Fuente: Laboratorio del Dr. B. Jill Venton - Universidad de Virginia

Espectroscopia ultravioleta-visible (UV-Vis) es uno de las más populares técnicas analíticas porque es muy versátil y capaz de detectar casi cualquier molécula. Con espectroscopía UV-Vis, la luz de UV-Vis se pasa a través de una muestra y se mide la transmitancia de la luz por una muestra. De la transmitancia (T), la absorbancia se puede calcular como A =-log (T). Un espectro de absorbancia se obtiene que muestra la absorbancia de un compuesto en diferentes longitudes de onda. La cantidad de la absorbancia a cualquier longitud de onda es debido a la estructura química de la molécula.

UV-Vis se puede utilizar de una manera cualitativa, para identificar grupos funcionales o confirmar la identidad de un compuesto haciendo coincidir el espectro de absorbancia. También puede ser utilizado de manera cuantitativa, como concentración del analito se relaciona la absorbancia con la ley de Beer. Espectroscopía UV-Vis se utiliza para cuantificar la cantidad de ADN o proteínas en una muestra, para análisis de aguas y como un detector para muchos tipos de cromatografía. Cinética de las reacciones químicas se miden también con espectroscopía UV-Vis tomando medidas repetidas de UV-Vis con el tiempo. UV-Vis son generalmente mediciones con un espectrofotómetro. UV-Vis es también un detector muy popular para otras técnicas analíticas como la cromatografía, pueden detectar muchos compuestos.

Por lo general, UV-Vis no es la técnica de espectroscopia más sensible, porque no mucha luz es absorbida sobre una longitud de ruta corta. Otras técnicas de espectroscopia tales como de fluorescencia tienen mayor sensibilidad, pero no son como generalmente aplicables, como la mayoría de las moléculas no es fluorescente. UV-Vis tiene una sensibilidad similar a otras mediciones de absorbancia, tales como espectroscopia de infrarrojo.

1. calibrar el espectrómetro

1. Encienda el espectrómetro UV-Vis y las lámparas se caliente por un período adecuado de tiempo (alrededor de 20 min) para estabilizarlos.
2. Llenar una cubeta con el solvente de la muestra y asegúrese de que el exterior esté limpio. Esto servirá como un espacio en blanco y ayudar a responsables de pérdidas de luz debido a la dispersión o la absorción por el disolvente.
3. Coloque la cubeta en el espectrómetro. Asegúrese de alinear correctamente la cubeta, como a menud

UV-Vis se puede utilizar para obtener un espectro de compuestos coloreados. En la figura 1A, se muestra el espectro de absorción de un colorante azul. El fondo muestra los colores de la luz en el espectro visible. El tinte azul tiene una absorbancia_máxima λ en naranja y rojo. Figura 1B muestra un espectro de un tinte rojo, con λ_max en el verde.

Cinética puede ser medida de una parcela de la absorbanci...

UV-Vis se utiliza en muchos análisis químicos. Se utiliza para cuantificar la cantidad de proteína en una solución, como la mayoría de las proteínas absorbe fuertemente a 280 nm. Figura 3 muestra un ejemplo de los espectros de citocromo C, que tiene una alta absorbancia a 280 y 450 debido a un grupo hemo. UV-Vis también se utiliza como una técnica estándar para cuantificar la cantidad de ADN en una muestra, como todas las bases absorben fuertemente a 260 nm. RNA y proteínas también absorben a ...