JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Hazırlanan DOX-CL iskelesi, DW'lerde hasarlı dokunun geri kazanılması için gerekli olduğu düşünülen mekanik mukavemet, gözeneklilik, su emme, bozulma oranı, sürekli salınım, anti-bakteriyel, biyouyumluluk ve antienflamatuar özelliklerde ideal bir DW pansumanının önkoşullarını karşıladı.

Özet

Diabetes mellitus'un en önemli komplikasyonlarından biri diyabetik yaralardır (DW). Diyabette iltihabın uzun süreli evresi, yara iyileşmesinin gecikmesine yol açan bir yaralanmanın ileri aşamalarını engeller. Bildirilen antienflamatuar özellikleri ile birlikte anti-bakteriyel özellikleri nedeniyle, tercih edilen potansiyel bir ilaç olarak doksiksin (DOX) seçtik. Mevcut çalışma, DOX yüklü kollajen-kitosan çapraz bağlı olmayan (NCL) ve çapraz bağlı (CL) iskeleleri formüle etmeyi ve diyabetik koşullarda iyileşme yeteneklerini değerlendirmeyi amaçlamaktadır. İskelelerin karakterizasyon sonucu, DOX-CL iskelesinin DOX-NCL iskelesine kıyasla ideal gözeneklilik, düşük şişlik ve bozulma oranı ve sürekli bir DOX salınımı barındırdığını ortaya koymaktadır. Tüp bebek çalışmaları, DOX-CL iskelesinin cl iskelesi tedavi ve kontrol gruplarına kıyasla biyouyumlu ve gelişmiş hücre büyümesi olduğunu ortaya koymaktadır. Anti-bakteriyel çalışmalar, DOX-CL iskelesinin DW'de bulunan en yaygın bakterilere karşı CL iskelesinden daha etkili olduğunu göstermiştir. Streptozotosin ve yüksek yağlı diyet kaynaklı DW modeli kullanılarak, CL iskelesi tedavi ve kontrol gruplarındakilere kıyasla DOX-CL iskelesi tedavi grubunda önemli ölçüde (p≤0.05) daha hızlı bir yara kasılma oranı gözlendi. DOX-CL iskelesinin kullanımı, DW'ler için yerel tedavi için umut verici bir yaklaşım olabilir.

Giriş

Diabetes mellitus (DM), vücudun insülin vermemesi veya basit şekerlerin anormal sindiriminde sonuçlarına tepki vermemesinin kan şekerinin yükselişine neden olduğu bir durumdur 1. DM'nin en ardışık ve ezici dolanıklığı diyabetik yaradır (DW). DM'li hastaların kabaca% 25'i yaşamları boyunca bir DW oluşturma fırsatına sahiptir 1. DW'nin engellenen iyileşmesi DM üçlüsüne akredite edilmiştir: immünopati, vaskülopati ve nöropati. DW tedavi edilmediğinde, kangren gelişimine neden olabilir, bu nedenle ilgili organın çıkarılmasına neden olur 2.

Hastalara talimat (yarayı günlük olarak incelemek, yarayı temizlemek, yara üzerinde baskı yaratan aktivitelerden kaçınmak, periyodik glikoz izleme vb.), kan glukozlarını kontrol etmek, yara debridmanı, basınç boşaltma, tıbbi prosedür, hiperbarik oksijen tedavisi ve ileri tedaviler pratikte 3,4. Bu ilaçların çoğunluğu, çok yönlü patofizyolojik koşullar ve bu ilaçlarla ilgili beklenmedik harcamalar ışığında DW bakımı için hayati önem taşıyan tüm ön koşulları ele almamaktadır 5. DW patogenez çok yönlü olsa da, uygunsuz doku yönetimi ile kalıcı inflamasyonun DWs 5,6'dagecikmeli iyileşmenin gerçek nedeni olduğu belirtilir.

DW'deki inflamatuar ve pro-enflamatuar mediatörlerin artırılmış seviyeleri, gecikmiş yara iyileşmesinden sorumlu büyüme faktörlerinin azalmasına neden olarak 2,6. DW'lerde yanlış hücre dışı matris (ECM) oluşumu, oluşan ECM'nin hızlı bozulmasından sorumlu olan matris metalloproteinazlarının (MMP) artan seviyelerine akredite edilmiştir. MMP'lerde, MMP-9 uzun süreli iltihaplanma ve hızlı ECM bozulması 7'densorumlu büyük bir aracı olarak bildiriliyor. MMP-9'un yüksek seviyelerini azaltan anti-enflamatuar bir ilaçla lokal tedavinin, küsinöz homeostaz, çerçeve düzenlemesi ve DWs 8,9'undaha iyi iyileşmesini istemektedir.

Bir MMP-9 inhibitörü olan doksiksin (DOX), DWs 10 , 11,12'dekalıcı iltihaplanmadan sorumlu büyük bir enflamatuar arabulucuolanMMP-9'un yüksek seviyelerini bastırmak için seçildi. Ek olarak, DOX antioksidana sahiptir (reaktif oksijen türleriyle bağlanabilen serbest hidroksi ve fenoksi radikalleri üretin) 13 ve anti-apoptotik (kaspaz ekspresyonunu ve mitokondriyal stabilizasyonu inhibe edin) DW tedavisi için gerekli olan 14 aktivite. DOX, kollajen (COL) ve chitosan (CS) içeren çerçevelerin düzenlenmesi seçildi. COL seçimi, mekanik mukavemet ve doku yenilenmesinden sorumlu gerekli çerçevenin sağlanmasına yardımcı olma yoluna bağlıdır 15. Öte yandan, CS yapısal olarak glikozaminojlikan için homologdur ve çeşitli yara iyileşme aşamaları ile ilişkilidir. Ayrıca CS'nin önemli anti-bakteriyel özelliğe sahip olduğu bildirilmektedir 15. Bu nedenle, DOX'un COL / CS iskelesi uzun süreli iltihabı bastırmak için formüle edilmiştir, ardından DM koşullarında başarılı yara iyileşmesi için matris oluşumunu destekler.

Protokol

Gerçekleştirilen tüm hayvan prosedürleri, Ooty, Hindistan'daki JSS Eczacılık Koleji'nin kurumsal hayvan etik komitesi tarafından onaylandı.

1. DOX yüklü gözenekli iskelelerin dondurularak kurutma yöntemiyle hazırlanması

  1. 100 mL suya (örneğin, Millipore) 1,2 g COL ekleyin ve şişme için bir kenara bırakın.
  2. COL'un tamamen dağılmasını sağlamak için şişmiş COL dağılımını bir gecede 2000 rpm'de karıştırın.
  3. %1 asetik asidin 100 mL'sinde yaklaşık 0,8 g CS çözerek CS çözeltisi hazırlayın.
  4. Düzgün dağılım sağlamak için CS çözümünü 2000 rpm'de gece karıştırın.
  5. DOX'u (%1 w/v) ve ardından CS çözümünü COL çözümüne karıştırın ve 30 dakika karıştırın.
  6. Elde edilen fiziksel karışımı partikül maddeyi çıkarmak için bir muslin bezi kullanarak filtreleyin.
  7. Elde edilen filtratı -85 °C ± 4 °C'de yaklaşık 24 saat derin dondurucu.
  8. Derin dondurucu karışımını -85 °C'de ± 4 °C'de 72 saat boyunca ilikleyin.
  9. Elde edilen iskeleleri daha fazla analiz için bir kurutucuda saklayın 16,17.

2. İskelenin çapraz bağlantısı

  1. MES'i (0,488 g) 50 mL suda çözün.
  2. DOX yüklü iskelenin 50 mg'ını 30 dakika boyunca MES tamponunun 20 mL'sinde bekletin.
  3. 19,5 mL MES tamponu 0,1264 g EDC ve 0,014 g NHS ile ayrı bir beherde karıştırın.
  4. Çapraz bağlama elde etmek için iskeleyi tampon karışımına 4 saat daldırin 16.
  5. Daha fazla değerlendirme için DOX yüklü çapraz bağlı (CL) ve çapraz bağlı olmayan iskeleleri (NCL) saklayın.

3. İskelelerin karakterizasyonu

  1. Taramalı elektron mikroskopisi (SEM) kullanılarak morfolojik inceleme
    1. SEM (1 cm × 1 cm × 0,5 cm) kullanarak morfolojik analiz için iskeleleri karakterize edin.
    2. İskelenin kesitini ve dış yüzeyini hassas altın tabakasıyla (~150 Å) lekeleyin.
    3. 5 kV ve 10 kV'lik heyecan geriliminde fotoğrafik görüntüyü yakalayın.
    4. Numuneleri alüminyum saplamalara yerleştirin ve yaklaşık 9 V'ta altınla çevreleyin.
    5. SEM kullanarak iskeleyi 10 kV'da artırılmış çözünürlükle ölçün.
  2. Gözeneklilik tayini
    1. Sıvı deplasman yöntemini (etanol) kullanarak iskelelerin gözenekliliğini ölçün 18.
    2. Aşağıdaki formülleri kullanarak iskelelerin gözenekliliğini hesaplayın.
      figure-protocol-2524
      Ww = İskelenin ıslak ağırlığı
      Wd = İskelenin kuru ağırlığı
      Wv = İskelenin hacmi
  3. Su emme kapasitesinin belirlenmesi
    1. İskelenin kuru ağırlığını ölçün.
    2. Tartılmış iskeleyi fosfat tampon salin (PBS) pH 7.4'te 24 saat boyunca 37 °C'de kuluçkaya yatırın.
    3. Filtre kağıdı kullanarak fazla PBS'yi iskelenin üzerinden çıkarın.
    4. Aşağıdaki formül 17'yikullanarak su emme kapasitesini ölçün.
      figure-protocol-3099
      WS = Su emme yüzdesi
      W1=İskelenin ıslak ağırlığı
      W0= İskelenin kuru ağırlığı
  4. İskele bozulması
    1. Lysozymes içeren pH 7.4 PBS'de 7 gün boyunca 37 °C'de iskeleyi (1cm x 1cm) kuluçkaya yatırın.
    2. Yüzeydeki yapışan iyonları çıkarmak için iskeleyi yıkayın.
    3. Donmuş kuru yıkanmış iskele 17.
    4. Formül kullanarak bozulma oranını hesaplayın.
      figure-protocol-3624
      Ww = İskelenin ilk ağırlığı
      Wd = Dondurarak kuruttuktan sonra iskelenin ağırlığı
  5. Tüp bebek salınım çalışmaları
    1. Diyaliz çuvalı yöntemini kullanarak DOX'un iskeleden salınma davranışını belirleyin.
    2. İskeleyi birkaç mililitre simüle yara sıvısına (pH 7.4) dağıtın ve bir diyaliz torbasına aktarın.
    3. Membran torbasının uçlarını sıkıca kapatın ve 500 mL simüle edilmiş yara sıvısı çözeltisinin içine daldırın.
    4. Diyaliz torbasını içeren yara sıvısı solüsyonını 200-250 rpm'de karıştırın.
    5. Süpernatant çözeltiyi toplayın ve belirli zaman aralıklarında eşit miktarda taze tampon çözeltisi ile değiştirin.
    6. 240 nm'de UV görünür bir spektrometre kullanarak süpernatant çözeltisteki iskelelerden DOX salınımının yüzdesini belirleyin.

4. In vitro anti-bakteriyel çalışmalar

  1. Mikro et suyu seyreltme yöntemini kullanarak CL ve DOX-CL iskelelerinin S. aureus, S. epidermis, E. coli, P. aeruginosa'ya karşı minimum inhibitör konsantrasyonunu (MIC) belirleyin.
  2. 0,5 McFarland bulanıklığı elde etmek için 1:1000 oranında Mueller-Hinton suyu kullanarak bakteri kültürlerini hazırlayın.
  3. Hiperglasyon için bakteri kültürlerine D-glikoz (800 mg/dL) ekleyin 19,20.
  4. DMSO'da CL ve DOX-CL'yi (negatif kontrol) kıyma ve çözün.
  5. Hipergliğe maruz bakteri süspansiyonu (100 μL) ve test numunelerini (100 μL iskele çözeltisi) 96 kuyu plakasında seri olarak seyreltin.
  6. Plakayı 37 °C'de 20-24 saat kuluçkaya yatırın.
  7. Emiciliği 600 nm 21dalga boyunda kaydedin.

5. Tüp bebek biyouyumbilite çalışmaları

  1. MTT [(3-(4, 5 dimetil tiazol-2 yl) -2, 5-difenil tetrazolium bromür)] tahlil kullanarak hazırlanan iskelelerin biyouyumluluğunu değerlendirin.
  2. Standart boyuttaki iskeleleri sterilize edin ve 24 kuyu plakasına yerleştirin.
  3. 24 kuyu plakasına 3T3-L1 hücreleri ekleyin ve 72 saat boyunca inkübe edin.

6. In vivo hayvan çalışmaları

  1. DM indüksiyonu ve eksizyon yarası
    1. Hayvanı iki hafta boyunca yüksek yağlı bir diyetle besleyin ve tip-2 diyabetin indüksiyonu için Wistar albino sıçanlarına (180-200 g) intraperitoneally sitrat tampon çözeltisinde tek doz streptozotosin (STZ) (50 mg / kg vücut ağırlığı) uygulayın.
    2. Çalışma için 250 mg / dL sabit kan şekeri olan hayvanları seçin.
    3. Eksizyon yaralarının indüksiyonu için seçilen hayvanları rastgele halen.
    4. Diyabetik sıçanları dietil eter (önceden doymuş anestezi odasına 5 mL eklendi) kullanarak uyuşturun ve parmak sıkışması yöntemini ve mukoza zarı rengini kullanarak onaylayın.
    5. Dorsal bölgeyi (Dorsal torasik, bel bölgesi) aseptik bir düzeltici ve bıçaklar (A40) kullanarak tıraş edin.
    6. Tıraş edilen bölgeyi alkollü bir bezle sterilize edin.
    7. Açık bir yara oluşturmak için tıraş edilen bölgeye aseptik cerrahi A40 bıçağı ile cildi (2 x 2 cm2 ve 1 mm derinlikte) açın.
    8. Hayvanları üç gruba ayırın (Grup 1- Hastalık kontrolü (Kontrol), Grup 2- CL iskele (Plasebo), Grup 3- DOX CL iskele), her grup 6 sıçandan oluşan.
    9. Cl ve DOX CL iskelelerini cerrahi bant kullanarak yapıştırın ve kontrol grubunu 21 gün boyunca steril gazlı bezle örtün.
    10. Yara bölgesini steril bir OHP tabakası üzerinde takip edin ve tüm gruplar için 0, 7, 14 ve 21.
    11. Aşağıdaki formülleri kullanarak yara azaltma yüzdesini hesaplayın.
      figure-protocol-7395

7. Histopatolojik çalışmalar

  1. İyileşmiş yara bölgesini 7, 14 ve 21.
  2. 6 μm kalınlığı elde etmek için dokuları bir mikrotom kullanarak bölümlere alın.
  3. Bölümleri cam bir kaydırağa monte edin ve Hematoksilin ve eosin 17kullanarak lekeleyin.
  4. Dijital mikroskop kullanarak görüntüleri 40x büyütme altında yakalayın.

8. Hidroksiprolin tahmini

  1. İyileşmiş yara bölgesini değerlendirme için 0, 7, 14 ve 21.
  2. Reddy G ve ark., 1996 22.

9. Elisa testi

  1. Üreticinin talimatlarına göre Elisa kitini kullanarak MMP-9 seviyelerini tahmin edin.
  2. İyileşmiş yara bölgesinden alınan doku örneklerini 21. günde izole edin ve doku homojenizatör kullanarak kıymayı haline getirin.
  3. Elde edilen homojenatı santrifüj edin ve süpernatantı toplayın.
  4. Test tamponu kullanarak süpernatant'ı 100 kat seyreltin.
  5. Birden fazla plaka okuyucu kullanarak plakayı tarayın.

10. İstatistiksel analiz

  1. Elde edilen sonuçları Ortalama ± SD olarak temsil eder.
  2. Graph pad prizması v5.01 kullanarak istatistiksel analizi gerçekleştirin.
  3. Varyansın Tek Yönlü Analizi (ANOVA) ve Dunnet'in geçici testini kullanarak istatistiksel öneme sahip olun.
  4. p≤0.05 değerlerini önemli olarak düşünün.

Sonuçlar

DOX yüklü NCL ve CL iskelesinin karakterizasyonu
Yapılan görsel incelemede NCL ve CL iskelesinin krem renginde olduğu tespit edildi. Ayrıca, her iki iskele de fiziksel olarak incelendiğinde sert ve inelastik bir sünger gibi görünmektedir. NCL ve CL iskelelerinin SEM görüntüleri Şekil 1'degösterilmiştir. Rakamdan, intermoleküler bağlar oluşturarak çapraz bağlama yapıldıktan sonra gözenek boyutunda azalma olduğu açıktı. Ayrıca, NCL ve CL iskele ...

Tartışmalar

Bu çalışmanın temel amacı, DOX yüklü COL-CS iskelesinin sıçanlarda DW iyileşmesi üzerindeki etkisini belirlemekti. CL ve NCL morfoloji, şişlik indeksi, in vitro sönme kinetiği ve biyouyumluluk açısından hazırlandı ve değerlendirildi.

DOX yüklü NCL ve CL iskelesinin karakterizasyonu
Hazırlanan iskelelerin birbirine bağlı gözeneklerle gözenekli olduğu tespit edildi. Bu birbirine bağlı gözenekler, çoğalma ve göç için hücrelere oksijen ve b...

Açıklamalar

Yazarlar rakip finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

Yazarlar Dr. Ashish D Wadhwani'ye teşekkür eder. (Yardımcı Doçent ve Farmasötik Biyoteknoloji Bölümü Başkanı, JSS Eczacılık Koleji, Ooty, Hindistan) In vitro hücre canlılığı çalışmalarına yardımcı olduğu için.

Yazarlar, Bölümümüzü desteklemektedirler için Yeni Delhi'deki Üniversiteler ve Yükseköğretim Kurumlarında Bilim ve Teknoloji Altyapısının geliştirilmesi için Bilim ve Teknoloji Bölümü 'ne (DST-FIST) teşekkür ederler.

Yazarlar da Bay Sanju'ya teşekkür etmek istiyor. S ve Bay Sriram. Narukulla M. Pharm öğrencileri video çekimine verdikleri destek için.

Bu araştırma JSS Yükseköğretim ve Araştırma Akademisi (JSSAHER) tarafından desteklendi.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
1-ethyl-(3-3-dimethyl aminopropyl) carbodiimide hydrochloride (EDC)Merck Millipore, Mumbai, IndiaE7750
2-(N-morpholino) ethane sulfonic acid (MES)Merck Millipore, Mumbai, India137074
3-(4, 5 dimethyl thiazole-2 yl) -2, 5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT)Thermo Fisher, Mumbai, IndiaM6494
Deep freezer verticleLabline Instruments, Kochi, India
Dialysis sackMerck Millipore, Mumbai, IndiaD6191-Avg. flat width 25 mm (1.0 in.), MWCO 12,000 Da
DoxycyclineSigma chemicals Co. Ltd, Mumbai, IndiaD9891
Elisa kitR&D SystemsRMP900
Escherichia coli (E. coli)National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, IndiaNCIM 2567
EthanolMerck Millipore, Mumbai, India100983
Lyophilizer-SZ042Sub-Zero lab instruments, Chennai, India
Mechanical Stirrer-RQ-122/DRemi laboratory instruments, Mumbai, India
Medium molecular weight ChitosanSisco Research Laboratories Pvt. Ltd., Mumbai, India18824
Microtome-RM2135Leica, U.K
Mouse embryonic fibroblast cells (3T3-L1)National Centre for Cell Sciences, Pune, India
Multiple plate reader -Inifinte M200 ProTecan Instruments, Switzerland
N-hydroxy succinimide (NHS)Sigma chemicals Co. Ltd, Mumbai, India130672
Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa)National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, IndiaNCIM 2036
Scanning Electron Microscopy (SEM)-S-4800Hitachi, India
Sodium hydroxide (NaOH) pelletsQualigen fine chemicals, Mumbai, IndiaQ27815
Staphylococcus aureus (S. aureus)National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, IndiaNCIM 5022
Staphylococcus epidermis (S. epidermis)National Collection of Industrial Microorganisms, Pune, IndiaNCIM 5270
Streptozotocin (STZ)Sisco Research Laboratories Pvt. Ltd., Mumbai, India14653
Type-1 rat CollagenSigma chemicals Co. Ltd, Mumbai, IndiaC7661
Ultraviolet–visible spectroscopy-1700Shimadzu

Referanslar

  1. . IDF Diabetes Atlas, 9th edn Available from: https://www.diabetesatlas.org (2019)
  2. Falanga, V. Wound healing and its impairment in the diabetic foot. The Lancet. 366 (9498), 1736-1743 (2005).
  3. Frykberg, R. G., Banks, J. Challenges in the treatment of chronic wounds. Advances in Wound Care. 4 (9), 560-582 (2015).
  4. Alexiadou, K., Doupis, J. Management of diabetic foot ulcers. Diabetes Therapy. 3 (1), 1-15 (2012).
  5. Karri, V. V. S. R., et al. Current and emerging therapies in the management of diabetic foot ulcers. Current Medical Research and Opinion. 32 (3), 519-542 (2016).
  6. Sanapalli, B. K., et al. Human beta defensins may be a multifactorial modulator in the management of diabetic wound. Wound Repair and Regeneration. 28 (3), 416-421 (2020).
  7. Caley, M. P., Martins, V. L., O'Toole, E. A. Metalloproteinases and wound healing. Advances in Wound Care. 4 (4), 225-234 (2015).
  8. Reiss, M. J., et al. Matrix metalloproteinase-9 delays wound healing in a murine wound model. Surgery. 147 (2), 295-302 (2010).
  9. Gill, S. E., Parks, W. C. Metalloproteinases and their inhibitors: regulators of wound healing. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 40 (6-7), 1334-1347 (2008).
  10. Stechmiller, J., Cowan, L., Schultz, G. The role of doxycycline as a matrix metalloproteinase inhibitor for the treatment of chronic wounds. Biological Research for Nursing. 11 (4), 336-344 (2010).
  11. Griffin, M. O., Fricovsky, E., Ceballos, G., Villarreal, F. Tetracyclines: a pleitropic family of compounds with promising therapeutic properties. Review of the literature. American Journal of Physiology-Cell Physiology. 299 (3), 539-548 (2010).
  12. Burns, F., Stack, M., Gray, R., Paterson, C. Inhibition of purified collagenase from alkali-burned rabbit corneas. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 30 (7), 1569-1575 (1989).
  13. Kraus, R. L., et al. Antioxidant properties of minocycline: neuroprotection in an oxidative stress assay and direct radical-scavenging activity. Journal of Neurochemistry. 94 (3), 819-827 (2005).
  14. Yrjänheikki, J., Keinänen, R., Pellikka, M., Hökfelt, T., Koistinaho, J. Tetracyclines inhibit microglial activation and are neuroprotective in global brain ischemia. Proceedings of the National Academy of Sciences. 95 (26), 15769-15774 (1998).
  15. Moura, L. I., Dias, A. M., Carvalho, E., de Sousa, H. C. Recent advances on the development of wound dressings for diabetic foot ulcer treatment-a review. Acta Biomaterialia. 9 (7), 7093-7114 (2013).
  16. Natarajan, J., et al. Nanostructured Lipid Carriers of Pioglitazone Loaded Collagen/Chitosan Composite Scaffold for Diabetic Wound Healing. Advances in Wound Care. 8 (10), 499-513 (2019).
  17. Karri, V. V. S. R., et al. Curcumin loaded chitosan nanoparticles impregnated into collagen-alginate scaffolds for diabetic wound healing. International Journal Of Biological Macromolecules. 93, 1519-1529 (2016).
  18. Hsieh, W. -. C., Chang, C. -. P., Lin, S. -. M. Morphology and characterization of 3D micro-porous structured chitosan scaffolds for tissue engineering. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 57 (2), 250-255 (2007).
  19. Xie, Y., Chen, J., Xiao, A., Liu, L. Antibacterial activity of polyphenols: structure-activity relationship and influence of hyperglycemic condition. Molecules. 22 (1913), 1-11 (2017).
  20. Geerlings, S. E., Brouwer, E. C., Gaastra, W., Verhoef, J., Hoepelman, A. I. Effect of glucose and pH on uropathogenic and non-uropathogenic Escherichia coli: studies with urine from diabetic and non-diabetic individuals. Journal of Medical Microbiology. 48 (6), 535-539 (1999).
  21. Eloff, J. N. A sensitive and quick microplate method to determine the minimal inhibitory concentration of plant extracts for bacteria. Planta Medica. 64 (8), 711-713 (1998).
  22. Reddy, G. K., Enwemeka, C. S. A simplified method for the analysis of hydroxyproline in biological tissues. Clinical Biochemistry. 29 (3), 225-229 (1996).
  23. Charulatha, V., Rajaram, A. Influence of different crosslinking treatments on the physical properties of collagen membranes. Biomaterials. 24 (5), 759-767 (2003).
  24. Rehakova, M., Bakoš, D., Vizarova, K., Soldán, M., Jurícková, M. Properties of collagen and hyaluronic acid composite materials and their modification by chemical crosslinking. Journal of Biomedical Materials Research: An Official Journal of The Society for Biomaterials and The Japanese Society for Biomaterials. 30 (3), 369-372 (1996).
  25. Chang, M. -. Y., et al. Doxycycline enhances survival and self-renewal of human pluripotent stem cells. Stem Cell Reports. 3 (2), 353-364 (2014).
  26. Dovi, J. V., He, L. K., DiPietro, L. A. Accelerated wound closure in neutrophil-depleted mice. Journal of Leukocyte Biology. 73 (4), 448-455 (2003).
  27. Lindeman, J. H., Abdul-Hussien, H., van Bockel, J. H., Wolterbeek, R., Kleemann, R. Clinical Perspective. Circulation. 119 (16), 2209-2216 (2009).
  28. Zhang, C., Gong, W., Liu, H., Guo, Z., Ge, S. Inhibition of matrix metalloproteinase-9 with low-dose doxycycline reduces acute lung injury induced by cardiopulmonary bypass. International Journal Of Clinical And Experimental Medicine. 7 (12), 4975-4982 (2014).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

Biyom hendislikSay 174Diyabetik yaraDoksiksinKollajenChitosanskele

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır