כאב מחממים בדיקה באמצעות ה-TSA Thermostimulator II 1. הקדמה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הליך זה משתמש ב-TSA, זמין מסחרית תרמו חושית מנתח המספקת גירויים בעור חום עם thermode (מרוק מתקדם מערכות רפואיות, Durham, NC). היחידה המרכזית מייצר ומעביר את האות thermode. אות זה הוא נשלט על ידי תוכנה קניינית מאוחסנים בדרך כלל במחשב נייד המחובר היחידה המרכזית. מצורף גם ליחידה המרכזית היא השליטה כף יד המאפשר נושא המחקר להפסיק את חימום של thermode. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שבעה גירויים חום רציף זהה מועברות, עם גירוי בין במרווחים של שנות ה -30. הטמפרטורה הבסיס thermode מוגדר ג 35 º נוח באיזה קצב thermode מחממת מוגדר 1 º C / s, בעוד הקצב שבו זה מתקרר מוגדר על 10 º C / s. הטמפרטורה המקסימלית thermode מוגדר 52 º C. </li></ol> 2. הכנה והכשרה נושאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להכין את בנושאים של המושב כאב מבחן לחמם אותם בנוחות על כורסה נפתחת המספקת תמיכה הולמת עבור הראש, הידיים והרגליים. הכיסא צריך גם לאפשר גישה נוחה לאתרים הגוף שנבדקו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מתקן הבדיקה צריכה להיות בטמפרטורת חדר נוח, לספק סביבה די ניטרלי עם הסחת הדעת לא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני תחילת הניסוי, כל המשתתפים צריכים להיות מאומנים היטב בכל ההיבטים של בדיקות כאב וחום. אימון יכול להתבצע בכל עת לפני הניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אינטראקציות בין משתתפי המחקר והחוקרים צריך להיות מוגבל לאלה הנחוצים לאיסוף נתונים. בדיחות שיחת חולין מעודדים משום שהם עלולים לסכן את עקביות הנתונים. הנבדקים במחקר הם הודיעו כי אינטראקציות יהיה בכוונה להיות מונוטוני במקצת נייטרלית במהלך הניסויים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את הוראות ברור, פשוט, עקבי. להדגיש כי הכאב הוא סובייקטיבי, ואין תשובות נכונות או שגויות. חשוב ביותר להיות עקביים. הגדר את סף הכאב לחום כנקודת בין להיות &quot;עומד להיות כואב&quot; ו &quot;רק הפכו כואבים&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זה קריטי, כי הנושא יודע בדיוק למה לצפות במהלך מבחן. כל &quot;הפתעות&quot; עלול לגרום נתונים עקביים פחות, כי לערפלנים כגון חרדה יכול להיות שנוצר. לדוגמה, אם שבע כאב גירויים חום משמשים כדי לקבוע את סף הכאב לחום, הנושא צריך לדעת את זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בכל עת, הנושא יכול לעצור את thermode מלקבל כל חם על ידי לחיצת כפתור שליטה כף יד. להיות בשליטה יהיה להפחית את החרדה של הנושא יגרום הנתונים אמינים יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אימון מציע הזדמנות לשפוט את ביצועי נושא המחקר. זה עשוי להיות הטוב ביותר לאמן נושאים במהלך 2-4 מחזורי הבדיקה כך סף הכאב האישי שלהם משתנות לפי לא יותר מ 0.8 ° C, ו - באופן אידיאלי על ידי לא יותר מ 0.6 מעלות צלזיוס בין שני המחזורים האחרונים הבדיקה. נושאים אשר אינם מצליחים לבצע בעקביות אינם נכללים בדרך כלל מן המחקר. </li></ol> 3. קביעת סף הכאב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להתחיל את סף הכאב מחזורי בדיקות לסמן את המיקום של thermode על העור של הנושא. בניסוי זה פצע אותו עור מודלק המשמש microdialysis ייבדקו כאב ללמוד על ביוכימיקלים פרסמה בתגובה בדיקות את הכאב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ואז, ליזום כל מחזור על ידי הנחת thermode אל אזור עור בולט. התאם את עמדת thermode עם הסימונים ככל האפשר. אפשר את הטמפרטורה בין העור לבין thermode לאזן עד 35 ° צלזיוס - טמפרטורה בבטחה כי תגרום כאב. זה ייקח בערך 5 שניות תסומן על ידי קריאה של 35 מעלות על מסך המחשב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני ההתחלה, לתת שליטה כף יד לנושא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בלחץ קבוע ועדין לשמור על כל פני השטח של thermode במגע מלא עם העור של הנבדק במהלך הבדיקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכשיו להתחיל את האלגוריתם מתוכנתים מראש הבדיקה. Thermode יתחיל להתחמם ב 1 ° C / s. ברגע שהכאב חוויות הנושא, הם לחצו על מכשיר כף יד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי לחץ על כפתור במכשיר המוחזק ביד, כאב את הטמפרטורה thermode גורם באופן אוטומטי להיות רשום יתחיל ירידה בשיעור של 10 ג ° C / s לטמפרטורת הבסיס של 35 ° </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדיקה הטמפרטורה באופן אוטומטי להיות כל הזמן על 35 מעלות צלזיוס למשך 30 שניות לפני שהוא מתחיל לעלות שוב ב 1 ° C / S, עד הנושא שוב לוחץ על כפתור במכשיר המוחזק ביד. רגע לפני הטמפרטורה thermode עומד להגדיל שוב, להזכיר את הנושא כי זה עומד לקרות. זה ימשיך בנושא ממוקד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רצף זה יחזור על עצמו עד שבע הקלטות טמפרטורה נרשמו. חישוב הממוצע של אלה בטמפהקריאות rature, זהו סף הכאב לחום. </li></ol> כאב בדיקה מכנית עם בדיקות לחץ מנוקד 1. הקדמה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אנו משתמשים אישית עשה בדיקות כיול הלחץ מנוקד, משום שהם מספקים תוצאות עקביות יותר את השערות פון בשימוש מסורתי זמינים מסחרית פריי. בדיקות עשויים גלילי חוטים זהים נירוסטה (240 מיקרומטר קוטר) רכוב על מוטות נחושת של משקולות שונים (1, 2, 4, 8, 16, 32, 49, 64, ו - 81 גרם) כי לנוע בחופשיות בתוך רחב יד החזיק צינור אלומיניום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אותם תנאים ניסיוניים כללי התווה לבדיקות כאב חום חלות על בדיקות כאב מכני. הנבדקים צריכים להיות מוכנים ומאומנים היטב. חשוב במיוחד כדי להרגיע את הנושאים בדיקות הם בוטה לא לנקב את העור. זה יעזור הנבדקים להירגע לספק מידע עקבי. </li></ol> 2. קביעת סף כאב מכני <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לקבוע את סף הכאב מכני, תחילה להחיל את תיל פלדה קצה בדיקה הקל בניצב לעור במרכז הנגע מודלק בניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צינור המוחזק ביד אלומיניום הוא הוריד אז בלי לגעת בו כלפי העור. בדרך זו, המשקל של כל מוט נחושת בתוך צינור אלומיניום נשענת על קצה תיל פלדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נושא המחקר מצביע על כך אם החללית גורמת לכאב ידי אמירת &quot;כן&quot; או &quot;לא&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם התשובות הנושא &quot;לא&quot;, אז גם בדיקה זהה או בדיקה כבד הבא ישמש הבא. אלגוריתם זה נקרא רצף גירוי עולה. אקראי לקבוע אם בדיקה הבא הוא כבד או משקל זהה. זה ימשיך נושא סינוור את האלגוריתם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל את בדיקות ברצף עולה עד תשובות בנושא &quot;כן&quot;. המשקל הממוצע של שתי חלליות האחרון בסדרה זו נרשם כנקודת הסטייה הראשונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר תשובות בנושא &quot;כן&quot;, להתחיל להשתמש רצף גירוי יורד, ולהשתמש או בדיקה מצית או בדיקה כמו קודם. אקראי לקבוע אם בדיקה הבא הוא קל או משקל זהה. זה ימשיך נושא סינוור את האלגוריתם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל בדיקות ברצף יורד עד תשובות בנושא &quot;לא&quot;. המשקל הממוצע של שתי בדיקות שעבר רצף זה מהווה את נקודת הסטייה השנייה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר התשובות הנושא &quot;לא&quot;, לחזור רצף גירוי עולה. חלופי בין עולים ויורדים רצפים עד שבע נקודות סטיה נרשמות. הממוצע של שבע נקודות אלה הוא סף הכאב מכני. </li></ol>

<ol>
	<li>Angst, M. S., Clark, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comment+on+Koltzenburg+et+al.:+Differential+sensitivity+of+three+experimental+pain+models+in+detecting+the+analgesic+effects+of+transdermal+fentanyl+and+buprenorphine.">Comment on Koltzenburg et al.: Differential sensitivity of three experimental pain models in detecting the analgesic effects of transdermal fentanyl and buprenorphine.</a> Pain. 126, 165-174 (2006).</li><li>Angst, M. S., Clark, J. D., Carvalho, B., Tingle, M., Schmelz, M., Yeomans, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine+profile+in+human+skin+in+response+to+experimental+inflammation,+noxious+stimulation,+and+administration+of+a+COX-inhibitor:+A+microdialysis+study.">Cytokine profile in human skin in response to experimental inflammation, noxious stimulation, and administration of a COX-inhibitor: A microdialysis study.</a> Pain. , (2008).</li><li>Angst, M. S., Koppert, W., Pahl, I., Clark, J. D., Schmelz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-term+infusion+of+the+mu-opioid+agonist+remifentanil+in+humans+causes+hyperalgesia+during+withdrawal.">Short-term infusion of the mu-opioid agonist remifentanil in humans causes hyperalgesia during withdrawal.</a> Pain. 106, 49-57 (2003).</li><li>Lotsch, J., Angst, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mu-opioid+agonist+remifentanil+attenuates+hyperalgesia+evoked+by+blunt+and+punctuated+stimuli+with+different+potency:+a+pharmacological+evaluation+of+the+freeze+lesion+in+humans.">The mu-opioid agonist remifentanil attenuates hyperalgesia evoked by blunt and punctuated stimuli with different potency: a pharmacological evaluation of the freeze lesion in humans.</a> Pain. 102, 151-161 (2003).</li></ol>

וידאו זה מדגים אלגוריתמים להערכת חום סף כאב מכני בעור מודלק של מתנדבים אנושיים. תפיסת הכאב הוא סובייקטיבי. איסוף הנתונים כאב נאותה דורש מתקן הבדיקות המתאימות (שקט למשל ומנחם), הכשרה יסודית של משתתפי המחקר עם המובנית נתונים לשלוט מדדי איכות (מבחן אמינות בדוק שוב), הקפדה על פרוטוקול מחקר סטנדרטית, והימנעות גורמים סותרים (למשל, מתח וחרדה). נתונים סובייקטיביים אמין על הרגישות לכאב, יחד עם התערבויות כגון ניהול של תרופה לשיכוך כאבים וכן את איסוף הנתונים מכניסטית כגון שחרור מקומי של מתווכים nociceptive לספק תובנה חשובה מנגנוני כאב, אמצעי כדי למנוע או להחליש אותו.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>TSA-II Neuro Sensory Analyzer</td>
<td>Tool</td>
<td>Medoc Advanced Medical Systems</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Puntuated Pressure Probes</td>
<td>Tool</td>
<td>Custom-made</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alternatively, commercially available von Frey Hairs can be used.</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

determining heat and mechanical pain threshold in inflamed skin of human subjects

במאמר הקודם בכתב העת של ניסויים דמיינו שהראנו microdialysis טכניקות העור לאיסוף רקמות ספציפיות ביוכימיקלים nociceptive ו דלקתית בבני אדם. במאמר זה אנו מציגים כאב בדיקות פרדיגמות המשמשים לעתים קרובות עם נהלים microdialysis במקביל. שילוב בדיקות כאב עם microdialysis מספק את הקישור קריטי בין נתונים התנהגותיים ביוכימיים המאפשר ביוכימיקלים מפתח זיהוי אחראי ליצירת מתפשט הכאב. שני מודלים של הכאב לעורר בעור מודלק של משתתפי המחקר האנושי מוצגים. המודל הראשון מעורר כאב בעזרת גירויים של חום. כאב חום עורר כמתואר כאן מתווך בעיקר על ידי קטנים, שאינם myelinated סיבי עצב היקפי nociceptive (C-סיבים). המודל השני מעורר כאב באמצעות גירוי הלחץ מנוקד. כאב לחץ מנוקד עורר מתווכת בעיקר על ידי קטנים, סיבי עצב היקפי myelinated nociceptive (A-delta סיבים). שני הדגמים נבדלים באופן מכניסטי עצמאי לבחון עיבוד nociceptive ידי שתי האוכלוסיות הגדולות סיב העצב ההיקפי מעורב איתות כאב. כאב חום הוא עורר בסיועה של II-TSA, זמין מסחרית תרמו חושית Analyzer (מרוק מתקדם מערכות רפואיות, Durham, NC). תצורה Stimulus משלוח מתבצע בעזרת תוכנות ספציפיות. Thermodes להשתנות בגודל ובצורה אך עקרונית מורכבת צלחת מתכת שניתן מחומם או מקורר בשיעורים שונים לתקופות זמן שונות. אלגוריתמים להערכת חום עורר כאב הן מגוונות. בניסויים המוצג כאן, משתתפי המחקר מתבקשים לציין באיזו נקודה הם מתחילים לחוות כאב בזמן thermode במגע עם העור מחוממת בשיעור קבוע מראש החל בטמפרטורה שאינה לעורר כאב. הטמפרטורה thermode בו נושא מתחיל לחוות כאב מהווה את סף הכאב לחום. כאב מכני הוא עורר עם בדיקות מנוקד. בדיקות כאלה זמינים מסחרית של יצרנים שונים (פון שערות פריי). עם זאת, הדיוק של פון פריי שערות זכתה לביקורת וחוקרים רבים משתמשים בהתאמה אישית בדיקות לחץ מנוקד. בניסויים הראו כאן כבר שמונה מחוייט בדיקות מנוקד במשקלים שונים מוחלים בסדר רצופים, הליך המכונה למעלה למטה אלגוריתם, כדי לזהות נקודות סטיה המחשי, כלומר, שינוי מתחושת כאב כדי לחוש כאב או להיפך. המשקל הממוצע גרימת סטיה המחשי מהווה את סף הכאב מכני.

Watch this Scientific Journal Video about Determining heat and mechanical pain threshold in inflamed skin of human subjects at JoVE.com

Determining heat and mechanical pain threshold in inflamed skin of human subjects

אלגוריתמים להערכת סף הכאב חום מכני בעור מודלק בניסוי של נבדקי המחקר האנושי מוצגים. שתי בדיקות פרדיגמות כאב באופן עצמאי לבחון עיבוד nociceptive ידי שני הגדולים היקפי סיב עצב שמשדר כאב אוכלוסיות, כלומר לא myelinated סיבי C ו-A קטן myelinated דלתא סיבים.

קביעת חום סף כאב מכני של העור מודלק בבני אדם

In a previous article in the Journal of Visualized Experiments we have demonstrated skin microdialysis techniques for the collection of tissue-specific ...

determining-heat-mechanical-pain-threshold-inflamed-skin-human

Research

JoVE Journal

Biology

20.7K Views.  Stanford University School of Medicine. אלגוריתמים להערכת סף הכאב חום מכני בעור מודלק בניסוי של נבדקי המחקר האנושי מוצגים. שתי בדיקות פרדיגמות כאב באופן עצמאי לבחון עיבוד nociceptive ידי שני הגדולים היקפי סיב עצב שמשדר כאב אוכלוסיות, כלומר לא myelinated סיבי C ו-A קטן myelinated דלתא סיבים.

Video: Determining heat and mechanical pain threshold in inflamed skin of human subjects

Using Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) to Develop Diagnostic Tools

Using Micro-Electro-Mechanical Systems MEMS to Develop Diagnostic Tools

שימוש Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) לפתח כלים לאבחון

Murine Skin Transplantation

As one of the most stringent and least technically challenging models, skin transplantation is a standard method to assay host T cell responses to MHC-disparate donor antigens. The aim of this video-article is to provide the viewer with a step-by-step visual demonstration of skin transplantation using the mouse model. The protocol is divided into 5 main components: 1) harvesting donor skin; 2) preparing recipient for transplant; 3) skin transplant; 4) bandage removal and monitoring graft rejection; 5) helpful hints. Once proficient, the procedure itself should take &lt;10 min to perform.

Allogeneic skin transplantation is a standard model to assay host T cell responses to MHC-disparate donor antigens. This video-article provides a visual tutorial of each step involved in performing a BALB/c--&gt;C57BL/6 skin transplant.

השתלת עור Murine

As one of the most stringent and least technically challenging models, skin transplantation is a standard method to assay host T cell responses to ...

Implantation of Engineered Tissue in the Rat Heart

Rodent surgery is often an important component in assessing the utility of engineered tissues. A wide variety of surgical procedures can be performed in common laboratory rats or mice and these quite frequently serve as an intermediate step between bench-top experiments and large animal testing or human trials. Given that rodents provide an established, cost-effective, and physiologically-relevant model system in which to test novel combinations of scaffolding materials and cells, they are particularly well-suited for cardiovascular tissue engineering studies. Presently, we describe an open-heart surgical procedure to implant engineered tissue containing myogenic progenitor cells in the atrioventricular (AV) groove of a rat heart. These implants are intended to create an electrical conduit between the right atrium and right ventricle with the ultimate goal of providing an alternative treatment to conventional pacemaker implantation in pediatric patients with complete heart block[1]. The engineered tissue is implanted in the AV-groove by means of a thoracotomy. For our purposes, Lewis rats are anesthetized and invasively ventilated to maintain positive airway pressure during the sterile surgical procedure. The approach to the heart is performed by a right thoracotomy through an antero-lateral incision at the 5th intercostal space. The tissue construct is fixed in the AV groove using a single 7-0 Prolene suture and positioned between the right ventricle and atrium at the ventral portion of the heart. The epicardium is partially removed to allow direct contact between the recipient myocardial cells and those contained in the engineered tissue. Following implantation, the chest wall is closed in layers, any pneumothorax is evacuated, and the animal is extubated and treated with analgesic.

Here, we describe a cardiac surgical procedure to implant engineered tissue in the atrioventricular (AV)-groove of an adult Lewis rat.

השתלת רקמות מהונדסות בלב החולדה

Rodent surgery is often an important component in assessing the utility of engineered tissues. A wide variety of surgical procedures can be performed in ...

Demonstration of Cutaneous Allodynia in Association with Chronic Pelvic Pain

Pelvic pain is a common condition that is associated with dysmenorrhea and endometriosis. In some women the severe episodes of cyclic pain change and the resultant pain becomes continuous and this condition becomes known as Chronic Pelvic Pain. This state can be present even after the appropriate medical or surgical therapy has been instituted. It can be associated with pain and tenderness in the muscles of the abdomen wall and intra-pelvic muscles leading to severe dyspareunia. Additional symptoms of irritable bowel and interstitial cystitis are common. A common sign of the development of this state is the emergence of cutaneous allodynia which emerges from the so-called viscero-somatic reflex. A simple bedside test for the presence of cutaneous allodynia is presented that does not require excessive time or special equipment. This test builds on previous work associated with changes in sensation related to gall bladder function and the viscera-somatic reflex(1;2).
The test is undertaken with the subject s permission after an explanation of how the test will be performed. Allodynia refers to a condition in which a stimulus that is not normally painful is interpreted by the subject as painful. In this instance the light touch associated with a cotton-tipped applicator would not be expected to be painful. A positive test is however noted by the woman as suddenly painful or suddenly sharp. The patterns of this sensation are usually in a discrete pattern of a dermatome of the nerves that innervate the pelvis.
The underlying pathology is now interpreted as evidence of neuroplasticity as a consequence of severe and repeating pain with changes in the functions of the dorsal horns of the spinal cord that results in altered function of visceral tissues and resultant somatic symptoms(3). 
The importance of recognizing the condition lies in an awareness that this process may present coincidentally with the initiating condition or after it has been treated. It also permits the clinician to evaluate the situation from the perspective that alternative explanations for the pain may be present that may not require additional surgery.

Demonstration of Cutaneous Allodynia in Association with Chronic Pelvic Pain

A demonstration of the bedside test for cutaneous allodynia and its clinical implications.

הפגנה של עורית Allodynia בשיתוף עם כאבי אגן כרוניים

Pelvic pain is a common condition that is associated with dysmenorrhea and endometriosis.  In some women the severe episodes of cyclic pain change and the ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate daughter cells that retain the stem cell phenotype and transit-amplifying cells (TA cells) that migrate from the stem cell niche, undergo rapid proliferation and terminally differentiate to repopulate the tissue.
Epithelial stem cells have been identified in the epidermis, hair follicle, and intestine as cells with a high in vitro proliferative potential and as slow-cycling label-retaining cells in vivo 1-3. Adult, tissue-specific stem cells are responsible for the regeneration of the tissues in which they reside during normal physiologic turnover as well as during times of stress 4-5. Moreover, stem cells are generally considered to be multi-potent, possessing the capacity to give rise to multiple cell types within the tissue 6. For example, rodent hair follicle stem cells can generate epidermis, sebaceous glands, and hair follicles 7-9. We have shown that stem cells from the human hair follicle bulge region exhibit multi-potentiality 10.
Stem cells have become a valuable tool in biomedical research, due to their utility as an in vitro system for studying developmental biology, differentiation, tumorigenesis and for their possible therapeutic utility. It is likely that adult epithelial stem cells will be useful in the treatment of diseases such as ectodermal dysplasias, monilethrix, Netherton syndrome, Menkes disease, hereditary epidermolysis bullosa and alopecias 11-13. Additionally, other skin problems such as burn wounds, chronic wounds and ulcers will benefit from stem cell related therapies 14,15. Given the potential for reprogramming of adult cells into a pluripotent state (iPS cells)16,17, the readily accessible and expandable adult stem cells in human skin may provide a valuable source of cells for induction and downstream therapy for a wide range of disease including diabetes and Parkinson's disease.

A rapid, robust way of isolating viable adult epithelial stem cells from human skin is described. The method utilizes enzymatic digestion of skin collagen matrix , followed by plucking of hair follicles and isolation of single cell suspensions or tissue fragments for cell culture.

בידוד תרבות למבוגרים גזע תאים אפיתל של העור האנושי

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Digital Inline Holographic Microscopy (DIHM) of Weakly-scattering Subjects

Weakly-scattering objects, such as small colloidal particles and most biological cells, are frequently encountered in microscopy. Indeed, a range of techniques have been developed to better visualize these phase objects; phase contrast and DIC are among the most popular methods for enhancing contrast. However, recording position and shape in the out-of-imaging-plane direction remains challenging. This report introduces a simple experimental method to accurately determine the location and geometry of objects in three dimensions, using digital inline holographic microscopy (DIHM). Broadly speaking, the accessible sample volume is defined by the camera sensor size in the lateral direction, and the illumination coherence in the axial direction. Typical sample volumes range from 200 &#181;m&#160;x 200 &#181;m&#160;x 200 &#181;m using LED illumination, to 5 mm&#160;x 5 mm&#160;x 5 mm or larger using laser illumination. This illumination light is configured so that plane waves are incident on the sample. Objects in the sample volume then scatter light, which interferes with the unscattered light to form interference patterns perpendicular to the illumination direction. This image (the hologram) contains the depth information required for three-dimensional reconstruction, and can be captured on a standard imaging device such as a CMOS or CCD camera. The Rayleigh-Sommerfeld back propagation method is employed to numerically refocus microscope images, and a simple imaging heuristic based on the Gouy phase anomaly is used to identify scattering objects within the reconstructed volume. This simple but robust method results in an unambiguous, model-free measurement of the location and shape of objects in microscopic samples.

Digital Inline Holographic Microscopy DIHM of Weakly-scattering Subjects

The three-dimensional locations of weakly-scattering objects can be uniquely identified using digital inline holographic microscopy (DIHM), which involves a minor modification to a standard microscope. Our software uses a simple imaging heuristic coupled with Rayleigh-Sommerfeld back-propagation to yield the three-dimensional position and geometry of a microscopic phase object.

דיגיטלי Inline הולוגרפי מיקרוסקופית (DIHM) של נושאים בחולשת פיזור

Weakly-scattering objects, such as small colloidal particles and most biological cells, are frequently encountered in microscopy. Indeed, a range of ...

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial dysfunction often accompanies and contributes to human disease. Majority of the approaches that have been developed to evaluate mitochondrial function and dysfunction are based on in vitro or ex vivo measurements. Results from these experiments have limited ability in determining mitochondrial function in vivo. Here, we describe a novel approach that utilizes confocal scanning microscopy for the imaging of intact tissues in live aminals, which allows the evaluation of single mitochondrial function in a real-time manner in vivo. First, we generate transgenic mice expressing the mitochondrial targeted superoxide indicator, circularly permuted yellow fluorescent protein (mt-cpYFP). Anesthetized mt-cpYFP mouse is fixed on a custom-made stage adaptor and time-lapse images are taken from the exposed skeletal muscles of the hindlimb. The mouse is subsequently sacrificed and the heart is set up for Langendorff perfusion with physiological solutions at 37 &deg;C. The perfused heart is positioned in a special chamber on the confocal microscope stage and gentle pressure is applied to immobilize the heart and suppress heart beat induced motion artifact. Superoxide flashes are detected by real-time 2D confocal imaging at a frequency of one frame per second. The perfusion solution can be modified to contain different respiration substrates or other fluorescent indicators. The perfusion can also be adjusted to produce disease models such as ischemia and reperfusion. This technique is a unique approach for determining the function of single mitochondrion in intact tissues and in vivo.

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocal scanning microscopy is applied for imaging single mitochondrial events in perfused heart or skeletal muscles in live animal. Real-time monitoring of single mitochondrial processes such as superoxide flashes and membrane potential fluctuations enables the evaluation of mitochondrial function in a physiologically relevant context and during pathological perturbations.

ההדמיה confocal של הבזקים בודדים מיטוכונדריאלי Superoxide בלב שלם או<em&gt; בVivo</em

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial ...

Ex vivo Culture of Mouse Embryonic Skin and Live-imaging of Melanoblast Migration

Melanoblasts are the neural crest derived precursors of melanocytes; the cells responsible for producing the pigment in skin and hair. Melanoblasts migrate through the epidermis of the embryo where they subsequently colonize the developing hair follicles1,2. Neural crest cell migration is extensively studied in vitro but in vivo methods are still not well developed, especially in mammalian systems. One alternative is to use ex vivo organotypic culture3-6. Culture of mouse embryonic skin requires the maintenance of an air-liquid interface (ALI) across the surface of the tissue3,6. High resolution live-imaging of mouse embryonic skin has been hampered by the lack of a good method that not only maintains this ALI but also allows the culture to be inverted and therefore compatible with short working distance objective lenses and most confocal microscopes. This article describes recent improvements to a method that uses a gas permeable membrane to overcome these problems and allow high-resolution confocal imaging of embryonic skin in ex vivo culture6. By using a melanoblast specific Cre-recombinase expressing mouse line combined with the R26YFPR reporter line we are able to fluorescently label the melanoblast population within these skin cultures. The technique allows live-imaging of melanoblasts and observation of their behavior and interactions with the tissue in which they develop. Representative results are included to demonstrate the capability to live-image 6&#160;cultures in parallel.

Ex vivo Culture of Mouse Embryonic Skin and Live-imaging of Melanoblast Migration

We describe the dissection and ex vivo culture of mouse embryonic skin. The culture system maintains an air-liquid interface across the tissue surface and allows imaging on an inverted microscope. Melanoblasts, a component of the developing skin, are fluorescently labeled allowing their behavior to be observed using confocal microscopy.

אקס תרבות Vivo של עור העכבר עוברי וLive-הדמיה של הגירת Melanoblast

Melanoblasts are the neural crest derived precursors of melanocytes; the cells responsible for producing the pigment in skin and hair. Melanoblasts ...

Gap Junctional Intercellular Communication: A Functional Biomarker to Assess Adverse Effects of Toxicants and Toxins, and Health Benefits of Natural Products

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction channels, which is a major intercellular process by which tissue homeostasis is maintained. Interruption of gap junctional intercellular communication (GJIC) by toxicants, toxins, drugs, etc. has been linked to numerous adverse health effects. Many genetic-based human diseases have been linked to mutations in gap junction genes. The SL-DT technique is a simple functional assay for the simultaneous assessment of GJIC in a large population of cells. The assay involves pre-loading cells with a fluorescent dye by briefly perturbing the cell membrane with a scalpel blade through a population of cells. The fluorescent dye is then allowed to traverse through gap junction channels to neighboring cells for a designated time. The assay is then terminated by the addition of formalin to the cells. The spread of the fluorescent dye through a population of cells is assessed with an epifluorescence microscope and the images are analyzed with any number of morphometric software packages that are available, including free software packages found on the public domain. This assay has also been adapted for in vivo studies using tissue slices from various organs from treated animals. Overall, the SL-DT assay can serve a broad range of in vitro pharmacological and toxicological needs, and can be potentially adapted for high throughput set-up systems with automated fluorescence microscopy imaging and analysis to elucidate more samples in a shorter time.

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer technique that measures intercellular communication through gap junction channels. Gap junctional intercellular communication is a major cellular process by which tissue homeostasis is maintained and disruption of this cell signaling has adverse health effects.

גאפ junctional אינטר תקשורת: ביומרקר פונקציונלית להערכת תופעות לוואי של toxicants ורעלים, ואת היתרונות הבריאותיים של מוצרים טבעיים

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction ...

A Buoyancy-based Method of Determining Fat Levels in Drosophila

Drosophila melanogaster is a key experimental system in the study of fat regulation. Numerous techniques currently exist to measure levels of stored fat in Drosophila, but most are expensive and/or laborious and have clear limitations. Here, we present a method to quickly and cheaply determine organismal fat levels in L3 Drosophila larvae. The technique relies on the differences in density between fat and lean tissues and allows for rapid detection of fat and lean phenotypes. We have verified the accuracy of this method by comparison to body fat percentage as determined by neutral lipid extraction and gas chromatography coupled with mass spectrometry (GCMS). We furthermore outline detailed protocols for the collection and synchronization of larvae as well as relevant experimental recipes. The technique presented below overcomes the major shortcomings in the most widely used lipid quantitation methods and provides a powerful way to quickly and sensitively screen L3 larvae for fat regulation phenotypes while maintaining the integrity of the larvae. This assay has wide applications for the study of metabolism and fat regulation using Drosophila.

A Buoyancy-based Method of Determining Fat Levels in Drosophila

Here we present a method to measure organismal fat levels in the third instar (L3) larval stage of Drosophila melanogaster. This method exploits the comparatively low density of fat tissue to differentiate between larvae with altered fat stores. Buoyancy-based analysis is a valuable tool for rapid, reproducible, and economical screening.

שיטה מבוססת חוק ארכימדס של קביעת רמות שומן<em&gt; תסיסנית</em

Drosophila melanogaster is a key experimental system in the study of fat regulation. Numerous techniques currently exist to measure levels of stored fat ...