ソース: 研究所博士 b. ジル Venton - ヴァージニアの大学の

(紫外-可視) 紫外可視分光法は、それは非常に汎用性とほぼすべての分子を検出することができるので最も人気のある分析手法の一つです。紫外可視分光法、紫外-可視光が試料を通過、サンプルによる光の透過率を測定します。透過率 (T) から = ログ (T) として吸光度を計算できます。吸光度スペクトルが得られ、異なる波長で化合物の吸光度を示しています。任意の波長で吸光度の量は、分子の化学構造によるものです。

紫外-可視は、機能グループを識別または吸光度スペクトルを照合することによって化合物の id を確認する質的な方法で使用できます。試料の濃度はビールの法則を使用して吸光度に関連して、定量的な方法では使用もできます。紫外可視分光法を使用して、DNA や水の分析のため、各種クロマトグラフィーの検出器としてサンプルの蛋白質の量を定量化します。化学反応速度論も、時間をかけて繰り返し紫外-可視計測することで紫外可視分光法による測定されます。紫外-可視計測は、分光光度計で一般的に撮影されます。それは多くの化合物を検出できるため、紫外-可視は、またクロマトグラフィーなどの他の分析技術の非常に人気のある器です。

通常、紫外-可視は短いパスの長さにわたっていない多くの光が吸収されるため、最も敏感な分光法ではありません。蛍光など他の分光学の技術はより高い感度が、ほとんどの分子は蛍光ではないと一般にできるが。紫外可視赤外分光法などの他の吸光度測定に似たような感性があります。

1. 分光計をキャリブレーションします。

1. 紫外可視分光光度計をオンにし、適切な期間 (約 20 分) それらを安定させるためのウォーム アップするランプを許可します。
2. サンプルの溶剤とキュベットを埋める、外側がきれいかどうかを確認します。これは空白として使用し、溶媒による吸収や散乱による光損失を考慮を助けます。
3. 分光計のキュヴェットを配置します。正しくキュヴェットを合わせて確認してください、頻繁にキュヴェットが (溝があります) 処理のためのもので光を当てる必要はありません 2 つの側面を持っています。
4. ダミーのための読書を取る。吸光度は、最小限にする必要がありますが、任意の吸光度を将来のサンプルから減算する必要があります。いくつかの楽器は、空白データを格納し、自動的に減算を実行可能性があります。

2. 吸光度スペクトルを実行します。

1. サンプルでキュヴェットを埋めます。転送が定量的であることを確認、サンプルで二回キュベットをリンスし、完全な 3/4 の塗りつぶし

紫外-可視色化合物のスペクトルを取得する使用できます。図 1 a、青色色素の吸光度スペクトルが表示されます。背景は、可視スペクトルの光の色を示しています。青い色素は、オレンジ/レッドの λ の_最大吸光度です。図 1 bは、λ_maxで緑と赤の染料スペクトルを示しています。

速度は、時間をかけて 1 ?...

紫外-可視は、多くの化学分析で使用されます。ほとんどの蛋白質は 280 で強く吸収するので、溶液中の蛋白質の量を量的に使用されます nm。図 3は、スペクトル チトクロム C, ヘム グループのため 280、450 高吸光度を持っているの例を示します。260 ですべての拠点を強く吸収するので紫外-可視が、サンプルの DNA 量を定量化する標準的な技術として使用はまた nm。260 RNA および蛋?...