Biomaterials. 24 (5), 759-767 (2003).
  24. Rehakova, M., Bakoš, D., Vizarova, K., Soldán, M., Jurícková, M. Properties of collagen and hyaluronic acid composite materials and their modification by chemical crosslinking. Journal of Biomedical Materials Research: An Official Journal of The Society for Biomaterials and The Japanese Society for Biomaterials. 30 (3), 369-372 (1996).
  25. Chang, M. -. Y., et al. Doxycycline enhances survival and self-renewal of human pluripotent stem cells. Stem Cell Reports. 3 (2), 353-364 (2014).
  26. Dovi, J. V., He, L. K., DiPietro, L. A. Accelerated wound closure in neutrophil-depleted mice. Journal of Leukocyte Biology. 73 (4), 448-455 (2003).
  27. Lindeman, J. H., Abdul-Hussien, H., van Bockel, J. H., Wolterbeek, R., Kleemann, R. Clinical Perspective. Circulation. 119 (16), 2209-2216 (2009).
  28. Zhang, C., Gong, W., Liu, H., Guo, Z., Ge, S. Inhibition of matrix metalloproteinase-9 with low-dose doxycycline reduces acute lung injury induced by cardiopulmonary bypass. International Journal Of Clinical And Experimental Medicine. 7 (12), 4975-4982 (2014).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

174

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved