1. Setup und Vorbereitung der Materialien

1. Erhalten Sie eine totale Lipid Extrakt (TLE) Lösemittelextraktion Verfahren (Ultraschall, Soxhlet oder beschleunigte Lösungsmittel Extraktion (ASE)).
2. Bereiten Sie eine Lösung von 2 N KOH in 5 % H₂O in Methanol.
   1. KOH und Methanol können chemische Fachhandel erworben werden. Diese Chemikalien sollte rein und frei von Kohlenwasserstoffen.
      1. Die molare Masse von KOH ist ~ 56 amu 1 Mol Oh^– für jedes Mol KOH nachgeben. Also, um eine 2 N-Konzentration zu erreichen, lösen Sie 112 g KOH in 0,95 L reines Wasser und 0,05 L Methanol auf.
      2. Beachten Sie, dass die Auflösung der KOH in Wasser exotherm ist und eine große Menge an Wärme schafft. Achten Sie darauf, die KOH-Pellets hinzufügen, das Wasser langsam um eine heftige Reaktion zu vermeiden.
   2. 112 g KOH Pellets in 0,95 L reines Wasser auf der Platte eine automatische Rühren auflösen.
   3. Fügen Sie 0,05 L Methanol, sobald alle die KOH wird aufgelöst, um die Auflösung der organischen Biomarker in der wässrigen Lösung zu unterstützen.
3. Bereiten Sie eine Lösung von 6 N Salzsäure (HCl) in H₂O.
   1. HCl kann chemischen Fachhandel erworben werden. Diese Chemikalie sollte rein und frei von Kohlenwasserstoffen.
   2. HCl kommt in der Regel konzentriert als 13 N. So erzeugt eine 1:1 Mischung von HCl und reines Wasser eine 6,5 N Mischung von HCl, das ist nahe genug, um 6 N für die Zwecke dieses Experiments.
      1. Achten Sie darauf, das Wasser der HCl hinzu und nicht anders herum, als Zugabe von Wasser zu konzentrierter HCl ist exotherm und erzeugt Wärme. Dadurch kann HCl zu spritzen.
   3. Gießen Sie langsam und vorsichtig 100 mL HCl in ein Becherglas mit 100 mL reines Wasser, wirbeln die Mischung zwischen Ergänzungen von HCl.
4. Bereiten Sie eine Lösung von 5 % NaCl (Kochsalz) in H₂O.
   1. NaCl kann chemische Fachhandel erworben werden. Diese Chemikalie sollte rein und frei von Kohlenwasserstoffen.
   2. Berechnen Sie und wiegen Sie die Masse des Salzes ~ 1 L 5 % Lösung (w/w) machen musste. 1 L Wasser wiegt ~ 1 kg oder 1000 g. 50 g NaCl in 950 mL aufgelöst gibt somit eine 5 % ige Lösung (50 g + 950 g = 1000 g, 50 g / 1000 g = 0,05 oder 5 %).
   3. Sanft Reinwasser auf eine automatische rühren Platte 50 g NaCl hinzu und warten Sie, bis es aufzulösen.
5. Erhalten Sie die folgenden Materialien: 2 sauber und verbrannt (550 ° c für 6 h) 40 mL Borosilikatglas Fläschchen mit PTFE-Gefütterte Mütze; einem wärmenden Ofen oder Heizung Blöcke; verbrannt (550 ° c für 6 h) Borosilikatglas Pipetten und Birnen; pH-Band (saurer Bereich); Hexan (Hexan chemische Fachhandel erworben werden. Diese Chemikalie sollte Optima Grade oder gleichwertig sein).

(2) Methoden

1. Beginnen Sie mit den getrockneten TLE (mit Ester) in einem der 40 mL-Borosilikat-Glas-Fläschchen.
2. Fügen Sie ca. 10 mL 2 N KOH TLE und Cap.
3. Hitze im Ofen oder auf einem Heizblock zu 60 ˚C für 2,5 h, Spalten die Esterbindung (Abbildung 3).
4. Die Probe vom Herd nehmen und auf Zimmertemperatur abkühlen lassen.
5. Die TLE (Abbildung 3) ca. 10 mL 5 % NaCl-Lösung hinzufügen. Dies hilft, die Schnittstelle zwischen der wässrige und organische Phase (um hinzugefügt werden) von Schäumen. Deckel und schütteln Sie kurz.
6. Fügen Sie 6 N HCl zu den gesalzenen TLE tropfenweise hinzu, bis pH 2 O^– zum Protonate erreicht ist und bilden Sie das Endprodukt eine stabile Carbonsäure (Abbildung 3; Verwendung pH-Papier zum Testen) zu. Wenn die TLE gefärbt wurde, möglicherweise eine Verschiebung in der Farbe, die zeitgleich mit pH 2.
7. Die gesäuerte Lösung, die jetzt frei von Ester ist fügen Sie etwa 20 mL Hexan hinzu. Verschließen und kräftig schütteln, für 5 s, organische Verbindungen aus dem Wasser zu extrahieren.
8. Dürfen Sie bis wässrige und organische Phasen völlig getrennt einstellen. Salze, Ionen, Wasser und nicht umgesetztes HCl bleiben in der wässrigen Phase. Organische Verbindungen sind jetzt in das Hexan.
9. Ungefähr 75 % von den Überstand Hexan mit einer Pipette zu entfernen und in die anderen 40 mL Borosilikatglas Durchstechflasche zu verzichten.
10. 2.7-2.9 zweimal, Hinzufügen von etwa 10 mL Hexan jedes Mal zu wiederholen.
11. Entsorgen Sie übrig gebliebene wässrige Mischung in einem richtigen Abfallbehälter.
12. Beschriften Sie das Fläschchen mit Hexan und Ester-freie Organics "TLE - verseift."