לפני הליך הדימום, יש לקבוע את סוג המדגם הנדרש. הליכים ניסיוניים עשויים לדרוש דם שלם, פלזמה או נסיוב. עבור דם שלם, יש להוסיף נוגד קרישה לדגימה. פלזמה, המכיל פיברינוגן וגורמי קרישה אחרים כאשר מופרדים מתאי הדם האדומים, ניתן לחלץ מדגם נוגד קרישה. סרום מתקבל באמצעות איסוף דם ללא נוגד קרישה. הנסיוב ייווצר מצנטריפוגה של הדגימה ברגע שנוצר קריש דם. כמו המדגם יש קרישה, הסרום לא יכיל פיברינוגן או גורמי קרישה אחרים. הן פלזמה והן סרום מתקבלים באמצעות צנטריפוגה לרוץ ב 2200-2500 סל"ד למשך מינימום של 15 דקות.

עבור מדגם שחייב להניב דם שלם או פלזמה, יש להשתמש נוגד קרישה מתאים. נוגדי קרישה נפוצים עבור חיות מעבדה הם הפרין, נתרן סיטראט, חומצה טטראצטית אתילנדיאמין (EDTA); הבחירה בה מבוססת על צרכי מחקר. ניתן לטעון ישירות למזרק צורה נוזלית של EDTA, הפרין ונתרן סיטראט. זה מאפשר מגע של נוגד קרישה ישירות כמו הדם נמשך, סיוע במניעת קרישה. כמו קרישי דם חולדה מהר יותר מאשר רוב דם היונקים, זה חיוני כי היחס הנכון של נוגד קרישה לדם ישמש לאיסוף דם.

בחירת המחט מבוססת על גודל החיה והאתר של venipuncture. באופן כללי, ככל שהשעמום של המחט גדול יותר, כך ניתן לאסוף את המדגם במהירות רבה יותר. פחות נזק לתאי הדם הוא יתרון נוסף למחטים גדולות יותר. עם זאת, החיסרון העיקרי למחטים גדולות הוא הנזק הפוטנציאלי לכלי הדם. על עכברים וחולדות, הבחירות של גודל נע בין 20-29 מחטים מד כי הם 0.5-1.5 אינץ 'אורך. אם מחט ארוכה מדי, לא רק שזה מביך לשימוש, אבל יש את המרחב הנוסף במחט יכול לגרום קרישה. גודל המחט המתאים מופיע עבור כל שיטה בסעיף ההליכים.

יש גם תגדיר מראש את גודל המדגם הנדרש. בשל הגודל הקטן של העכבר או החולדה, יש לחשב את הכמות המרבית של איסוף דם עבור דימום הישרדותי. עכבר ממוצע במשקל 25 גרם יש נפח דם כולל של 1.8 מ"ל; החולדה הממוצעת במשקל 250 גרם יש נפח דם כולל של 16 מ"ל. עבור דגימת דם אחת על עכבר או חולדה ללא החלפת נוזלים, נפח הדם המרבי שניתן להסיר בבטחה הוא 10% מנפח הדם הכולל, או 7.7-8 מיקרול/גרם. לכן עבור עכבר ממוצע, 10% מנפח הדם שלה הוא 193-200 μl. עבור חולדה ממוצעת של 250 גרם, זה שווה ערך 1.9-2.0 מ"ל. מחקרים הראו כי הסרת יותר מ -15% מנפח הדם יכולה לגרום להלם תת-נפחי. ^1,2 עם זאת, עם החלפת נוזלים, עד 15% מכלל נפח הדם - או 12 μl / g-ניתן להסיר. עבור עכבר 25 גרם, זה שווה ערך 300 μl; עבור חולדה 250 גרם, זה שווה ערך 3 מ"ל. להחלפת נוזלים, יש לחמם את הנוזלים ולהעניק אותם באופן תת עורי.

אם יש צורך לקחת דגימות מרובות, נפח הדם נמשך מופחת. נפח הדם המרבי שניתן לצייר בשבוע הוא לא יותר מ 7.5% מכלל נפח הדם, או 6 μl/ g. עבור עכבר 25 גרם, זה שווה ערך 145-150 μl בשבוע. עבור חולדה 250 גרם, זה שווה ערך 1.45-1.50 מ"ל בשבוע. אם דגימה תתרחש כל שבועיים, עד 10% מנפח הדם הכולל (8 מיקרול/גרם) עשוי להימשך. זה שווה ערך 200 μl כל שבועיים עבור עכבר ממוצע, ועד 2.00 מ"ל כל 2 שבועות עבור חולדה 250 גרם. מחקר אחד, שבוצע על חולדות עם משקל ממוצע של 250 גרם, גילה כי כאשר נפחי דם של 15-20% הוסרו, זה לקח יותר מ 29 ימים עבור רמות הדם לנרמל. ^1,2 לאיסוף דם חוזר ונשנית, החלפת נוזלים אינה מאפשרת נפח דם גדול יותר או איסוף דם תכוף יותר, שכן הוא מחליף רק נפח. החיה תזדקק לזמן כדי לחדש את מלאי תאי הדם.

השימוש בקלעת הרטרו-מסלולית היה מנהג נפוץ בעבר. עם זאת, חששות רבים לגבי האנושיות של הליך זה התעוררו. במהלך ההליך, תנועה מופרזת של צינור המטוקריט פעם להציב קנתוס המתיווך של העין יכול לגרום נזק לרקמות שמסביב, וכתוצאה מכך נפיחות של העפעפיים ו /או ממברנות הלחמית. הרקמות הנפוחות יכולות לגרום לגלגל העין לבלוט מספיק רחוק, כך שסגירת העפעף תיפגע, מה שעלול לגרום לייבוש ונזק בקרנית. כאב מנפיחות יכול לעורר גירוד והשחתה עצמית שתוצאתה תמריץ את העין. מיקום לא תקין של צינור המטוקריט במהלך דימום רטרו-מסלולי יכול לנתק את עצב הראייה, וכתוצאה מכך עיוורון. אם צינור ההמטוקריט מתקדם בזווית לא נכונה, ניתן לכפות את העין לצאת מהמסלול, מה שמאפשר לעפעפיים ליפול מאחורי גלגל העין. אם זה קורה, קשה מאוד להחליף את העין כראוי לתוך השקע. בעיות אחרות שעלולות להתעורר כוללות שבירה של עצמות המסלול השברירי, חדירה של כדור הארץ וכתוצאה מכך אובדן הומור זגג, או היווצרות של שטף דם מאחורי העין שיכול לגרום לכאב קיצוני עקב הלחץ על העין והמבנים שמסביב. למרות כל החששות הללו, אם טכנאי מיומן מבצע את ההליך והחיה מורדם לחלוטין עם הרדמה כללית, כגון הרדמה משאיפה איזופלורן, דימום רטרו-מסלולי הוכח כשיטה יעילה של איסוף דם במכרסמים.

המבנה האנטומי של אזור המסלול שונה בין העכבר לעכברוש. לעכבר יש את הסינוס הרטרו-מסלולי - אוסף של כלי שיט שיוצרים סינוס באזור המסלול. במסלול של עין החולדה, יש מקלעת של כלי שיט שזורמים מאחורי העין; עם זאת, הם אינם יוצרים סינוס, כמו בעכבר. כתוצאה מכך, קל יותר לבצע הליך זה על עכברים. עבור איסוף דגימה חוזר דרך מקלעת רטרו-מסלולית, מינימום של 10 ימים בין דימומים נדרש כדי לאפשר את הרקמות באזור לרפא. למרות הרדמה כללית מומלץ, ההליך יכול להתבצע בעכברים ללא הרדמה כללית אם הרדמה עיניים אקטואלי, כגון פרופרקאין או טטרקאין, מוחל לפני ההליך. מכיוון שלעכברושים אין את הסינוס הרטרו-מסלולי, ומכיוון שהממברנות שלהם סביב המסלול חזקות בהרבה, חובה להרידים אותן להליך זה.

ניתן להשיג דוגמאות טוריות של אמצעי אחסון קטן באמצעות שיטת קליפ זנב. הקטיעה הראשונית של הזנב חייבת להיות מוגבלת לקצה הזנב, כ 0.5-1.0 מ"מ אורך בעכברים ו 2.0 מ"מ בחולדות. ^{1 הליך} חיתוך הזנב לאיסוף דם מאפשר איסוף סדרתי על ידי שיבוש הגלד או קריש של החתך המקורי בסוף הזנב. בדרך כלל, קטיעה נוספת של קצה הזנב אינה הכרחית. נפחי הדם שנאספו נעים בין 20-100 μL לעכברים ו 75-150 μL עבור חולדות. הסכום שנאסף משתנה בין בעלי חיים ויכול להיות מושפע מגיל, מצב בריאותי ומשקל.

המדגם שנאסף מגזרת זנב יכול להכיל דם עורקי ורידי, יחד עם זיהום מוצר רקמה. איכות המדגם פוחתת אם הזנב הוא ליטף או "חלב" כדי להשיג יותר דם. כדי להגביר את זרימת הדם, הזנב יכול להיות מחומם עם קומפרסים חמים, מנורת חום, או שקוע במים חמים. לחץ צריך להיות מופעל על קצה הזנב עבור hemostasis, ובעלי חיים צריך להיבדק כל 5-10 דקות כדי להבטיח hemostasis הושג. המוסטזיס מתעכב לעתים קרובות עם דגימה חוזרת ונשנית. אבקה סטייפטית עשויה לשמש להמוסטזיס. עבור הקטיעה הראשונית, מומלץ הרדמה (כללית או מקומית). דימום לאחר מכן לא צריך לדרוש הרדמה, במיוחד כמו בעלי החיים להיות רגילים להליך. הרדמה תגרום לירידה בלחץ הדם, מה שהופך את איסוף הדם עם טכניקה זו קשה.

חלופה לגזור זנב היא ניק כלי הזנב. הליך זה מבוצע בקלות הן על עכברים והן על חולדות. עם זאת, כמו עם חיתוך הזנב, הדגימות עשויות להיות מזוהמות עם מוצרי רקמות, במיוחד בעכבר. עבור חולדות, מחט תת עורית מוכנסת לכלי, והדם נאסף ממרכז המחט. מחקר אחד הדגים את השימוש ב חוסם עורקים שהוצב מעל אתר ניקוב המחט כדי לסייע באיסוף דם. ³ מזרק אינו משמש כדי להוציא את הדם מהכלי, שכן הלחץ שנוצר מהמזרק ימוטט את כלי הדם. שיטה זו יכולה לשמש גם לדגימה טורית, כמו קריש ניתן להסיר כדי לגרום לאתר לדמם שוב. כמו עם חיתולים זנב, זה הכרחי כדי להבטיח hemostasis על ידי הפעלת לחץ על האתר ובדיקה מחדש של החיה כל 5-10 דקות.

לעתים קרובות, מחקרים דורשים דגימת דם לא-שורבית וגדולה שנאספה באמצעות דימום תוך-לבבי או קווה הווריד. ⁴ כמחצית נפח הדם הכולל ניתן לאסוף מעכבר או חולדה על ידי ניקוב לב. זה שווה ערך 40 μl/g או כ 1 מיליליטר עבור עכבר ממוצע 25 גרם. חולדה 250 גרם תיבול כ 10 מ"ל של דם. החיה חייבת להיות מרדים לדם. הרדמה תפופה או CO 2 נרקוסיס יכול לשמש על ידי_טכנאי מיומן; ניתן להשתמש גם בהרדמה להזרקה. עם זאת, ייתכן שיש ירידה בלחץ הדם ובמחזור הדם, אשר יכול להפחית את כמות הדם שנאסף.

שיטת הווצק הקאווה caudal דורשת כי החיה להיות מרדים עמוק לחשוף את הכלי בניתוח. CO₂ נרקוסיס אינו מספיק, כמו הלב חייב להיות פועם ואת הנשימה החיה במהלך גמילה מהדם. במהלך ההליך, מהיר מדי של נסיגת דם יכול לגרום לכלי לקרוס על שיפוע המזרק, אוסם את הפתח ומניעת איסוף דם. כמו כן, קירות כלי הדם דקים, ולכן יש להימנע מתנועה של היד והמחט כדי למנוע קרע או דליפת דם מאתר הכניסה למחט. כמו המחט אינה עוברת דרך העור, שיטה זו גורמת לאיסוף של מדגם סטרילי. יש להשתמש בשיטות המתת חסד כדי להבטיח שבעל החיים לא יתאושש מהרדמה. שיטה זו מלווה לעתים קרובות זלוף לב או בתחום העורקים.

השיטה תוך-לבבית יכולה להתבצע עם בעל החיים מרוסן באופן ידני ברגע שהוא מרדים (שיטה סגורה), או הלב יכול להיחשף בניתוח לפי הפרוטוקול עבור שיטת איסוף דם veaudal veva (שיטה פתוחה). עבור השיטה הסגורה, ציוני הדרך למיקום מחט הם החריץ שנוצר על ידי כלוב הצלעות בתהליך xiphoid, בצד שמאל של החיה.

איסוף דם לעכברים וחולדות יכול להתבצע במגוון טכניקות. למרות שגורמים רבים, כגון גודל המדגם, תדירות הדגימה, ואת הגודל והגיל של החיה להשפיע על זה, המרכיב החיוני ביותר הוא רמת המיומנות של הטכנאי ביצוע אוסף המדגם. עבור השיטות המתוארות כאן, השימוש הנכון בהרדמה הוא חיוני גם עבור דגימות איכות ורווחתם של בעלי החיים.