טכניקות ושיטות תרבית תאים למניעת זיהום על ידי פטריות וחיידקים במעבדת המחקר לתרביות תאים

Summary

פרוטוקול זה מציג טכניקות ושיטות חיוניות לתרביות תאים שישמשו במעבדת המחקר לתרביות תאים כדי למנוע זיהום על ידי פטריות וחיידקים. בתוך קטגוריית החיידקים, יושם דגש מיוחד על מניעת זיהום מיקופלסמה.

Abstract

תרבית תאים היא מיומנות עדינה הנחוצה לגידול תאי אדם, בעלי חיים וחרקים, או רקמות אחרות, בסביבה מבוקרת. מטרת הפרוטוקול היא להדגיש את הטכניקות הנכונות המשמשות במעבדת מחקר למניעת זיהום מפטריות וחיידקים. דגש מיוחד מושם על הימנעות מזיהום מיקופלסמה, דאגה מרכזית בחדר תרביות התאים בשל גודלו הקטן ועמידותו לרוב האנטיביוטיקות המשמשות לתרביות תאים. אותן טכניקות מבטיחות צמיחה מתמשכת ושומרות על תאים בריאים. עבור משתמשים חדשים ומנוסים בתרביות תאים כאחד, חשוב לדבוק באופן עקבי בשיטות עבודה מומלצות אלה כדי להפחית את הסיכון לזיהום. פעם בשנה, מעבדות צריכות לבחון שיטות עבודה מומלצות לתרביות תאים ומעקב עם דיון או הכשרה נוספת במידת הצורך. נקיטת פעולה מוקדמת למניעת זיהום מלכתחילה תחסוך זמן וכסף, בהשוואה לניקוי לאחר התרחשות הזיהום. שיטות עבודה מומלצות אוניברסליות שומרות על תרביות תאים בריאות, ובכך מפחיתות את הצורך להפשיר תאים חדשים כל הזמן, לרכוש מדיה יקרה של תרביות תאים, ולהפחית את כמות הטיהור וההשבתה של האינקובטור.

Introduction

לתרבית תאים שימושים רבים במעבדת המחקר. מאז ראשית תרביות התאים בתחילת המאה ה-20, קווי תאים סייעו לקדם את המדע. לקווי תאים יש מספר יתרונות; קווי תאים שונים יכולים לסייע לחוקרים לחקור ביולוגיה של התא, לייצר baculovirus למחקרים נוספים, או לייצר כמויות גדולות של חלבון מעניין, אם לציין כמה¹. שימושים נוספים כוללים חקר צמיחת רקמות, סיוע בקידום פיתוח חיסונים, מחקר טוקסיקולוגי, חקר תפקיד הגנים באורגניזמים בריאים ובמודלים חולים, וייצור קווי תאים היברידיים ^2,3. קווי תאים יכולים גם לאפשר ייצור תרופות³. טכניקות אספטיות נכונות נחוצות בעת עבודה עם קווי תאים; הפרקטיקות והטכניקות המתוארות בכתב יד זה ישימות למעבדות מחקר שבהן מתבצעת עבודת תרבית תאים. הגדרות מעבדה אחרות אינן נדונות.

זיהום הוא לעתים קרובות הדאגה העיקרית בעת ביצוע עבודת תרבית תאים. בהקשר של מאמר זה, זיהום מתייחס בדרך כלל לפטריות וחיידקים. המטרה הכוללת של השיטה המתוארת במאמר זה היא לתאר ביסודיות את שיטות העבודה המומלצות למניעת זיהום. כל חברי המעבדה צריכים לדבוק בפרקטיקות אלה כאשר הם עובדים בחדר תרביות תאים של מעבדת מחקר. מעבדות צריכות להבטיח שכל העובדים הם משתתפים פעילים בשימוש בשיטות עבודה מומלצות אלה למניעת זיהום. הידע של שיטות העבודה והטכניקות הנכונות יסייע להבטיח שתרביות תאים יישארו בנות קיימא, בריאות וללא זיהום. פיתוח טכניקה זו מבוסס על מחקר הספרות, שבע שנות ניסיון בעבודה עם תרביות תאים, והצורך בשיטה שגם עובדים מתחילים וגם מנוסים בתרביות תאים יכולים להתייחס אליה על בסיס שנתי.

יש צורך בטכניקה ברורה וסטנדרטית שכל מעבדות המחקר לתרביות תאים צריכות לעקוב אחריה. רוב הספרות על זיהום תרביות תאים דנה בזיהוי מיקופלסמה, טכניקות אספטיות, מקורות זיהום, חיסול מזהמים ומניעה על ידי שימוש באנטיביוטיקה ובדיקות קבועות 4,5,6,7,8. בעוד שמידע זה מועיל, אין בספרות סרטונים המדגימים את טכניקות תרבית התאים הנכונות שיש לעקוב אחריהן. היתרון של הפרקטיקות המוצגות על פני טכניקות חלופיות הוא התמקדות במניעת זיהום לפני שהוא קורה, ולא באיתור ותיקון טעויות מאוחר יותר. יתר על כן, הדגמה יסודית של טכניקות אספטיות, דיון על מניעת צמיחת פטריות וחיידקים, ומידע לגבי זרימת האוויר בארון הבטיחות הביולוגית הם בעלי ערך עבור עובדי תרביות תאים מתחילים ומנוסים כאחד.

חיידקים ופטריות הם שני סוגי המזהמים הנפוצים ביותר. בתוך קטגוריית החיידקים, מיקופלסמה מהווה דאגה עיקרית בשל גודלה הקטן ויכולתה להתרבות מבלי שיבחינו בה. הם אורגניזמים המשכפלים את עצמם ללא דופן תא קשיחה, המסתמכים על תאים איקריוטים כדי לגדול. יש להם יכולות מטבוליות מופחתות והם יכולים להתרבות מאוד תוך שהם נשארים בלתי מזוהים בבדיקה חזותית שגרתית של תרביות תאים וניתוח מיקרוסקופי רגיל, אם כי מיקרוסקופ אלקטרונים שידור יכול לזהות מיקופלסמה ^9,10. יתר על כן, הם יכולים לעבור דרך מסננים מיקרוביולוגיים¹⁰. מדיום תרבית תאים מספק מיקופלסמה עם חומרים מזינים, אם כי למרבה הצער תוספת מדיה עם אנטיביוטיקה אינה משפיעה על מיקופלסמה¹⁰. יש לציין כי, באופן כללי, אין צורך להשלים את התקשורת עם אנטיביוטיקה; טכניקות נכונות צריכות להספיק כדי לשמור על זיהום במפרץ. זיהום במיקופלסמה אינו מוביל למוות תאי מיידי, אך הוא מדאיג את החוקרים מכיוון שהוא משפיע על שחזור הנתונים ואיכותם.

כל אנשי המעבדה צריכים להקפיד על שיטות תרבית תאים טובות. תרביות יש לבדוק מיקופלסמה לאחר שנרכשו לאחרונה, בזמן שהן גדלות כעת, לפני שימור בהקפאה, וכאשר הן מופשרות מחנקן נוזלי ^2,10. בדיקות שונות זמינות בשוק באמצעות תגובת שרשרת פולימראז (PCR), בדיקת אימונוסורבנט מקושרת אנזים (ELISA), או immunostaining. ³ הספרות מצביעה על כך ש"מבודדים אנושיים מייצגים אחוז גדול ממזהמי המיקופלסמה הנמצאים בתרביות תאים"⁵. למרות שתוארו יותר מ-200 מיני מיקופלסמה, כשישה מהם אחראים לרוב הזיהומים. ששת המינים הללו הם M. arginini, M. fermentans, M. hominis, M. hyorhinis, M. orale ו-Acholeplasma laidlawii¹⁰. כמו עם סוגים אחרים של זיהום, אוויר ואירוסולים מביאים אותם לתוך תרביות תאים⁵. הדבר מהדהד במאמרים אחרים, שכן "המפעיל האנושי הוא בעל הפוטנציאל לסכנה הגדולה ביותר במעבדה"⁷. למרות שזה נעשה באמצעות טעות אנוש, הסיכון ניתן לבטל אם הליך סטנדרטי הוא אחריו. שפיכה מכוח אדם אינה מוגבלת רק לזיהום מיקופלסמה; תרביות תאים במעבדה אחת נגועות בדרך כלל באותו מין מיקופלסמה, דבר המצביע על כך שהזיהום מתפשט מבקבוק אחד למשנהו עקב טכניקות לא נכונות של תרביות תאים¹⁰.

מניעת זיהום צולב היא גם סיבה נוספת מדוע יש לעקוב אחר טכניקות תרבית תאים נכונות. יצוין כי לפחות 15%-18% מקווי התאים ברחבי העולם עשויים להיות מזוהמים צולבים או מזוהים באופן שגוי^11,12. בנוסף לבדיקת קווי תאים לזיהום מיקופלסמה, יש לבדוק אותם גם לזיהום צולב¹⁰. עבור קווי תאים אנושיים, אימות קו התא באמצעות טכניקה זולה מבוססת DNA הנקראת פרופיל חזרה טנדם קצר (STR) הוא תקן הייחוס הבינלאומי הנוכחי, מכיוון שזו דרך קלה לאשר את זהות קו התא 2,10,13,14. STR יכול לזהות קווי תאים עם תווית שגויה או צולבת, אך הוא אינו יכול לזהות מקור רקמה שגוי^10,13,14. תוקפם של נתוני מחקר עלול להיפגע אם קווי תאים מסומנים באופן שגוי, מזוהים באופן שגוי או מזוהמים¹³. בדומה לסוגים אחרים של זיהום, זיהום צולב יכול להתרחש עקב טכניקה לקויה הגורמת להתפשטות אירוסולים, מגע מוטעה המוביל לסוג תא שגוי להיכנס לצלוחית, או שימוש באותו בקבוק מדיה וריאגנטים עם קווי תאים שונים¹⁰. אין לשתף בקבוקי מדיה; שיתוף בקבוק אחד של מדיה בין שני קווי תאים שונים יכול לאפשר לאוכלוסיות תאים אלה להיות מעורבבות, מה שמוביל את סוג התא הגדל מהר יותר להשתלט לחלוטין על הצלוחית. החלפה זו אינה מורגשת ומובילה לתיוג שגוי ולזיהוי שגוי². קו תא יכול גם להיות מוטעה אחר אם תרביות מתבלבלות במהלך טיפול או תיוג¹⁰. יש להקדיש תשומת לב רבה לשמירה על ריאגנטים, מדיה וצלוחיות בנפרד זה מזה. לכל חבר מעבדה צריכים להיות בקבוקי מדיה משלו; אין לשתף בין חברי המעבדה. את קווי הסלולר עצמם יש לרכוש מבנק סלולרי מוסמך וספק. מעבדות לא צריכות לחלוק תאים. מחקרים מראים כי למרות שבדיקות STR ומיקופלסמה נמצאות בשימוש קבוע, מחקרים רבים בספרות כבר השתמשו בקווי תאים מזוהים או מזוהמים¹⁵. סינון המחקר כדי למצוא את המאמרים הבעייתיים הללו וליידע את הקוראים בדיעבד בעניין זה הוא מסורבל. מניעה היא הדרך הטובה ביותר להבטיח בעיה זו לא מתרחשת מלכתחילה.

הפעולה הפשוטה של ריסוס פריטים עם 70% EtOH יכולה להרוג אורגניזמים; 70% EtOH פועל על ידי דנטורציה של חלבונים והמסת שומנים באורגניזמים המזהמים הנפוצים ביותר, כולל חיידקים ופטריות¹⁶. מחקרים הראו כי 70% הוא הריכוז היעיל ביותר; חלבונים פני השטח אינם נקרשים במהירות עם 70% EtOH כך שהם יכולים להיכנס לתא, בעוד המים שהוא מכיל נחוצים לתהליך דנטורציה של חלבונים. בשל הפרש הריכוזים של מים ואלכוהול משני צדי דופן התא, 70% EtOH נכנס לתא כדי לנטרל חלבונים אנזימטיים ומבניים. אם צמיחת עובש נצפתה בצלוחיות, יש לטהר את האינקובטור כולו על ידי ריסוס תחילה עם 70% EtOH וניגובו יבש, ולאחר מכן דגירה של 16 שעות לילה ב 60 ° C¹⁷. זה הורג את רוב העובש וכל חיידקים.

היתרון העיקרי של שיטות מניעה על פני טכניקות חלופיות של חיסול זיהום לאחר התרחשותו הוא שעל ידי מניעת זיהום בשלב מוקדם, עובדי מעבדה יכולים להיות בטוחים שתרביות התאים שלהם בריאות ולא יהיו עלויות גבוהות הקשורות לטיהור אינקובטורים או השלכת תרביות תאים. סילוק מזהמים מיקופלסמה לאחר, למשל, אינו יעיל⁷. אם ניקח את הזמן בשלב מוקדם כדי להבטיח שאנשי המעבדה מאומנים כראוי, חדר תרביות התאים יהיה עצמאי, ונעשה שימוש בהליך סטנדרטי יחסוך זמן וכסף.

Protocol

1. הכנות

1. כללי
   1. יש ללבוש מעיל מעבדה נקי המיועד ללבישה רק בחדר תרביות התאים ולא בחלקים אחרים של המעבדה.
      הערה: מעיל המעבדה אינו חייב להיות סטרילי.
   2. לבשו כפפות חדשות שלא נגעו במשטחים אחרים. ודאו שהכפפות מתאימות היטב. כפפות ללא ניטריל ללא אבקה הן הטובות ביותר.
      הערה: הכפפות אינן צריכות להיות סטריליות.
   3. כדי להתכונן לעבודה, רססו את הכפפות, שרוולי מעיל המעבדה ופנים ארון הבטיחות הביולוגי ב-70% EtOH. נגבו את משטח העבודה ואת לוח הזכוכית לייבוש במגבת נייר שאינה מותירה סיבים.
      הערה: שימוש ב-70% EtOH הורג חיידקים ביעילות הגבוהה ביותר¹⁶. מגבת הנייר לא צריכה להיות סטרילית.
   4. שמרו אמבטיות מים בתוך חדר תרביות התאים והשתמשו בהן רק לחימום מצעי תרבית או הפשרת תאים. יש לנקז ולשטוף את אמבטיות המים אחת לשבוע, בהתאם להוראות היצרן לניקוי.
2. בתוך ארון הבטיחות הביולוגי
   1. להגביל את מספר הפריטים המובאים לארון. אין להפריע לזרימת האוויר בתוך ארון הבטיחות הביולוגי על ידי חסימת הגריל הקדמי או האחורי.
      הערה: ראו איור 1 לקבלת הסבר על האופן שבו האוויר זורם בתוך ארון.
   2. רססו את כל הפריטים שהונחו בתוך הארון ב-70% EtOH ונגבו אותם לייבוש. התחילו בריסוס החלק העליון של בקבוק המדיה ועבדו כלפי מטה. באופן דומה, עם מגבת נייר נקייה, לנגב אותו יבש, בהדרגה עובד את הדרך לתחתית. אל תחזור למעלה לכיוון הכובע.
   3. אם הארון גדול מספיק כדי להכיל פיפטות סרולוגיות, ניתן למקם אותן בפנים, אחרת ניתן לאחסן אותן בכלי קיבול המותקן בצד החיצוני של הארון. בדוק את כל צד של פיפטה עטופה עבור חורים, קרעים או נקבים באריזה לפני השימוש. אין לקרוע את העטיפה. במקום זאת, מקלפים בעדינות את קצות העטיפה, מכניסים את הפיפטה הסרולוגית לעזר פיפטה, ומסירים את העטיפה בתנועה נוזלית אחת.
   4. אין לרחף מעל בקבוקים פתוחים או צלוחיות; הושיטו יד מעל בקבוקים או צלוחיות פתוחים, או פתחו פריטים מעל צמרות של פריטים שכבר נפתחו בארון הבטיחות הביולוגי.
      הערה: זרימת האוויר בתוך הארון דוחפת כלפי מטה על משטח העבודה, כך שכל זיהום הקיים בשרוול, למשל, עלול להיכנס לתרביות התא.
   5. אין לשפוך נוזלים. במקום זאת, הוסיפו אותם באמצעות פיפטה סרולוגית. לאחר השלמת המדיה, מערבבים היטב את התכולה ומתחילים את הבקבוק. כמו כן, הקפד לכלול תווית עבור מה המדיה הושלמה עם.

2. עבודה עם קווי תאים דבקים

1. אם יש צורך בבקבוק פלסטיק, רססו את כל השקית והניחו אותה בתוך הארון.
2. השתמש פיפטות זכוכית autoclaved או פיפטות פלסטיק סטרילי חד פעמי כדי לשאוף את התקשורת או פתרונות כביסה. הסר בזהירות את מכסה המתכת ממיכל האחסון. בודדו פיפטה אחת מזכוכית על ידי ניעור עדין של המיכל בזווית. כאשר מגיעים למיכל, הימנעו מלגעת בפיטות אחרות.
   הערה: טפל בפיפטה שנבחרה מקצה אחד בלבד.
3. החלף במהירות את הפקקים על הבקבוקים בהקדם האפשרי. הניחו את הכובעים על משטח העבודה הפוכים כך שהחישוק לא ייגע במשטח העבודה. אין לתפוס את הכובע מלמעלה או למטה; במקום זאת, געו בכובעים מהצדדים.
4. בעת שאיפת נוזלים, השתמשו בבקבוק מלכודת ואקום הממוקם מחוץ לארון במיכל משני על הרצפה.
   הערה: אין לזרוק פסולת נוזלית לשקיות פסולת מסוכנות ביולוגית מכיוון שהשקיות ידלפו. פסולת תיווצר תוך כדי עבודה בתוך הארון. הזזת ידיים פנימה והחוצה מהארון לעתים קרובות מדי תפריע לזרימת האוויר. השאירו פסולת בתוך הארון באופן זמני. הניחו אותו בצד כדי שלא יפריע לעבודה.
5. רססו בנדיבות את הכפפות ב-70% EtOH בכל פעם שהן מתייבשות. שפשפו את הידיים זו בזו כדי שהכפפות לא יטפטפו רטובות.
6. אם פיפטה סרולוגית נוגעת בטעות במשהו בארון, אל תהססו לזרוק אותה. התחילו מחדש עם פיפטה סרולוגית נקייה במקום להשתמש בכזו שעלולה להיות מזוהמת.

4. בדיקה ואחסון של תאים

1. לפני הצבת התאים באינקובטור, בדקו כיצד הם נראים מתחת למיקרוסקופ. אם התאים הושעו ביסודיות, יש לראות תאים בודדים.
2. אין לדבר, להתעטש, להשתעל או לנשום בכבדות לתוך האינקובטורים. פתחו וסגרו במהירות את דלתות האינקובטור. השארת דלתות פתוחות למשך זמן רב מהנדרש עלולה לאפשר למזהמים הנמצאים באוויר להיכנס לאינקובטורים.
   הערה: חבישת מסכה בזמן עבודה בחדר תרביות תאים יכולה לעזור מכיוון שמיקופלסמה עשויה להיות נוכחת בפה האנושי. הימנעו משימוש בטלפונים סלולריים בחדר תרבית התא, שכן דיבור אינו מומלץ.
3. ודאו שהפקקים של כל הבקבוקים סגורים היטב לפני שאתם מוציאים את הבקבוקים מהארון.
4. אחסנו את תרבית התאים בחושך בטמפרטורה של 4°C כאשר אינה בשימוש מכיוון שהיא רגישה לאור.
5. רססו שוב את פנים הארון ב-70% EtOH לאחר סיום עבודת תרבית התאים ונגבו את המשטח יבש במגבת נייר. רוקנו את שקיות האשפה המסוכנות ביולוגית. חזור על תהליך זה והחלף את הכפפות בעת מעבר לקו תאים אחר.

5. עבודה עם קווי תאי השעיה

1. עבור תאי תרחיף הגדלים בצלוחיות זכוכית, יש לוודא שהכפפות מרוססות היטב ב-70% EtOH, ואז נוגעים ברדיד האלומיניום עם הכפפות הרטובות ורססו רק את תחתית הבקבוק לפני הכנסתו לארון.
2. בעת לקיחת דגימה לספירת תאים, הסר רק צינור אחד של 1.5 מ"ל מהמיכל שלו. אין לגעת בצינורות אחרים. הניחו את המכסה הפוך על משטח העבודה. אין לגעת בשפה הפנימית. טפל בו בזהירות מהצדדים והחלף אותו בסיום.
3. הסר בזהירות את חתיכת רדיד אלומיניום מקופל כפול המכסה את כל הצוואר של הצלוחית. טפלו בבקבוק הזכוכית מלמטה בלבד – אל תיגעו בו מהצוואר – ברגע שנייר הכסף כבוי. השתמש פיפטה סרולוגית 1 מ"ל כדי לקחת דגימה לספירת תאים.
4. אל תתנו לתקשורת לטפטף בצד הצלוחיות; אם כן, רססו מגבת נייר עם 70% EtOH ונקו אותה מיד.
5. יש להדק את הפקקים ואת רדיד האלומיניום לפני הסרת בקבוקים או צלוחיות מארונות הבטיחות הביולוגיים.

6. דגירה של תאים

1. השתמש באינקובטורים נפרדים עבור סוגי תאים שונים כדי למנוע זיהום צולב של סוגי התאים השונים.

7. איסוף פסולת נוזלית

1. אספו פסולת נוזלית בבקבוק מלכודת ואקום הממוקם מחוץ לארון על הרצפה במיכל משני שכותרתו 'פסולת'.
   הערה: הצינור מחובר למסנן ספיגת חלקיקים (HEPA) בעל יעילות גבוהה, המוחלף על בסיס חודשי.

8. ניקוי

1. הסר את שקית הפסולת המסוכנת ביולוגית ושטוף את צלוחיות הזכוכית בהקדם האפשרי. הקפידו על פרוטוקול שטיפת זכוכית ליד הכיור. ראו קובץ משלים 1 לפרוטוקול הכביסה.
2. בצעו אוטוקלאבל של כלי הזכוכית של תרבית התאים במקום לשלוח אותם למתקן שטיפת זכוכית. יש להפריד אותו מכלי זכוכית באזור המרכזי של המעבדה.
   הערה: תאי SF-9 משאירים שפה של תאים מתים בצד הצלוחיות אם הזכוכית אינה משופשפת היטב. ראה קובץ משלים 1 עבור פרוטוקול autoclave.

9. ארגון

1. ארגן את חדר תרביות התאים כך שכל האספקה תהיה ממוקמת באזור אחד, ובכך למזער את הצורך של חברי המעבדה לעזוב את החדר בחיפוש אחר אספקה.
2. תייגו את כל בקבוקי הפלסטיק המשמשים לקצירת תאים ונעשה בהם שימוש חוזר בתרבית תאים לאחר מכן כ"לשימוש בתרבית תאים בלבד". השתמשו בבקבוקי תרבית התאים הייעודיים לסוג תא ספציפי אחד. אחסנו את הבקבוקים בחדר תרביות התאים לגישה נוחה.

10. זיהוי זיהום חיידקים, פטריות ומיקופלסמה

הערה: אי ביצוע זרימת העבודה לעיל עלול להוביל לזיהום חיידקי, פטריות ומיקופלסמה.

1. תמיד לפני תחילת העבודה, לצפות צלוחיות עבור עכירות כבדה, צמיחה נוספת בצורה של כדורים מטושטשים, הצטברות צפופה של תאים בצד, כל אלה הם אינדיקטורים של זיהום.
   הערה: עין מנוסה יכולה להבחין בין עכירות הנגרמת על ידי זיהום מיקרוביאלי לעומת התאים בפועל. בעוד התאים גורמים למדיה השקופה בדרך כלל להיראות עכורה, זיהום חיידקי גורם לעכירות כבדה בצבע לבן.
   1. זהו חזותית זיהום עובש על-ידי ציון המראה של כדורים עגולים ומטושטשים שצפים במדיה (ראו איור 2).
   2. זהו חזותית זיהום חיידקי אם המדיה עכורה, לבנה או סוערת (ראו איור 2).
   3. זהה זיהום מיקופלסמה על ידי ביצוע בדיקת מיקופלסמה חודשית. בדיקה אחת מבוססת PCR מורה למשתמשים לקחת דגימה של 1.5 מ"ל של תאים, לבצע ספירת תאים באמצעות 10 μL, לדלל ל 0.08 x 10⁶ תאים / מ"ל, לסובב את התאים, lyse התאים באמצעות המאגר הכלול בערכה, ולהסתובב למטה בפעם האחרונה. הסופרנאטנט מודגר עם פריימרים המגבירים מגוון מיני מיקופלסמה. הפעל ג'ל DNA כדי לדמיין את הלהקות. המשמעות של היעדר פסים היא שמיקופלסמה אינה מזוהה.
      הערה: מזהם עיקרי זה יכול להימצא בפה האדם. מומלץ לבדוק זיהום מיקופלסמה בתאים לאחר הפשרתם ולפני השימוש בהם לניסויים. לאחר מכן, לפקח על התאים עבור זיהום mycoplasma פעם בחודש. חברות רבות מציעות ערכות בדיקת מיקופלסמה. בחר אחד מתאים.

תוצאות

אם לא מקפידים על הטכניקות והפרקטיקות הנכונות של תרביות תאים המתוארות במאמר זה, עלול להתרחש זיהום על ידי פטריות וחיידקים במעבדת תרביות תאי המחקר. איור 2 מראה צלוחיות שמכילות זיהום גם בתרביות המתרחפות וגם בתרביות הדבקות.

כאשר לא עוקבים אחר טכניקות אספטיות, זי?...

Discussion

בעוד זיהום הוא אחד החששות העיקריים בעת ביצוע עבודת תרבית תאים, הפרקטיקות והטכניקות המתוארות בכתב יד זה יסייעו להפחית את הסיכונים. השלבים הקריטיים כוללים לבישת מעיל מעבדה נקי, המשמש רק בחדר תרביות התא, שימוש בכפפות נקיות ונטולות אבקה המרוססות ב-70% EtOH לעתים קרובות ומוחלפות בעת מעבר בין קווי ...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
DPBS	Gibco	14-190-144
DMEM F-12 Media	ATCC	30-2006
Glass Baffled Flask	Pyrex	09-552-40
Glass Pipettes	Fisher	13-678-6B
Pipette Aid	Drummond	13-681-15A
Serological Pipette	Corning	07-200-573
T75 flask	Corning	07-202-004
Trypsin	Gibco	25-300-054
*Items may vary because this video is about general cell culture techniques