1. התקנה והכנת חומרים

1. להשיג תמצית שומנים הכוללת (TLE) באמצעות שיטת מיצוי ממס (Sonication, Soxhlet, או מיצוי ממס מואץ (ASE)).
2. הכן פתרון של 2 N KOH ב 5% H₂O במתנול.
   1. KOH ומתנול ניתן לרכוש מקמעונאים כימיים. כימיקלים אלה צריכים להיות טהורים וללא פחמימנים.
      1. המסה הטוחנת של KOH היא ~ 56 אמו מניב 1 מול של OH^- עבור כל מול של KOH. לכן, כדי להשיג ריכוז 2 N, להמיס 112 גרם של KOH ב 0.95 ליטר של מים טהורים 0.05 L של מתנול.
      2. שים לב כי פירוק KOH במים הוא אקסותרמי ויוצר כמות גדולה של חום. יש להקפיד להוסיף את כדורי KOH למים לאט כדי למנוע תגובה אלימה.
   2. ממיסים 112 גרם כדורי KOH ל-0.95 ליטר של מים טהורים על צלחת ערבוב אוטומטית.
   3. הוסיפו 0.05 ליטר של מתנול לאחר שכל KOH מומס כדי לסייע בפירוק הסמנים הביולוגיים האורגניים לתמיסה מימית.
3. הכן פתרון של 6 N חומצה הידרוכלורית (HCl) ב H₂O.
   1. HCl ניתן לרכוש מקמעונאים כימיים. כימיקל זה צריך להיות טהור וללא פחמימנים.
   2. HCl בדרך כלל מגיע מרוכז כמו 13 N. לכן, תערובת 1:1 של HCl ומים טהורים מייצרת תערובת של 6.5 N של HCl, אשר קרוב מספיק ל 6 N למטרות ניסוי זה.
      1. הקפד להוסיף את HCl למים ולא להיפך, כמו הוספת מים HCl מרוכז הוא אקסותרמי ומייצר חום. הדבר עלול לגרום HCl להתיז.
   3. בעדינות ובאיטיות לשפוך 100 מל HCl לתוך המכילה 100 מל מים טהורים, מערבולת את התערובת בין תוספות של HCl.
4. הכן פתרון של 5% NaCl (מלח שולחן) ב H₂O.
   1. NaCl ניתן לרכוש מקמעונאים כימיים. כימיקל זה צריך להיות טהור וללא פחמימנים.
   2. חשב ושקל את מסת המלח הדרושה כדי להפוך ~ 1 ליטר של 5% פתרון (w / w). 1 ליטר מים שוקל ~ 1 ק"ג או 1,000 גרם. לכן, 50 גרם של NaCl מומס לתוך 950 מ"ל נותן פתרון 5% (50 גרם + 950 גרם = 1,000 גרם; 50 גרם / 1,000 גרם = 0.05 או 5%).
   3. מוסיפים בעדינות 50 גרם של NaCl למים טהורים על צלחת ערבוב אוטומטית וממתינים שהוא יתמוסס.
5. להשיג את החומרים הבאים: 2 נקיים ובהבוים (550 °C (550 °C עבור 6 שעות) 40 מ"ל בקבוקוני זכוכית בורוסיליקט עם מכסה מצופה PTFE; תנור חימום או בלוקי חימום; נשרף (550 °C (6 שעות) צינורות זכוכית בורוסיליקט ונורות; סרט pH (טווח חומצי); Hexane (hexane ניתן לרכוש מקמעונאים כימיים. כימיקל זה צריך להיות אופטימה כיתה או שווה ערך).

2. שיטות

1. התחל עם TLE מיובש (המכיל אסטרים) באחד בקבוקוני זכוכית בורוסיליקט 40 מ"ל.
2. הוסף כ 10 מ"ל של 2 N KOH ל- TLE וכובע.
3. מחממים בתנור או על בלוק חימום ל-60 מעלות צלזיוס למשך 2.5 שעות כדי לבקע את קשר אסתר(איור 3).
4. הסר את הדגימה מהחום ולאפשר לו להתקרר לטמפרטורת החדר.
5. הוסף כ-10 מ"ל מפתרון NaCl של 5% ל-TLE (איור 3). זה עוזר לשמור על הממשק בין השלב מימי ואורגני (להתווסף) מקצף. כובע ולנער בקצרה.
6. הוסיפו 6 N HCl ל-TLE המלוח עד להגעה ל-pH 2 כדי ליצור פרוטונים של^{ה-O -} וליצור את המוצר הסופי, חומצה קרבוקסילית יציבה (איור 3;השתמשו בנייר pH לבדיקה). אם TLE היה צבוע, ייתכן שיש שינוי בצבע בקנה אחד עם pH 2.
7. הוסף כ 20 מ"ל של hexane לתמיסה חומצית, אשר כעת ללא אסתר. מכסים ומנערים במרץ במשך 5 s כדי לחלץ תרכובות אורגניות מהמים.
8. אפשר להגדיר עד שלבים מימיים ואורגניים נפרדים לחלוטין. מלחים, יונים, מים ו- HCl לא נפרע נשארים בשלב מימי. תרכובות אורגניות נמצאות כעת בהקסאן.
9. הסר כ -75% מהקסאן supernatant באמצעות pipette ולחלק לתוך בקבוקון זכוכית בורוסיליקט 40 מ"ל האחרים.
10. חזור על 2.7 - 2.9 פעמיים, הוספת כ 10 מ"ל של hexane בכל פעם.
11. יש להשליך שאריות תערובת מימית במיכל פסולת תקין.
12. תייג את ה- Vial המכיל הקסאן ואורגני ללא אסתר "TLE - saponified.