1. configuración y preparación de materiales

1. Obtener un total de lípidos extracto (TLE) utilizando un método de extracción por solvente (sonicación, Soxhlet o extracción acelerada de disolvente (ASE)).
2. Preparar una solución de KOH 2 N 5% H₂O metanol.
   1. KOH y metanol pueden adquirirse en tiendas de productos químicos. Estos productos químicos deben ser puro y libre de hidrocarburos.
      1. La masa molar de KOH es 56 uma produciendo 1 mol de OH^– por cada mol de KOH. Por lo tanto, para lograr una concentración de N 2, disolver 112 g de KOH en 0,95 L de agua pura y 0,05 L de metanol.
      2. Tenga en cuenta que la disolución de KOH en agua es exotérmica y genera una gran cantidad de calor. Tenga cuidado de agregar a los pellets KOH en el agua lentamente para evitar una reacción violenta.
   2. Se disuelven 112 g de pellets KOH en 0,95 litros de agua pura en una placa de agitación automática.
   3. Añadir 0,05 L de metanol una vez todo el KOH se disuelve para ayudar en la disolución de los biomarcadores orgánicos en la solución acuosa.
3. Preparar una solución de ácido de clorhídrico 6 N (HCl) en H₂O.
   1. Ácido clorhídrico puede adquirirse en tiendas de productos químicos. Este producto químico debe ser puro y libre de hidrocarburos.
   2. Viene generalmente ácido clorhídrico concentrado como 13 N. Así, una mezcla 1:1 de HCl y agua pura produce una mezcla de N 6.5 de HCl, que es cerca de 6 N para los propósitos de este experimento.
      1. Asegúrese de agregar el ácido clorhídrico al agua y no al revés, como añadir agua al ácido clorhídrico concentrado es exotérmico y genera calor. Esto puede causar ácido clorhídrico para chapotear.
   3. Suavemente y lentamente vierta 100 mL de ácido clorhídrico en un vaso de precipitados con 100 mL agua pura, la mezcla entre las adiciones de ácido clorhídrico se arremolinan.
4. Preparar una solución de 5% NaCl (sal de mesa) en H₂O.
   1. NaCl se puede comprar en tiendas de productos químicos. Este producto químico debe ser puro y libre de hidrocarburos.
   2. Calcular y pesar la masa de sal para hacer ~ 1 L de solución al 5% (w/w). 1 L de agua pesa ~ 1 kg o 1.000 g. Así, 50 g de NaCl disuelto en 950 mL da una solución al 5% (50 g + 950 g = 1.000 g, 1.000 g/50 g = 0.05 o 5%).
   3. Añadir 50 g de NaCl en agua pura en una placa de agitación automática y esperar a que se disuelva.
5. Obtener los siguientes materiales: 2 limpio y quemado (550 ° c por 6 h) viales de vidrio borosilicato de 40 mL con tapa forrada de PTFE; un horno de calentamiento o calentamiento bloques; pipetas de vidrio de borosilicato de combustión (550 ° c por 6 h) y bulbos; cinta de pH (rango ácido); Hexano (hexano puede adquirirse en tiendas de productos químicos. Este producto químico debe Optima grado o equivalente).

2. métodos

1. Comience con el TLE seco (que contienen ésteres) en uno de los viales de borosilicato vidrio 40 mL.
2. Añadir aproximadamente 10 mL de KOH N 2 a la TLE y la tapa.
3. Calentar en el horno o en un bloque de calentamiento a 60 ° c por 2,5 h para hender el enlace éster (figura 3).
4. Retirar la muestra del fuego y deje que se enfríe a temperatura ambiente.
5. Añadir aproximadamente 10 mL de la solución de NaCl al 5% a la TLE (figura 3). Esto ayuda a mantener la interfase entre la fase acuosa y orgánica (a) de formación de espuma. La tapa y agítela brevemente.
6. Añadir 6 N HCl a la TLE salada gota a gota hasta alcanzar pH 2 al protonate O^– y formar el producto final, un ácido carboxílico estable (figura 3; uso papel de pH para probar). Si el TLE fue coloreado, puede haber un cambio de color coincidiendo con pH 2.
7. Añadir aproximadamente 20 mL de hexano a la solución acidificada, que es ahora libre de ester. La tapa y agitar vigorosamente durante 5 s para extraer compuestos orgánicos del agua.
8. Permite establecer hasta las fases acuosas y orgánicas completamente separada. Sales, iones, agua y HCl permanecen en la fase acuosa. Los compuestos orgánicos son ahora en el hexano.
9. Eliminar aproximadamente el 75% del hexano sobrenadante con una pipeta y dispensar en el otro frasco de vidrio de borosilicato de 40 mL.
10. Repetición de 2.7-2.9 dos veces, agregar aproximadamente 10 mL de hexano cada vez.
11. Deseche la mezcla acuosa sobrante en un recipiente de residuos adecuado.
12. Etiqueta el frasco que contiene hexane y materia orgánica libre de ester «TLE - saponificado.»