ספקטרוסקופיה אולטרה סגולה (UV-Vis)

Overview

מקור: המעבדה של ד"ר .B ג'יל וטון - אוניברסיטת וירג'יניה

ספקטרוסקופיה אולטרה סגולה (UV-Vis) היא אחת הטכניקות האנליטיות הפופולריות ביותר מכיוון שהיא רב-תכליתית מאוד ומסוגלת לזהות כמעט כל מולקולה. עם ספקטרוסקופיית UV-Vis, אור UV-Vis מועבר דרך מדגם והעברת האור על ידי מדגם נמדדת. מהמשדר (T), ניתן לחשב את הספיגה כ- A=-log (T). ספקטרום ספיגה מתקבל המציג את הספיגה של תרכובת אורכי גל שונים. כמות הספיגה בכל אורך גל נובעת מהמבנה הכימי של המולקולה.

UV-Vis יכול לשמש באופן איכותי, לזהות קבוצות פונקציונליות או לאשר את זהותו של תרכובת על ידי התאמת ספקטרום הספיגה. ניתן להשתמש בו גם באופן כמותי, שכן ריכוז הניתוח קשור לספיגה באמצעות חוק הבירה. ספקטרוסקופיית UV-Vis משמשת לכימות כמות הדנ"א או החלבון במדגם, לניתוח מים וכגלאי לסוגים רבים של כרומטוגרפיה. קינטיקה של תגובות כימיות נמדדת גם עם ספקטרוסקופיית UV-Vis על ידי לקיחת מדידות UV-Vis חוזרות לאורך זמן. מדידות UV-Vis נלקחות בדרך כלל עם ספקטרופוטומטר. UV-Vis הוא גם גלאי פופולרי מאוד עבור טכניקות אנליטיות אחרות, כגון כרומטוגרפיה, כי זה יכול לזהות תרכובות רבות.

בדרך כלל, UV-Vis אינה טכניקת הספקטרוסקופיה הרגישה ביותר, כי לא הרבה אור נספג על פני אורך נתיב קצר. טכניקות ספקטרוסקופיות אחרות כגון פלואורסצנטיות יש רגישות גבוהה יותר, אבל הם אינם ישימים בדרך כלל, כמו רוב המולקולות אינן פלואורסצנטיות. ל-UV-Vis רגישות דומה למדידות ספיגה אחרות, כגון ספקטרוסקופיית אינפרא-אדום.

Procedure

1. כייל את הספקטרומטר

  1. הפעל את ספקטרומטר UV-Vis ואפשר למנורות להתחמם לפרק זמן מתאים (כ -20 דקות) כדי לייצב אותן.
  2. מלאו קובט בממס לדגימה וודאו שבחוץ נקי. זה ישמש ריק ולעזור להסביר הפסדים קלים עקב פיזור או ספיגה על ידי הממס.
  3. מניחים את הקובט בספקטרומטר. הקפד ליישר את cuvette כראוי, כמו לעתים קרובות cuvette יש שני צדדים, אשר נועדו לטיפול (עשוי להיות מחורץ) ואינם אמורים להאיר אור דרך.
  4. קח קריאה עבור הריק. הספיגה צריכה להיות מינימלית, אבל כל ספיגה צריכה להיות מופחתת מדגימות עתידיות. מכשירים

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Results

UV-Vis יכול לשמש כדי להשיג ספקטרום של תרכובות צבעוניות. באיור 1Aמוצג ספקטרום הספיגה של צבע כחול. הרקע מציג את צבעי האור בספקטרום הנראה לעין. הצבע הכחול בעל ספיגהמקסימלית בכתום/אדום. איור 1B מציג ספקטרום של צבע אדום, עםמקסימום בירוק.

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Application and Summary

UV-Vis משמש ניתוחים כימיים רבים. הוא משמש כדי כמות כמות החלבון בתמיסה, כמו רוב החלבונים לספוג חזק ב 280 ננומטר. איור 3 מציג ספקטרום לדוגמה של ציטוכרום C, בעל ספיגה גבוהה ב-280 וגם ב-450 בגלל קבוצת heme. UV-Vis משמש גם טטכניקה סטנדרטית כדי לכמת את כמות ה- DNA במדגם, כמו כל הבסיסים לספוג חזק ב 260 ננומטר....

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Tags
UV Vis SpectroscopyAnalytical TechniqueLaboratorySample AbsorptionTransmissionAbsorbanceQuantitative AnalysisQualitative AnalysisAbsorbance SpectrumConcentration DeterminationCompound IdentificationReaction KineticsPhoton AbsorptionGround StateEnergy StateBand GapUnique Absorbance SpectraBeer s LawMolar Attenuation CoefficientPath Length

Skip to...

0:00

Overview

1:11

Principles of UV-Vis Spectroscopy

3:46

Absorbance Measurements with UV-Vis Spectroscopy

5:30

Kinetics Experiments with UV-Vis Spectroscopy

6:47

Applications

8:57

Summary

Videos from this collection:

article

Now Playing

ספקטרוסקופיה אולטרה סגולה (UV-Vis)

Analytical Chemistry

614.7K Views

article

הכנה לדוגמה לאפיון אנליטי

Analytical Chemistry

83.1K Views

article

תקנים פנימיים

Analytical Chemistry

202.8K Views

article

שיטת התוספת הסטנדרטית

Analytical Chemistry

318.2K Views

article

עקומות כיול

Analytical Chemistry

787.3K Views

article

רמאן ספקטרוסקופיה לניתוח כימי

Analytical Chemistry

50.5K Views

article

פלואורסצנטיות של קרני רנטגן (XRF)

Analytical Chemistry

25.2K Views

article

כרומטוגרפיה של גז (GC) עם גילוי יינון להבה

Analytical Chemistry

279.1K Views

article

כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC)

Analytical Chemistry

380.4K Views

article

כרומטוגרפיה של חילופי יונג

Analytical Chemistry

262.4K Views

article

אלקטרופורזה נימית (CE)

Analytical Chemistry

92.7K Views

article

מבוא לספקטרומטריית מסה

Analytical Chemistry

111.0K Views

article

סריקת מיקרוסקופיית אלקטרונים (SEM)

Analytical Chemistry

86.3K Views

article

מדידות אלקטרוכימיות של זרזים נתמכים באמצעות פוטנציוסטט /גלוונוסטאט

Analytical Chemistry

51.1K Views

article

וולטמטריה מחזורית (קורות)

Analytical Chemistry

122.9K Views

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved